熊宇
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
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- CRX基因诱导Müller细胞源性干细胞定向分化为光感受器细胞的实验研究被引量：5
- 2018年
- 目的研究外源性视锥视杆细胞同源盒(CRX)基因是否能够诱导体外培养的视网膜Müller细胞源性干细胞向光感受器细胞定向分化。方法实验研究。体外培养、扩增出生5-7d昆明小鼠视网膜Müller细胞,通过无血清培养去分化为干细胞。采用免疫细胞化学法分别鉴定Müller细胞(GS和Vimentin)和干细胞(Nestin和Sox2)标志物的表达。取第2代祖细胞分为3个组:空白对照组、空载体组[采用只含绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒转染细胞]、CRX组(用含GFP+CRX基因的慢病毒转染细胞)。诱导分化7d后,采用q-PCR、免疫印迹法检测光感受器细胞标志CRX蛋白、视紫红质(Rhodopsin)、感光蛋白S-opsin的表达差异。组间均数的两两比较采用独立样本t检验。结果体外培养的Müller细胞96.03%±1.21%同时表达GS和Vimentin标志物,去分化后表达干细胞标志物Nestin和Sox2。CRX诱导分化7d,CRX和Rhodopsin表达均明显增加,部分细胞发生神经元样改变。CRX组、空载体组及空白对照组CRXmRNA相对表达量分别为10.830±2.301、1.214±0.469、1.000±0.576,CRX组与空白对照组相比,差异有统计学意义(t=1.57,P=0.02),空载体组与空白对照组相比,差异无统计学意义(t=0.29,P=0.84)。CRX组、空载体组及空白对照组RhodopsinmRNA相对表达量分别为26.410±16.180、1.301±0.401、1.000±0.473,CRX组与空白对照组相比,差异有统计学意义(t=4.15,P=0.01),空载体组与空白对照组相比,差异无统计学意义(t=0.49,P=0.80)。CRX组、空载体组、空白对照组CRX蛋白相对表达量分别为1.258±0.358,0.471±0.168,0.442±0.152。未检测到S-opsin的表达。结论CRX基因能够诱导小鼠Müller细胞源性干细胞定向分化为视杆细胞,表明Müller细胞可以作为视网膜光感受器细胞替代治疗的内源性种子细胞。
- 姬红培姬红培熊宇熊宇宋伟涛宋伟涛周蓉蓉周蓉蓉
- 关键词：MÜLLER细胞干细胞分化光感受器
- 玻璃体切除术后高眼压的原因及处理被引量：7
- 2016年
- 玻璃体切除术后高眼压的危险因素是多方面的,主要与病情复杂性、眼内填充物有关,因此需要根据危险因素和发病机制针对性控制术后高眼压;另外通过术前筛查高危人群,术中选择合适手术方式,术后密切监测眼压有助于预防和减少术后高眼压的发生。一旦发现高眼压应及时对症治疗,采用抗青光眼药物或手术等控制眼压,从而保护视神经和视功能。
- 熊宇夏晓波
- 关键词：玻璃体切除手术高眼压
- 缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子干扰性RNA抑制鼠视网膜新生血管的研究
- 2008年
- 目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）小片段干扰性RNA（siRNA）对小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法本研究采用随机对照方法。构建HIF-1α siRNA重组质粒。C57BL／6J小鼠玻璃体腔注射增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达质粒pEGFP-N1，1d后视网膜铺片观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达。选7天龄C57BL／6J小鼠90只，17只为正常组，73只建立氧诱导的视网膜新生血管模型，分为模型对照组、空载体组和基因治疗组（HIF1α siRNA组、VEGF siRNA组及共转染组）。于出氧舱前1d，向空载体组小鼠玻璃体腔注射空载体质粒；HIF—1α siRNA组注射HIF—1α siRNA，VEGF siRNA组注射VEGF165 siRNA，共转染组注射HIF1α siRNA＋VEGF165 siRNA。采用荧光造影视网膜铺片方法观察血管形态变化；制作组织切片计算突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数；采用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测视网膜HIF—1α和VEGF的表达。采用单因素方差分析和组间最小显著差法进行统计学分析。结果pEGFP-N1经脂质体LF2000介导转染视网膜细胞后1d即可见GFP表达。基因治疗组较模型对照组新生血管丛明显减少，荧光渗漏明显减轻，其中共转染组效果最明显。基因治疗组[HIF-1α siRNA组为（27．73±2．33）个，VEGF siRNA组为（15．43±3．23）个，共转染组为（8．70±2．88）个]较其他3组突破视网膜内界膜的细胞核数量减少，差异均具有统计学意义（F=3016．527，P〈0．01）。视网膜HIF-1α mRNA及蛋白表达水平：模型对照组（1．08±0．06，0．383±0．009）和空载体组（1．09±0．05，0．386±0．010）较正常组（0．81±0．07，0．035±0．003）上调，而HIF-1α siRNA组（0．46±0．06，0．182±0．008）较模型对照组下调，抑制效率分别为57．4％和52．5％，差异均有统计学意义（F=139．804，2686．001；P〈0．01）。VEGF mRNA及蛋白�
