目的建立ploy（A）聚合酶加尾的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测血清微小RNA（miR）-124a,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-124aploy（A）聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green I实时定量PCR扩增检测。制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,定量血清中miR-124a的表达水平。结果该方法能定量检测血清miR-124a表达水平,熔解曲线呈单峰,PCR扩增产物特异,在103∽106 copies/uL范围内有良好的线性关系（r2=0.999）,并且检测重复性好。糖尿病患者血清中miR-124a表达水平明显高于健康体检者（P〈0.05）。结论所建立的ploy（A）聚合酶加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR方法能敏感、特异地检测血清中miR-124a的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础。
目的：建立Poly（A）加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测血清微RNA-122（miR-122）水平，并初步探讨其临床应用价值。方法选取2013年9月至2014年9月本院就诊的糖尿病患者和健康体检者120例为研究对象，分为糖尿病脂质代谢紊乱组（n=40）、糖尿病非脂质代谢紊乱组（n=40）和对照组（n=40）。提取血清总RNA，miR-122 Poly（A）聚合酶加尾逆转录获得cDNA，进行SYBR Green I实时荧光定量PCR扩增。制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线定量检测血清miR-122水平，进行3组血清miR-122水平的组间比较。结果该方法可定量检测血清miR-122水平，PCR扩增产物特异性好，熔解曲线呈单峰；检测灵敏度为102拷贝/μl，检测线性范围102-107拷贝/μl。高、中、低浓度样本重复性检测的批内变异系数（CV）分别为2.23%、2.48%和2.75%，其批间CV分别为5.35%、5.88%和5.72%，显示该方法具有较好的重复性和稳定性。该方法检测糖尿病脂质代谢紊乱组、糖尿病非脂质代谢紊乱组和对照组的血清miR-122水平分别为（4.85±3.68）×10^3拷贝/μl、（3.06±1.86）×10^3拷贝/μl和（1.03±0.82）×10^3拷贝/μl，糖尿病脂质代谢紊乱组血清miR-122水平高于糖尿病非脂质代谢紊乱组和对照组（均P〈0.01），糖尿病非脂质代谢紊乱组血清miR-122水平高于对照组（P〈0.05）。结论成功建立Poly（A）加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测血清miR-122水平，该方法的灵敏度高、特异性和重复性均较好。
目的建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测血清miR-7,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-7ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green Ⅰ实时定量PCR扩增检测。制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,绝对定量血清中miR-7的表达水平。结果该方法能定量检测血清miR-7表达水平,熔解曲线呈单峰,PCR扩增产物特异,在10~3copies/uL至10~6copies/uL范围内有良好的线性关系(r^2=0.995),并且检测重复性好。糖尿病患者血清中miR-7表达水平明显高于健康体检者(P<0.05)。结论所建立的ploy(A)聚合酶加尾SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法能敏感、特异地检测血清中miR-7的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础。
