王方昆
- 作品数：46 被引量：78H指数：4
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技计划项目山东省高等学校教学改革研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生文化科学理学更多>>
- 一例鸭金黄色葡萄球菌病微生物质谱方法快速诊断被引量：1
- 2020年
- 某蛋鸭场病鸭趾底肿胀和溃烂,关节肿胀,充满脓液,关节面溃烂。为确定引起病鸭死亡病因,从病死鸭脚掌关节滑囊液中分离到细菌,采用细菌培养纯化、布鲁克微生物MALDI-TOF质谱仪鉴定及药物敏感性试验对病原进行研究。结果显示,病原为金黄色葡萄球菌;对氟苯尼考表现敏感,对恩诺沙星、磷霉素、林可霉素表现耐药。本研究分离鸭源金黄色葡萄球菌具有较强的致病性和多重耐药性,为金黄色葡萄球菌感染鸭所致疾病的诊治提供参考。
- 刘雨刘蒙达王晓文王方昆
- 关键词：金黄色葡萄球菌
- 一种布鲁氏菌特异性核酸检测方法
- 本发明公开了一种布鲁氏菌特异性核酸检测方法，属于细菌检测和分子生物学技术领域。本发明建立了检测布鲁氏菌病的普通PCR和荧光定量PCR检测方法。结果显示：普通PCR方法对于布鲁氏菌可以特异性地扩增出目的片段，对于6株常见非...
- 王方昆商营利苏亚昕陈丽君吴瑶
- 一种鸡柔嫩艾美尔球虫微线蛋‑2突变体EtMIC2‑1130
- 本发明涉及基因工程和遗传工程领域，提供了一种鸡柔嫩艾美尔球虫微线蛋‑2突变体EtMIC2‑1130，该突变体是以野生型柔嫩艾美耳球虫SD‑01的EtMIC2(GenBank:KC333870.1)为基础蛋白质进行体外定向...
- 赵孝民陈正涛韩林臻李宏梅王方昆
- 猪流感诊断方法研究进展被引量：13
- 2006年
- 猪流感即猪流行性感冒,是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。其特征为突发,高热,精神沉郁,食欲废绝,呼吸困难,阵发性咳嗽。猪流感的病死率不高,病猪可康复。近年来,随着集约化养猪规模的不断扩大,猪流感对养猪业构成了较大的威胁。此外,猪流感在人流感和禽流感之间发挥着关键性作用,具有重要的公共卫生意义。自1918年首次报道以来,猪流感一直受到人们的广泛关注。研究快速、科学、准确的诊断方法,对于本病的检测和控制具有重要的意义。除常规的临床症状及病理变化诊断外,流感的确诊依赖于实验室诊断方法。文章从病原学、血清学和分子生物学等几个方面对该病的诊断研究进展做了综述。
- 王方昆王一成袁秀芳徐丽华
- 关键词：猪流感
- 马耳他型布氏杆菌弱毒疫苗株M5-90致弱分子机制的研究
- 布病尤其是由B.melitensis感染所致,仍然是目前世界上最重要的一种人畜共患病,每年大约有50多万病例报道。迄今为止,采用多种方法开发和研究防控布病的疫苗,但是还没有一种安全有效的疫苗能应用于人的布病防控,当前的主...
- 王方昆
- 关键词：布氏杆菌弱毒疫苗分子机制免疫机制
- 金莲花及花椒水提物体外抗鸽源禽毛滴虫活性被引量：6
- 2015年
- 为研究金莲花、花椒水提物体外抗鸽毛滴虫活性及对鸡胚成纤维细胞(CEF)的毒性,使用不同质量浓度的金莲花、花椒水提物分别与鸽毛滴虫共同孵育一定时间,同时设不同质量浓度的甲硝唑做为对照,分别计算药物对虫体的相对抑制率和半数抑制浓度(IC50);再采用MTT法检测药物对CEF的半数毒性浓度(TC50),计算两种中药水提物的选择指数(SI)及安全范围。结果表明,金莲花、花椒水提物体外作用48h对鸽毛滴虫的IC50分别为0.911、1.98g/L;对CEF的TC50分别为1.915、6.37g/L;选择指数分别为3.22、2.10。与甲硝唑相比,金莲花、花椒水提物质量浓度分别≥16、20g/L时与甲硝唑的抗虫活性接近。以上结果可以看出,一定质量浓度的金莲花、花椒水提物均具有一定的抗鸽毛滴虫活性,且细胞毒性较低,两者选择指数均大于1,为有效药物。
- 孙静静姜夕玥张万福贾雪莲王方昆李宏梅赵孝民
- 关键词：鸽毛滴虫花椒细胞毒性
- 一种布拉氏酵母菌表面展示系统及其构建方法
- 本发明涉及一种蛋白表面展示系统，具体提供了一种以布拉氏酵母菌为表面展示平台表达外源蛋白质的表面展示系统，本系统从布拉氏酵母菌，购自法国百科达制药厂，进口药品注册证号为s20040038，的DNA组中扩增得到AGA1基因以...
- 赵孝民王甜甜孙慧王方昆李宏梅
- 文献传递
- H9N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及反应原性分析被引量：3
- 2008年
- 【目的】对H9N2亚型猪流感病毒NS1(nonstructural protein1)基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增了猪流感病毒(H9N2)的NS1基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)上构建成重组质粒pET-NS1,转化受体菌E.coliBL21-DE3感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出正确重组质粒转化子。【结果】经终浓度5mmol·L-1乳糖诱导,SDS-PAGE电泳结果显示,重组蛋白NS1得到大量表达,分子质量约为26kD。经Western-blotting分析,表达蛋白能与阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应;ELISA检测显示,在被检血清稀释1280倍时,阳性血清的OD650值大约是阴性血清的3倍,差异明显。【结论】重组蛋白NS1表达量高,易于纯化并且具有良好的血清学反应的特异性。
- 王方昆袁秀芳王一成张存徐丽华刘思当
- 关键词：猪流感病毒NS1基因反应原性
- 用于检测沙门氏菌属的特异性引物及其试剂盒
- 本发明公开了一种用于检测沙门氏菌属的特异性引物及其试剂盒，属于致病菌检测技术领域。本发明从沙门氏菌基因组中发现了一段549bp长度的STM1410基因序列，该基因序列与获取的570个沙门氏菌种属基因组均有高度的同源性，与...
- 王方昆商营利刘聪孙淑红于兰萍杨鑫萍
- 文献传递
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素基因的克隆与表达被引量：16
- 2007年
- 以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清2型标准菌株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增ApxⅣ毒素基因特异片段1.5 kb左右,将PCR产物纯化后与pMD18-T连接并测序,结果该片段的碱基序列与GenBank中标准株序列的同源性为98%。随后将该片段亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,经鉴定后得到重组质粒pET-ApxⅣ,将此重组质粒转化到受体菌BL21-DL3中,并用诱导剂乳糖进行诱导表达,5 h后表达达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白约为61 000。经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。
- 王方昆王一成袁秀芳徐丽华
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌克隆
