汪旭
- 作品数：9 被引量：55H指数：5
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金沈阳市科技计划项目辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乌索酸诱导Jurkat细胞凋亡及其机制的初步研究被引量：6
- 2010年
- 本研究旨在探讨乌索酸(ursolic acid,UA)对Jurkat细胞的诱导凋亡作用及其分子机制,为UA应用于血液系统恶性肿瘤治疗提供理论依据。培养Jurkat细胞,用Water Solubility Tetrazolium-8(WST-8)法检测不同浓度UA对Jurkat细胞的细胞毒作用,观察caspase-9抑制剂对UA细胞毒作用的抑制情况;分别收集20、40μmol/L UA处理2小时和4小时的Jurkat细胞,用Annexin/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率;收集不同浓度UA作用不同时间的Jurkat对数生长期细胞,提取蛋白,用Western blot分析caspase-9和-3及细胞色素C活化、Akt磷酸化情况。结果表明:UA能明显降低Jurkat细胞的生存率,能够诱导Jurkat细胞凋亡,caspase-9抑制剂能够抑制UA的细胞毒作用。在UA诱导Jurkat细胞凋亡过程中,caspase-9、caspase-3和细胞色素C被活化,Akt磷酸化受到抑制。结论:UA对Jurkat细胞具有明显的细胞毒作用,并能诱导其凋亡;UA诱导Jurkat细胞凋亡是通过线粒体途径实现的,其机制可能与抑制细胞生存因子Akt磷酸化过程相关。
- 吴斌汪旭王慧涵王洪涛杨威迟昨非刘卓刚
- 关键词：乌索酸JURKAT细胞细胞凋亡
- 短暂高糖通过组蛋白甲基化修饰诱导肾小球系膜细胞持续炎性反应
- 2017年
- 目的探讨短暂高糖培养后再恢复正常糖环境的大鼠肾小球系膜细胞是否持续释放炎性因子，及该过程是否与组蛋白甲基化修饰有关。方法大鼠肾小球系膜细胞株（HBZY-1）分为高糖组（25．0mmol／L葡萄糖）、高渗对照组（19．5mmol／L甘露醇＋5．5mmol／L葡萄糖）和正常对照组（5．5mmol／L葡萄糖）进行24h培养；随后各组更换正常糖培养基（5．5mmol／L葡萄糖）培养0、24、48、72h。分别提取各组细胞的蛋白、上清液以及总RNA。采用Western印迹检测组蛋白H3四号位赖氨酸单甲基化（H3K4mel）表达水平，实时荧光定量PCR检测核因子κB（NF—κB）的p65亚基、组蛋白甲基化转移酶set7／9的mRNA表达，ELISA检测上清中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）的表达。结果（1）与正常对照组比较，高糖处理大鼠系膜细胞24h后set7／9mRNA表达和H3K4mel蛋白表达均上调（均P〉0．05）；恢复正常糖培养24、48、72h高糖组set7／9mRNA表达和H3K4mel蛋白表达逐渐降低（与0h高糖组比较，均P〈0．05）；恢复正常糖培养72h高糖组set7／9和H3K4mel的表达与正常对照组差异均无统计学意义（均P〉0．05）。（2）未恢复正常糖培养（0h）时高糖组大鼠系膜细胞NF-κBp65mRNA、MCP-1、VCAM-1的表达均高于正常对照组（均P〉0．05）；恢复正常糖培养24、48h和72h高糖组NF—κBp65mRNA、MCP-1、VCAM-1的表达均保持高表达，与0h高糖组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。以上各指标高渗组与正常对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论短暂高糖培养可诱导。肾小球系膜细胞组蛋白甲基化转移酶set7／9和组蛋白H3K4单甲基化的表达上调，并且在恢复正常糖环境后仍持续48h。同时短暂高糖培养促进肾小球系膜细胞NF—κBp65，炎性因子MCP-1、VCAM-1的表达持续高表达。提示高糖代谢记忆可能�
- 邓云蕾范秋灵汪旭曹旭徐莉刘佳赵雪王力宁
- 关键词：血管细胞黏附分子1趋化因子CCL2代谢记忆
- 乌索酸增强自噬改善高糖诱导的足细胞损伤被引量：4
- 2015年
