王丽梅
- 作品数：23 被引量：91H指数：6
- 供职机构：中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市青年科技启明星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程政治法律更多>>
- 硫酸多糖在介导胶质细胞源性神经生长因子神经营养活性中的作用被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨硫酸多糖在介导胶质细胞源性神经生长因子神经营养活性中的作用。资料来源:应用计算机检索Medline1994-09/2005-02与胶质细胞源性神经生长因子和硫酸多糖相关文献,检索词“GDNF,sulfatepolysaccha-rideandsignaling”,并限定语言种类为English,以及中文全文数据库CNKI1994-09/2005-04期间的文章,限定文章语言种类为中文,检索词“胶质细胞源性神经生长因子,硫酸多糖”。资料选择:对资料进行初审,选出包含研究目的的文献,筛除与目的无关的文献。选择以胶质细胞源性神经生长因子,硫酸多糖为主要研究对象的文章30余篇。内容相似的,以近几年发表在较权威杂志者优先。资料提炼:共找出相关性最强的文献29篇,并查找全文,其中5篇关于硫酸肝素氨基葡聚糖的结构,12篇讲述硫酸肝素氨基葡聚糖介导胶质细胞源性神经生长因子信号转导,5篇关于C-Ret的磷酸化与胶质细胞源性神经生长因子信号转导,7篇关于硫酸肝素活性片段及其修饰与胶质细胞源性神经生长因子信号转导。资料综合:利用所查文献对硫酸多糖在介导胶质细胞源性神经生长因子神经营养活性中的作用进行综合分析。胶质细胞源性神经生长因子的信号转导需要硫酸肝素的介导,而这一过程可以从C-Ret的磷酸化来体现。硫酸肝素寡糖片段的大小及其硫酸化修饰对胶质细胞源性神经生长因子的信号转导至关重要。结论:硫酸多糖可促进胶质细胞源性神经生长因子介导的神经营养作用,其中2-O硫酸化基团的存在尤为重要。
- 杨新颖王丽梅戴功耿美玉
- 关键词：神经生长因子类多糖类信号传导
- PACAP促PC12细胞突起生长的分子机制被引量：2
- 2001年
- 垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)具有广泛的生理功能。近年来的研究发现 ,PACAP具有重要的神经营养作用。 PACAP可通过激活多条细胞内信号转导通路 ,促使 PC12细胞突起生长 ,使其向神经元样细胞分化。本文综述了 PACAP引起 PC12细胞突起生长的信号转导通路 ,有助于深入了解
- 王丽梅陈哲宇路长林何成
- 关键词：垂体腺苷酸环化酶激活肽突起生长信号转导PC12细胞
- 人血小板源性生长因子B链基因的克隆表达及其对猫角膜内皮细胞体外增殖的影响被引量：9
- 2006年
- 目的构建血小板源性生长因子B(PDGF B)原核表达载体,表达足量的PDGF BB蛋白,作用于体外培养的猫角膜内皮细胞,观察角膜内皮细胞增殖情况。方法从健康剖宫产妇胎盘组织中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT PCR),扩增出PDGF BcDNA,将其克隆至含T7启动子的质粒pET28a(+)中,构建表达质粒pET PDGF B,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BL PDGF B,进行PDGF BB蛋白的表达,以Ni2+NTA树脂对表达蛋白纯化、复性;将得到的PDGF BB蛋白作用于体外培养的猫角膜内皮细胞,用MTT法分析其对细胞增殖的影响;通过倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态变化以及细胞内部超微结构。结果经基因测序证明,成功构建出pET PDGF B质粒;凝胶自动扫描分析表明,PDGF BB在BL21(DE3)大肠杆菌中得到了高效表达,表达的PDGF B单体蛋白经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE),显示了1条特异蛋白带,相对分子质量约为27000;MTT法证明所表达的PDGF BB蛋白可促进体外培养的猫角膜内皮细胞增殖。结论pET PDGF B原核表达载体的成功构建和PDGF BB蛋白制备纯化为生产活性PDGF BB蛋白及其进一步功能研究奠定了基础。PDGF BB蛋白具有促进猫角膜内皮细胞增殖的作用。
- 罗文娟刘美光王传富王丽梅
- 关键词：血小板源性生长因子内皮细胞细胞分裂
- GFRα1与GDNF结合位点的研究
- GFRα1与GDNF结合位点的研究
胶质细胞源性神经营养因子/(GDNF/)对多巴胺能神经元、运动神经元、感觉神经元、肠道神经元等多种神经元具有促进存活及保护作用，它还能促进肾脏的发育和精原细...
