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Snail增强乳腺癌细胞MCF-7中P-gp介导的多药耐药被引量：4: 2010年; 目的探讨乳腺癌细胞中Snail过表达与P-gp之间的关系,揭示EMT对乳腺癌细胞多药耐药的影响。方法构建Snail真核表达载体pCDNA3.1-Snail,将载体转染人乳腺癌细胞MCF-7后用阿霉素对细胞进行诱导。利用细胞毒性实验(MTT)、阿霉素外排实验对耐药细胞系的耐药状况进行评价;通过流式细胞术和Real-time PCR分别测量耐药细胞系中P-gp和MDR1 mRNA,Snail mRNA的表达。结果由细胞毒性实验和阿霉素外排实验的结果显示,MCF-7/Snail细胞经阿霉素诱导后相对耐药指数升高至109.2,细胞内荧光强度降至7.1(P<0.05);Real-time PCR显示相对于MCF-7,MCF-7/Snail细胞中的MDR1 mRNA,Snail mRNA的表达明显升高与流式细胞术显示的P-gp升高相一致。结论转染Snail真核表达载体后,MCF-7/Snail细胞的耐药性较MCF-7细胞明显升高。; 刘传亮王辉陈伟娟王晓杰李洪利赵修世李文通; 关键词：多药耐药 SNAIL 乳腺癌 P糖蛋白上皮间质转化

Cx26和Cx43在乳腺癌中的表达及与上皮间质转化的关系被引量：2: 2010年; 目的研究连接蛋白26(Connexin26,Cx26)和连接蛋白43(Connexin43,Cx43)在乳腺癌中的表达及与上皮间质转化(EMT)的关系。方法应用免疫组织化学方法检测70例浸润性导管癌、10例乳腺良性病变(乳腺纤维腺瘤)患者中Cx26和Cx43的表达情况,并分析其与EMT的关系。结果Cx26和Cx43在浸润性导管癌中表达的阳性率分别为31%(22/70)和47%(33/70),与乳腺纤维腺瘤中相比,Cx26和Cx43在浸润性导管癌中的表达明显降低(P<0.05);在浸润性导管癌中Cx26和Cx43的表达与EMT状态呈负相关(r=-0.26,r=-0.24)。结论Cx26和Cx43与EMT状态呈负相关,可作为乳腺浸润性导管癌中EMT发生的有价值的标记物。; 王晓杰张式暖李文通陈伟娟王辉; 关键词：连接蛋白26 连接蛋白43 上皮间质转化乳腺癌

EMT经p38-MAPK调节乳腺癌MCF-7细胞P-gp介导的多药耐药被引量：6: 2010年; 目的:探讨乳腺癌细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与P-糖蛋白(P-glucoprotein,P-gp)介导的多药耐药(multidrug resistance,MDR)的关系及其可能的机制。方法:将携Snail基因的真核表达载体pcDNA-Snail转染人乳腺癌细胞MCF-7,用多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导各组细胞耐药。免疫细胞荧光检测上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间质标志物波形蛋白(vimentin)以及P-gp的表达,MTT检测耐药细胞的增殖,RT-PCR检测Snail、MDR1、p38-MAPK mRNA的表达。结果:细胞免疫荧光显示,转染pcDNA-Snail载体后,MCF-7细胞发生EMT,E-cadherin表达显著降低,vimentin表达显著升高;P-gp在发生EMT的MCF-7细胞中表达显著升高。经DOX诱导,MCF-7/Snail细胞的耐药能力较MCF-7/DOX细胞显著增强(P<0.05)。RT-PCR显示,MCF-7细胞发生EMT后,p38-MAPK表达显著升高(P<0.05),MDR1表达较亲本细胞明显升高(P<0.01)。结论:MCF-7细胞发生EMT后,可能通过p38-MAPK引发P-gp介导的MDR。; 唐勇王辉陈伟娟李文通李洪利赵修世; 关键词：SNAIL基因多药耐药 P-糖蛋白