- 目的探讨乌索酸是否通过改善高糖状态下的足细胞白噬抑制，发挥其肾脏保护作用。方法体外高糖培养小鼠条件永恒足细胞株，加入P13K抑制剂LY294002及乌索酸进行干预。RT．qPCR法检测细胞内微小RNA一21（miR．21）和磷酸酶基因（PTEN）的mRNA表达。Western印迹法检测磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt）／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白，白噬相关蛋白及足细胞标志蛋白的表达变化。采用荧光显微镜观察足细胞标志蛋白、内源性微管相关蛋白LC3的表达变化。透射电镜下观察足细胞内白噬体的形成。结果与对照组相比，高糖组足细胞自噬相关蛋白LC3II、Beclinl的表达降低，泛素结合蛋白p62（p62／SQSTMl）表达增高；足细胞标志蛋白synaptopodin、podocin及nephrin表达降低；同时伴miR-21表达上调，PTEN的mRNA和蛋白表达均下调，p85-P13K、磷酸化（P）-Akt、p-mTOR表达增加（均P〈0．01）。加入LY294002及乌索酸干预后，p85-P13K、磷酸化（P）-Akt、p-mTOR表达减少；足细胞自噬相关蛋白LC3II、Beclin1的表达增加，p62／SQSTM1表达降低；足细胞标志蛋白synaptopodin、podocin及nephrin表达降低（均P〈0．01），但LY294002对足细胞内miR-21和PTEN的表达无影响。乌索酸可抑制细胞内miR-21的过表达，上调PTEN表达（均P〈0．05）。结论高糖可抑制足细胞自噬，促进足细胞损伤。乌索酸干预可减轻高糖刺激下的足细胞自噬抑制，缓解足细胞损伤，其保护机制可能是通过抑制足细胞内miR-21过表达，上调PTEN表达，抑制P13K／Akt—mTOR信号通路的异常活化实现的。
- 徐莉范秋灵汪旭李琳卢新星岳媛曹旭刘佳赵雪王力宁
- 关键词：高血糖症足细胞自噬乌索酸MIR-21磷酸酶基因
- 熊果酸通过调节Wnt／β-catenin通路抑制高糖诱导的足细胞上皮间充质转分化被引量：4
- 2016年
- 目的观察高糖诱导足细胞Wnt／β-catenin通路活化及足细胞形态改变，探讨熊果酸保护足细胞损伤的可能机制。方法体外培养足细胞并分为4组：正常糖组（葡萄糖5．5mmol／L）、甘露醇组（葡萄糖5．5mmol／L＋甘露醇19．5mmol／L）、高糖组（葡萄糖25mmol／L）和熊果酸组（葡萄糖25mmol／L＋熊果酸5μmol／L）。倒置相差显微镜检测足细胞形态转化；免疫荧光检测足细胞紧密连结蛋白1（ZO-1）、a平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的表达；Western印迹法检测足细胞B连环蛋白（B-catenin）、糖原合成酶激酶3p（GSK3β）的表达；实时定量PCR法检测足细胞Wntl、Wnt3a、Wnt5a、Wnt5b和B-cateninmRNA的表达。结果正常糖组足细胞呈不规则的树枝状，高糖培养下足细胞向鹅卵石、细长状态的间充质细胞形态转化。高糖诱导足细胞后ZO．1蛋白表达下调，a-SMA表达增加，Wnt5a mRNA表达下调，B-cateninmRNA及蛋白表达上调，GSK313蛋白表达下调（均P〈0．05）。相对于高糖组，熊果酸组足细胞发生上皮细胞间充质转化的比例减少，ZO-1蛋白表达增加，a-SMA蛋白表达下降，Wnt5amRNA表达上调，B-cateninmRNA及蛋白表达下调，GSK3β蛋白表达上调（均P〈0．05）。结论熊果酸通过调节Wnt／β-catenin信号通路抑制高糖诱导的足细胞上皮间充质转分化，减轻足细胞损伤。
- 李琳徐莉范秋灵汪旭张艳宁王力宁
- 关键词：足细胞熊果酸细胞转分化
- 糖尿病和糖尿病肾病患者循环lncRNA表达谱的分析被引量：6
- 2017年
- 目的分析健康对照组、糖尿病患者、糖尿病肾病患者循环lnc RNA及m RNA表达谱的差异,探讨糖尿病和糖尿病肾病的表观遗传学发病机制,为糖尿病肾病寻找新的治疗靶点提供依据。方法采集2015年1月至3月中国医科大学附属第一医院肾内科收治的肾活检病理明确为结节性糖尿病肾小球硬化症患者21例(DN组)、2型糖尿病患者9例(DM组)及19名正常健康人(N组)的血清。采用Arraystar Human lnc RNA/m RNA V3.0芯片进行lnc RNA和m RNA表达谱检测,使用Agilent Feature Extraction软件对获得的微阵列图像包含的讯息进行提取,采用Gene Spring GX软件包对获得lnc RNA及m RNA原始表达讯息进行标准化。结果与糖尿病组及正常对照组相比,糖尿病肾病组患者尿白蛋白/肌酐比值和血清肌酐显著升高,估计肾小球滤过率(estimated glomeruar filtration rate,e GFR)显著下降(P<0.05)。