- 王丽梅
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子PC12细胞缺失突变定点突变
- 文献传递
- 关于阿尔茨海默病的机制研究:Mint2基因在PC12细胞中的表达功能及其作用的初步研究
- 2004年
- 目的:获得高表达Mint2蛋白的PC12稳定表达株,观察Mint2蛋白对PC12细胞形态的影响,深入研究阿尔茨海默病的发病机制。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达载体pcDNA3.1A-Mint2;采用脂质体lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选稳定克隆;用RT-PCR和Westernblot检测外源基因Mint2在PC12细胞中的转录及表达,并观察Mint2蛋白对PC12细胞形态的影响。结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-Mint2;并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株;Mint2对PC12细胞具有明显的促分化和促胞体增大的神经营养作用。结论:Mint2可在PC12细胞中有效表达,目对PC12细胞形态有明显影响,这为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础。
- 魏传银郑舟军陈雪红路长林王丽梅
- 关键词：PC12细胞阿尔茨海默病真核表达载体基因PCDNA3亚克隆
- 大鼠GDNF基因的克隆表达及对PC12工程细胞的影响被引量：3
- 2003年
- 克隆与表达大鼠胶质细胞源性神经营养因子 (glialcellline derivedneurotrophicfactor,GDNF)并观察其对PC12工程细胞的影响。从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GDNFcDNA。构建表达质粒pET GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导GDNF表达并在Ni2 + NTA柱上用一步复性法纯化和复性。把PCDNA3 0 GFRα1和pcDNA3 0 RET质粒双转染入PC12细胞 ,G4 18筛选稳定克隆 ,构建PC12工程细胞。用GDNF刺激工程细胞 ,3天后观察其存活和分化。大鼠GDNFcDNA的克隆与表达获得成功 ,纯化和复性的重组GDNF蛋白可显著增强PC12 GFRα1 RET工程细胞的存活和分化。初步明确GDNF诱导PC12工程细胞存活和分化是通过RET 依赖途径。
- 王丽梅魏传垠陈雪红张磬陈哲宇丁达夫路长林
- 关键词：GDNF基因神经营养因子基因表达
- Tat蛋白结构与功能的研究进展被引量：21
- 2005年
- 艾菁王丽梅夏威耿美玉
- 关键词：TAT蛋白调控蛋白人类免疫缺陷病毒1型转录细胞
- 胶质细胞源性神经营养因子(△N39)-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究
- 2006年
- 为了研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在中枢神经系统疾病中的治疗应用,运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF(!N39)活性片段.将HIV-1Tat蛋白转导区(proteintransductiondomain,PTD)的9个碱性氨基酸49RKKRRQRRR57模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF("N39)活性片段融合表达,获得纯度达95%以上的GDNF(#N39)-R9融合蛋白.将GDNF、GDNF($N39)、GDNF(%N39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFR&1和Ret的PC12细胞中,观察它们的神经营养活性和毒性.运用脑微血管内皮细胞株B-Endo3,观察GDNF(’N39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能;运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障,Transwell法检测Tat-GDNF((N39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力.结果显示:GDNF()N39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性,促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFR*1和Ret受体的PC12-GFR+1-Ret细胞株的存活,没有显示毒性,并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.
- 崔敏潘新王丽梅
- 关键词：蛋白质转运血脑屏障
- 多聚唾液酸转移酶研究进展被引量：9
- 2005年
- 多聚唾液酸(polysialic acid,PSA)是一类线性、均一多聚α2,8连接唾液酸的独特碳水化合物,它主要通过典型的N-连接糖苷键附着在脊椎动物神经系统神经黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)上。PSA通过改变NCAM的黏附性调节神经细胞发育、神经导向以及突触形成,从而在神经发育中起关键作用。PSA表达的调节具有时间和结构依赖性,NCAM的唾液酸化是由两种多聚唾液酸转移酶(polysialyltrans ferases)-ST8Sia II(STX)和ST8Sia IV(PST)所催化,它们都属于6个基因编码的α2,8唾液酸转移酶家族。STX和PST都可将多个唾液酸残基转移到含有NeuNAcα2-3(或6)Galβ1-4GlcNAcβ1-R结构的N糖链受体上;两种酶共同作用时远远大于一种酶形成的PSA量。总之,多聚唾液酸转移酶可调节PSA的合成并参与了脊椎动物的神经发育。
- 戴功王丽梅杨新颖耿美玉
- 关键词：转移酶神经系统脊椎动物神经发育PSAACID
- 胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因的克隆表达及其活性研究被引量：2
- 2002年
- 为了获得重组胶质细胞源性神经营养因子受体α1(glialcellline derivedneurotrophicfactorreceptoralpha1,GFRα1)并研究其生物学活性 ,从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GFRα1cDNA .将GFRα1cDNA克隆至含T7启动子的质粒 pET 2 8a (+)中 ,构建表达质粒 pET GFRα1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得表达菌株BLGFRα1.表达菌株经 1mmol/LIPTG诱导 3～ 5h后 ,GFRα1蛋白表达 ,并形成包涵体 .凝胶自动扫描分析表明 ,GFRα1表达量占全菌总蛋白的 2 1 5 % ,用Ni2 + NTA树脂纯化和复性后 ,纯度达 90 %以上 。
- 王丽梅陈哲宇朱伟张磬黄爱军路长林何成
- 关键词：克隆活性基因表达PC12细胞