SNAIL诱导MCF-7细胞上皮间质转化致阿霉素耐药性增加被引量：1: 2010年; 目的观察SNAIL诱导后MCF-7细胞上皮间质转化(EMT)的发生和P-糖蛋白(P-GP)的表达,探讨EMT致乳腺癌细胞耐药性增强的作用。方法构建SNAIL真核表达载体,转染MCF-7细胞,用免疫荧光检测上皮标记物E-钙黏素、间质标志物波形蛋白的表达;MTT法评价细胞对阿霉素(ADM)的耐药性;流式细胞术检测细胞中P-GP和SNAIL的表达;Real Time PCR检测SNAIL、E-钙黏素、波形蛋白、MDR1mRNA的表达。结果MCF-7细胞转染SNAIL后,E-钙黏素表达较亲本细胞显著降低,波形蛋白表达显著升高(P<0.01),对ADM的耐药性及SNAIL、P-GP的表达也显著升高(P<0.01),与Real Time PCR结果一致。结论SNAIL诱导MCF-7细胞EMT后,增强了乳腺癌细胞中P-GP介导的对ADM的耐药。; 王辉张义军陈伟娟李文通李莎莎丁保清; 关键词：多药耐药上皮间质转化

丝瓜络对慢性心力衰竭大鼠肾脏水通道蛋白-2免疫荧光表达的影响被引量：6: 2011年; 目的观察中药丝瓜络（RLF）对慢性充血性心力衰竭（CHF）大鼠尿量和肾脏水通道蛋白-2（ AQP-2）免疫荧光表达的影响,探讨RLF的利尿作用及机制.方法采用异丙肾上腺素（ISO）法制备慢性充血性心衰大鼠模型,实验分为4组：正常组、CHF组、RLF大剂量组（10g·kg-1·d-1）和RLF小剂量组（5g·kg-1·d-1）.连续灌胃给药28d,末次给药后30min,采用足趾肿胀法,测量大鼠后肢足趾容积；代谢笼法,连续记录24h尿量；取肾脏髓质,免疫荧光法检测AQP-2的表达.结果丝瓜络连续用药可显著增加心衰大鼠尿量,减少后肢足趾容积（P＜0.05）,并可明显抑制心衰大鼠肾髓质AQP-2免疫荧光的过度表达.结论RLF对心衰大鼠有一定利尿作用,其分子生物学机制可能是通过降低肾脏髓质AQP-2蛋白的表达,从而减少水的重吸收.; 王辉康白许莉莉房春燕韩慧蓉蒲旭辉; 关键词：丝瓜络心衰慢性尿量

慢性阻塞性肺疾病血清神经激肽A的变化及其作用被引量：1: 2011年; 目的通过探讨神经激肽A（NKA）在不同程度慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者中的变化及其与肺功能的关系,研究NKA在COPD中的作用.方法用酶联免疫方法检测血清NKA含量,同时分析血清NKA含量与一秒钟用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%pre）及与BODE指数的相关关系.结果 AECOPD患者、COPD缓解期患者血清NKA浓度（pg/ml）分别为：367.09±173.41,163.47±104.0,与健康对照组血清NKA浓度（60.25±19.33）比较,P〈0.05;不同程度AECOPD患者血清NKA浓度比较,t=4.74（P〈0.05）;AECOPD患者血清NKA浓度与FEV1%pre呈负相关,r=-0.333（P〈0.05）;AECOPD与COPD缓解期患者血清NKA浓度与BODE指数均呈正相关,rs=0.351,rs=0.384,（P〈0.05）.结论 NKA与COPD病情关系密切,提示其参与了COPD的发病过程,通过加重气道痉挛及重塑从而影响患者肺功能可能是其作用机制之一.; 冯海霞郑世良孙学东李蕾崔慎茹侯程浩王辉; 关键词：神经激肽A 肺疾病阻塞性

pSUPER-2H1重组双靶向干扰载体的构建及鉴定: 2009年; 目的构建含有双H1启动子的重组pSUPER-2H1质粒载体,为进一步构建同时干扰LRP和P-gp基因的RNAi载体做基础。方法以pSUPER质粒中原有的H1启动子为模板PCR扩增H1启动子,将扩增的H1启动子连接到Pumc-T载体上,重组的质粒载体命名为Pumc-T-H1。将pSUPER质粒与Pumc-T-H1利用xho Ⅰ和sal Ⅰ进行双酶切,将两者的酶切产物连接后转化大肠杆菌DH5α,抽提后的重组质粒载体命名为pSUPER-2H1,并对其进行酶切鉴定和测序。结果经酶切鉴定及测序证实克隆入pSUPER质粒的H1启动子与pSUPER质粒中原有的H1启动子序列一致,从而成功构建了pSUPER-2H1重组质粒。结论 pSUPER-2H1重组质粒的构建为下一步LRP和P-gp基因双干扰RNAi重组质粒的构建奠定了基础。; 王辉张义军陈伟娟; 关键词：RNA干扰基因重组基因治疗