与健康对照组相比,糖尿病组血清中有245个lnc RNA表达上调和680个lnc RNA表达下调。与糖尿病组相比,糖尿病肾病组血清中有45个lnc RNA表达上调和813个lnc RNA表达下调。自正常组到糖尿病组,再到糖尿病肾病组,lnc RNA-ARAP1-AS2表达逐渐上调(DM/N 2.82倍,DN/DM 2.47倍),lnc RNAARAP1-AS1表达逐渐下调(DM/N 2.24倍,DN/DM 4.79倍),其靶基因ARAP1(Arf GAP with Rho GAP domain,ankyrin repeat and PH domaim 1)m RNA的表达逐渐上调(DM/N 2.25倍,DN/DM 2.45倍)。结论表达下调的lnc RNA-ARAP1-AS1和表达上调的lnc RNA-ARAP1-AS2作用于靶基因m RNA-ARAP1,使m RNA-ARAP1在糖尿病和糖尿病肾病中表达上调,可能通过调控Rho激酶和EGF受体途径,参与了糖尿病和糖尿病肾病的发生,其有望成为糖尿病和糖尿病肾病新的生物标志物。
- 吕小萌范秋灵汪旭徐莉卢新星陈桐王力宁
- 关键词：糖尿病肾病
- 肾组织超声弹性成像与慢性肾脏病患者的临床病理改变相关被引量：17
- 2016年
- 目的：分析肾组织弹性成像与慢性肾脏病（CKD）患者的临床和病理改变的相关性，探讨其能否成为动态监测肾脏疾病进展、评估疗效及预后的新方法。方法选取中国医科大学附属第一医院2014年8月？2015年1月住院治疗并行肾活检的患者113例，其中男性61例，女性52例，IgA肾病23例，膜性肾病39例，微小病变型肾病15例，局灶节段性肾小球硬化症7例。采用全数字化彩色多普勒超声诊断仪进行肾组织实时剪切波超声弹性成像检查，检测肾皮质、髓质的杨氏模量（YM 皮质、YM 髓质）。统计学分析CKD患者YM 皮质、YM 髓质与血液、尿液临床和生化指标的相关性，及不同病理类型、不同分期CKD患者YM 皮质、YM 髓质的差异。结果各期CKD患者YM 皮质、YM 髓质均高于健康对照组（均P＜0.05），随着CKD的进展，YM 皮质、YM 髓质逐渐升高；CKD G5期患者YM 皮质均高于CKD G1？3期患者（均P＜0.05），CKD G3？5期患者YM 髓质均高于CKD G1？2期患者（均P＜0.05）。YM 皮质与收缩压、血清肌酐、胱抑素C、血清白蛋白（ALB）、血磷、钙磷乘积、尿酸、全段甲状旁腺素（iPTH）、尿NAG、肾小球滤过率估算值（eGFR）、血红蛋白相关（均P＜0.05）。YM 髓质与收缩压、血清肌酐、血清ALB、尿酸、iPTH、尿微量白蛋白（MA）、尿NAG、血红蛋白相关（均P＜0.05）。血清胱抑素C（β=0.485，P=0.018）、尿酸（β=0.418，P=0.039）是YM皮质升高的独立危险因素，血清肌酐（β=0.380，P=0.019）、血尿酸（β=0.482，P=0.004）、吸烟（β=0.337，P=0.009）是YM髓质升高的独立危险因素。不同病理型CKD患者YM 皮质、YM 髓质比较差异均有统计学意义（P值分别为＜0.001、0.003）。膜性肾病、IgA肾病患者的YM 皮质、YM 髓质均高于微小病变型肾病患者（均P＜0.05）；局灶节段性肾小球硬化症患者YM 髓质高于微小病变型肾病患者（P＜
- 彭凌燕钟婷婷范秋灵汪旭刘艳君王学梅王力宁
- 关键词：弹性成像技术活组织检查肾功能不全慢性
- 微小RNA-148b通过靶向调控AMPKα1介导高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的内质网应激被引量：7
- 2017年
- 目的观察高糖刺激大鼠系膜细胞后微小RNA-148b（miR-148b）的表达变化，及其对靶基因腺苷酸活化的蛋白激酶α1（AMPKcd）的调控作用和对细胞外基质蛋白分泌的影响。方法大鼠系膜细胞分3组：正常糖组（5．5mmol／L葡萄糖）、高渗组（5．5mmol／L葡萄糖＋19．5mmol／L甘露醇）和高糖组（25．0mmol／L葡萄糖），实时定量PCR检测miR-148b的表达。转染miR-148b抑制物进一步探讨靶向抑制miR-148b的作用。实时定量PCR检测AMPKα1 mRNA的表达；Western印迹法检测AMPKα1、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C／EBP同源蛋白（CHOP）、纤连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）蛋白的表达；免疫荧光法检测ColⅣ的表达。结果高渗组与正常对照组miR-148b表达差异无统计学意义（P〉0．