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王希菊

作品数：1 被引量：5H指数：1
供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
相关领域：生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学

主题

  • 1篇淀粉
  • 1篇海栖热袍菌
  • 1篇Α-淀粉酶
  • 1篇COLI

机构

  • 1篇江南大学

作者

  • 1篇蒋宇
  • 1篇邵蔚蓝
  • 1篇王希菊

传媒

  • 1篇微生物学通报

年份

  • 1篇2005
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E·coli中的高效表达被引量：5
2005年
为解决密码子偏好性差异造成的表达水平低下问题,采取了3种手段提高海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E.coli中的表达水平。用PCR方法从海栖热袍菌(Therm otoga maritima)基因组DNA中扩增出胞外α-淀粉酶A的完整基因amyA,插入表达载体pET-20(b)中构建成质粒pET-amyA;运用基因工程手段将amyA基因富含稀有密码子的信号肽进行切除,将不含信号肽的amyAⅠ基因插入pET-20(b)中构建成质粒pET-amyAⅠ;用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增出argU基因,插入pET-amyAⅠ中构建成质粒pET-amyAⅡ。将重组质粒分别转化到E.coliJM109(DE3),并将重组质粒pET-amyAⅠ转化E.coliBL21-CodonP lus(DE3)-R IL。通过IPTG诱导测酶活性:在E.coliJM109(DE3)中表达的重组酶(pET-amyA)、(pET-amyAⅠ)、(pET-amyAⅡ)的酶活分别是1658.0 U/mL、6721.7 U/mL、8904.5 U/mL,在E.coliBL21-CodonP lus(DE3)-R IL中表达的重组酶(pET-amyAⅠ)的酶活是13867.7 U/mL。表明通过这些手段能大幅提高T.maritima胞外α-淀粉酶在E.coli中的表达水平。
王希菊蒋宇邵蔚蓝
关键词：海栖热袍菌Α-淀粉酶
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