韩俊永
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：南京军区福州总医院更多>>
- 发文基金：南京军区医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- AKT3基因重组腺病毒表达载体的构建及其对BT474乳腺导管癌细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的构建人AKT3基因的重组腺病毒表达载体，探究其对人乳腺导管癌细胞增殖的影响。方法应用RT-PCR方法从流产胎儿脑组织总RNA中扩增出AKT3eDNA，以XhoI及最g21I酶切位点克隆入腺病毒pShuttle-IRES-hrGFP-1穿梭载体，测序鉴定后与骨架载体PAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组，获得重组腺病毒表达载体pAd．AKT3后，转染293A细胞，进行病毒的包装。荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光，测定病毒效价，Western印迹方法分析细胞内AKT3蛋白质的表达。通过MTr实验，研究AKT3过表达前后BT474乳腺导管癌细胞增殖的变化。结果重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误。重组腺病毒效价为2．6×10^8pfu／ml，重组腺病毒转导后，BT474乳腺导管癌细胞中可检测到AKT3的过表达：Western印迹检测结果显示AKT3融合蛋白在BT474细胞中表达良好。而转导空载体腺病毒及未转导细胞对照中未见有此融合蛋白质条带；MTr结果显示AKT3表达上调的重组腺病毒组，其增殖活性显著高于转导空载体腺病毒组及未转导细胞组，差异具有统计学意义（P〈0．01），而后两者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功地构建了AKT3重组腺病毒表达载体，AKT3过表达可增强BT474乳腺导管癌的增殖，为进一步研究AKT3的功能奠定了基础。
- 韩俊永林炎鸿黄俏佳
- 关键词：基因表达
- Akt3稳定表达细胞株的建立及其对MDA-MB-231细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的 构建人蛋白激酶Bγ（Akt3）基因编码区序列（cDNA）的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法 从流产胎儿脑组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增Akt3 cDNA的全长序列后克隆入pEGFP-N2质粒中,构建成Akt3基因真核表达载体,然后转染入MDA-MB-231细胞中,新霉素筛选稳定转染细胞克隆,通过MTT实验,研究转染Akt3基因前后细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确无误.Western印迹检测结果显示AKT3融合蛋白在MDA-MB-231细胞中表达良好,而转染空载体及未转染细胞对照中未见有此融合蛋白质条带;MTT结果显示AKT3表达上调的稳定克隆组,其增殖活性显著高于空载体稳定转染细胞组及未转染亲代细胞组,差异具有统计学意义（P＜0.01）,而后两者差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 Akt3过表达可增强MDA-MB-231细胞的增殖.
- 韩俊永黄俏佳
- 关键词：基因克隆基因转染基因表达
- AKT3在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞生物学行为影响的研究
- 乳腺癌是世界各地女性中最为常见的恶性肿瘤，也是导致女性死亡的主要原因之一。在查阅大量文献和本室原有工作的基础上，本研究应用免疫组化、腺病毒转导、Western blot、DNA Ladder测定等技术，探讨蛋白激酶Bγ/...
- 韩俊永
- 关键词：基因转染
- 文献传递