05）；与正常对照组比较，高糖组细胞内miR-148b的表达上调，GRP78、CHOP、FN、ColⅣ表达均显著上调（均P〈0．05），AMPKα1 mRNA及蛋白表达均下调（均P〈0．01）。与高糖组比较，转染miR-148b抑制物的高糖组miR-148b及GRP78、CHOP、FN、ColⅣ蛋白表达均显著下调（均P〈0．05），AMPKcd mRNA及蛋白表达均上调（均P〈0．05）；转染miR-148b阴性对照的高糖组上述指标与高糖组相比差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论高糖可上调体外系膜细胞miR-148b的表达，靶向抑制AMPKα1的表达，从而诱导内质网应激及系膜细胞产生过多细胞外基质蛋白。抑制miR-148b可上调靶基因AMPKα1的表达，从而抑制高糖诱导的系膜细胞内质网应激亢进，减少细胞外基质蛋白的聚积。
- 赵雪范秋灵徐莉汪旭曹旭刘佳王力宁
- 关键词：肾小球系膜细胞微RNAS内质网应激
- 高糖诱导肾小球系膜细胞Notch信号通路活化及百令提取液的干预作用被引量：2
- 2016年
- 目的探讨高糖对肾小球系膜细胞内Notch信号通路、转化生长因子β（TGF-β）及纤维连接蛋白（FN）表达的影响及百令提取液的作用，以进一步阐明百令提取液的肾保护的作用机制。方法将大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）分为5组：正常对照组（5．5mmol／L葡萄糖）、高渗透浓度对照组（5．5mmol／L葡萄糖＋19．5mmol／L甘露醇）、高糖组（25．0mmol／L葡萄糖）、Notch抑制剂DAPT组（25．0mmol／L葡萄糖＋1μmol／LDAPT）和百令提取液干预组（25．0mmol／L葡萄糖＋10mg／L百令提取液）。采用MTT法检测各组细胞增殖能力，Western印迹和实时定量PCR法分别检测Notch信号通路相关分子（Notchl、Jaggedl、Hesl）、TGF-β及FN的蛋白和mRNA表达。结果与正常对照组比较，高糖组HBZY-1细胞增殖显著增加，细胞内Notch信号相关分子（Notchl、Jaggedl、Hesl）mRNA和蛋白表达均显著上调，TGF-β、FN的mRNA和蛋白表达均显著增加（均P〈0．05）。与高糖组比较，DAPT组和百令提取液干预组HBZY-1细胞增殖均显著降低，Notch信号相关分子（Notchl、Jaggedl、Hesl）、TGF-β和FN的mRNA和蛋白表达均显著降低（均P〈0．05）。结论百令提取液可能通过抑制Notch信号通路和TGF-β通路异常活化，降低高糖诱导系膜细胞增殖，减少细胞外基质聚积，从而发挥肾脏保护作用。
- 徐艳艳范秋灵丁红卢新星汪旭王力守
- 关键词：肾小球系膜细胞信号传导
- 微RNA-503通过靶向调控Bcl-2介导高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡被引量：9
- 2017年
- 目的探讨高糖培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）微RNA-503（miR-503）的表达变化，对其靶基因Bcl-2表达、caspase酶活性和细胞凋亡的影响，探讨高糖诱导肾小管损伤的发病机制。方法将体外培养HK-2细胞分为正常糖组、甘露醇高渗对照组、高糖组，在倒置显微镜下观察细胞形态；采用AnnexinV—FITC双染流式细胞仪检测HK．2细胞的凋亡率；实时定量PCR法检测miR。503表达；Western印迹检测HK-2细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、活化的caspase-9（cleaved caspase-9）的表达。结果培养48h后，与正常糖组相比，高糖组、高渗组HK-2细胞凋亡率增加（P〈0．05），HK-2细胞内miR-503表达上调（P〈0．01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少（P〈0．05），线粒体凋亡通路相关蛋白cleaved caspase-9蛋白表达增加（P〈0．05），差异均有统计学意义。结论高糖培养的HK-2细胞内miR-503的表达明显上调，抑制其靶蛋白Bcl-2的表达，活化线粒体凋亡途径，激活caspase酶，诱导HK-2细胞凋亡。高糖的。肾小管毒性-部分是渗透压的作用。miR-503可能参与了糖尿病肾病病理损伤的发生，有望成为糖尿病肾病新的治疗靶点。
- 曹旭刘佳范秋灵汪旭徐莉赵雪王力宁
- 关键词：微RNASBCL-2肾小管上皮细胞