- 蒋剑夏晓波许惠卓熊宇宋伟涛熊思齐李岩
- 关键词：视网膜新生血管化核蛋白质类DNA结合蛋白质类
- 干扰RNA抑制小鼠视网膜HIF-1α蛋白质的表达被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)特异性小片段干扰性RNA(siRNA)对小鼠视网膜HIF-1α蛋白质的抑制作用。方法:构建HIF-1α siRNA重组质粒pSUPERsiHIF-1α。选择7d龄C57BL/6J小鼠24只,其中6只为正常组(A);另18只建立缺氧诱导的视网膜新生血管模型,并随机分为:对照组(B)、空载体组(C组)和基因治疗组(D组),每组6只。于出舱前1d,向空载体组小鼠玻璃体腔注射pSUPER空载体质粒;基因治疗组注射HIF-1αsiRNA重组质粒pSUPERsiHIF-1α。采用FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察4组小鼠视网膜血管形态变化;SP免疫组织化学检测各组间HIF-1α的表达差异。结果:荧光造影视网膜铺片显示,A组整个视网膜血管分布呈均匀网状;B、C组视网膜中周部可见大片无灌注区,见新生血管丛,伴荧光渗漏;D组无灌注区较B,C组明显减少,周边部毛细血管网基本正常,新生血管丛明显减少。免疫组织化学染色显示,A组HIF-1α蛋白表达阴性;B,C组在神经节细胞层呈阳性表达;D组在神经节细胞层呈弱阳性表达,较B,C组明显减少。结论:采用玻璃体腔注射,通过脂质体介导HIF-1αsiR-NA重组质粒pSUPERsiHIF-1α转染视网膜,有效地抑制了缺氧诱导的小鼠视网膜新生血管模型视网膜中HIF-1α蛋白质的表达及视网膜新生血管的形成。
- 熊宇夏晓波许惠卓蒋剑宋伟涛刘双珍许雪亮
- 关键词：小干扰RNA缺氧诱导因子-1Α视网膜新生血管
- HIF-1α和VEGF小干扰RNA在小鼠视网膜中的调控作用
- 蒋剑夏晓波许惠卓熊宇宋伟涛熊思齐李岩
- 脂质体介导缺氧诱导因子-1α特异性小干扰RNA重组质粒对小鼠视网膜新生血管的抑制作用被引量：1
- 2013年
- 【摘要】目的观察脂质体Lipofectamine“2000（LF2000）介导pSUPER为载体的缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）特异性小干扰RNA重组质粒（pSUPERsi HIF-1α）对小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法构建重组质粒pSUPER-1α。将48只7日龄C57BL／6J小鼠分为正常组、空白对照组、空载体组和基因治疗组，每组12只。正常组小鼠在正常空气中饲养。空白对照组、空载体组和基因治疗组建立氧诱导的视网膜新生血管模型。后空白对照组小鼠不再作任何处理。于出舱前ld，空载体组小鼠玻璃体腔注射pSUPER和LF2000脂质体混合物1μl，基因治疗组小鼠玻璃体腔注射重组质粒pSUPER-1α和LF2000脂质体混合物1μl。采用荧光造影视网膜铺片观察各组小鼠视网膜血管形态变化；作病理切片，光学显微镜下计数各组突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数；免疫组织化学染色法检测各组小鼠视网膜中HIF-1α、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达；逆转录聚合酶联反应（RT—PCR）检测各组小鼠视网膜中HIF-1amRNA的表达。结果视网膜铺片荧光显微镜观察显示，正常组小鼠整个视网膜血管分布呈均匀网状；空白对照组、空载体组小鼠视网膜中周部可见大片无灌注区及新生血管丛，伴荧光渗漏；基因治疗组无灌注区及新生血管丛空白对照组、空载体组明显减少，视网膜血管网状结构基本正常。光学显微镜观察发现，空白对照组、空载体组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数较正常组明显增多，差异有统计学意义（F=5850．016，P〈O．05）；基因治疗组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数较空白对照组明显下降，差异有统计学意义（F=3012．469，P〈0．05）。免疫组织化学染色结果显示，HIF-1α蛋白阳性表达主要位于细胞核中，VEGF蛋白阳性表达主要位于细胞浆中。正常组小鼠视网膜中HIF-1α蛋白表达�
- 熊宇夏晓波蒋剑宋伟涛
- 关键词：视网膜新生血管化脂质体基因转移技术
