隋进强
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 牛体细胞核移植显微操作环节的优化被引量：7
- 2009年
- 本研究从牛卵母细胞去核方法(纺锤体观测仪法&Hoechst33342染色法)、供体细胞核引入去核卵细胞质的方法(卵细胞质注射法和电融合法)和重构胚胎电融合(3组参数)等3个环节对牛体细胞核移植的显微操作过程及相关参数进行了筛选优化。以核移植胚胎的卵裂率、囊胚发育率作为检测指标,对不同的方法所获得的克隆胚胎的卵分裂率与囊胚发育率进行比较,最后筛选获得1个优化的牛体细胞核移植操作程序,即采用Spindle view系统对牛卵母细胞进行去核操作,将供核体细胞注射到卵周隙,然后通过电融合法将供体核引入去核卵细胞质(电融合参数为1.9kV/cm,脉冲时程10μs,方波2次间隔2s)。以此核移植程序进行牛体细胞核移植实验,自获得克隆胚胎中筛选80枚优质囊胚移植到33头受体牛子宫内,最后2头母牛产下2头克隆牛犊,结果表明利用该优化的显微操作环节进行牛体细胞核移植可以获得体细胞克隆牛犊。
- 雷安民马晓玲高志敏胡勇策隋进强黄伟伟昝林森窦忠英
- 关键词：去核方法电融合
- 牛卵母细胞成熟前基因注射的研究
- 为研究特定基因或蛋白质在牛卵母细胞体外成熟过程中的作用,探索牛卵母细胞体外成熟的分子机理,需要建立一个能够检测基因或蛋白质在牛卵成熟过程中作用的技术平台。本课题从屠宰场采集牛卵巢,选择颗粒细胞层数3层以上、胞质均一的卵丘...
- 隋进强
- 关键词：卵母细胞显微注射MRNA质粒
- 文献传递
- 正常胚胎与核移植重构胚发育中的生物学变化比较被引量：3
- 2012年
- 本文介绍了正常胚胎和核移植重构胚发育过程中的生物学变化,从细胞形态学和分子机理两方面阐述了二者之间的差异,总结了影响核移植重构胚胎发育的主要因素。在细胞形态学上着重探讨了卵子染色体结构变化对于卵重编程作用的影响,在分子水平上对卵子组蛋白与供核细胞组蛋白的置换进行了讨论,理论上为核移植效率的提高提供了借鉴。
- 隋进强高文超左秀荷雷安民
- 关键词：核移植胚胎
- 微量牛卵中H1 foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射被引量：8
- 2009年
- 本研究旨在优化从微量卵中克隆基因的条件,并构建牛H1foo基因真核表达载体。首先将微量（1~5个）卵母细胞裂解后,用改进的RT-PCR方法扩增内参β-actin基因以检测该方法扩增基因的效率,结果表明单卵扩增成功率为80%以上（10/12）,3个、5个卵扩增成功率均达100%。利用该体系从微量（5个）牛卵中克隆得到H1fooCDS全长序列,测序结果显示其与GenBank上公布序列同源性为100%。将牛H1fooCDS连接至pMD19-T载体上,经酶切、测序鉴定正确后定向亚克隆到真核表达载体pVenus上,鉴定正确后命名为pVenus-H1foo。利用脂质体2000将pVenus-H1foo转染Hela细胞,24 h后通过荧光显微镜观察、RT-PCR、Western Blotting分别检测表明其能够正确表达。将H1foo体外转录为mRNA后直接注射卵母细胞,其表达产物能准确定位于卵母细胞及极体的染色体上。结果,成功构建了牛H1foo真核表达载体pVenus-H1foo,为研究该基因在卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。
- 云彦吴苏君隋进强胡勇策雷安民
- 关键词：RT-PCR体外转录