Snail沉默和过表达对ADM诱导MDR作用的研究: 2010年; 目的:研究乳腺癌细胞MCF-7中Snail表达与多柔比星(ADM)诱导的多药耐药(MDR)的关系,揭示上皮-间质转化(EMT)对乳腺癌细胞多药耐药的影响。方法:构建Snail真核表达载体pCDNA-Snail和RNA干扰载体pSUPER-siRNA,将载体转染乳腺癌细胞MCF-7;用多柔比星对细胞进行诱导。利用细胞毒性实验和多柔比星外排实验,对细胞的耐药状况进行评价;通过流式细胞术测量耐药细胞中P-糖蛋白(P-gp)表达,Real-TimePCR测量耐药细胞中MDR1、SnailmRNA的表达。结果:细胞毒性实验和多柔比星外排实验结果显示,细胞转染pCDNA-Snail和pSUPER-siRNA后经多柔比星诱导相对耐药指数(RR)分别为111.3和13.7,细胞内药物荧光强度分别为9.30±0.97和87.40±9.13;Real-TimePCR显示相对于未转染细胞,转染pCDNA-Snail后MDR1,SnailmRNA的表达明显升高,P<0.01,P-gp表达也显著升高,P<0.01;转染pSUPER-siRNA细胞则出现相反变化(P<0.01)。结论:Snail沉默和过表达分别使乳腺癌细胞的耐药能力降低或升高。; 王辉张义军陈伟娟王晓杰李莎莎丁保清; 关键词：RNA 小分子干扰 RNA

乳腺癌上皮-间质转化后引发BCRP介导的多药耐药的研究被引量：15: 2010年; 背景与目的:研究发现肿瘤的侵袭浸润和转移增强是上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)所致,而EMT的发生也与肿瘤细胞多药耐药现象的发生密切相关。本研究通过分析乳腺癌组织和细胞中EMT与乳腺癌耐药蛋白表达的相关性,探讨EMT对乳腺癌中乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)介导多药耐药的影响。方法:免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中Snail、BCRP的表达;构建Snail真核表达载体pCDNA3.1-Snail,转染至MCF-7细胞,采用免疫荧光、Westernblot、Real-timePCR检测转录抑制因子snail、上皮标志物E-钙粘素、间质标志物vimentin以及多药耐药蛋白BCRP的表达;MTT法检测细胞对米托蒽醌的耐药指数。结果:免疫组化结果显示乳腺癌组织中Snail、BCRP的表达呈显著相关;免疫荧光、Westernblot、Real-timePCR显示与亲本MCF-7细胞相比,转染Snail后的MCF-7细胞中E-cadherin表达水平明显降低,而snail、vimentin和BCRP的表达水平明显增加;MTT结果显示细胞对米托蒽醌的耐药指数增加至9.93。结论:转染snail真核表达载体pCDNA3.1-snail可使乳腺癌MCF-7细胞发生EMT,并导致细胞中BCRP表达增加,引发BCRP介导的多药耐药。; 陈伟娟王辉唐勇刘传亮李洪利李文通; 关键词：乳腺肿瘤多药耐药上皮-间质转化

丝瓜络对慢性心力衰竭大鼠心肌钙调蛋白mRNA表达的影响被引量：2: 2013年; 目的研究丝瓜络(RLF)对慢性心力衰竭大鼠心肌钙调蛋白(CaM)mRNA表达的影响,初步探讨RLF改善心衰大鼠心功能的可能作用机制及与CaM的关系。方法选择Wista大鼠,采用异丙肾上腺素法复制慢性心力衰竭模型,分别给予RLF 5 g.kg-1.d-1和10 g.kg-1.d-1,灌胃,连续给药28 d。采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以β-actin为内参,系统观察RLF对心衰大鼠心脏CaM基因表达的影响。结果与心衰模型组比较,RLF大剂量连续用药可降低心衰大鼠心脏CaM mRNA的表达(P<0.05)。结论 RLF可通过减少慢性心衰大鼠心肌CaM mRNA的表达,从而改善心衰大鼠的心功能。; 房春燕蒲旭辉孙文启许莉莉韩慧蓉王辉康白; 关键词：丝瓜络慢性心力衰竭钙调蛋白

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王辉

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