林纯
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
- 供职机构：华南农业大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA在PK15细胞中的分泌表达被引量：2
- 2011年
- 通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSmanA。重组质粒经过PCR、酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且读码框完全正确。在脂质体介导下将pcDNA-PSmanA转染猪肾(PK15)细胞进行分泌表达,通过RT-PCR方法证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测酶活性得到β-甘露聚糖酶基因酶活性为14.5 IU/mL。
- 邹娴张茂许惠林纯贺晓燕刘德武蔡更元吴珍芳
- 关键词：黑曲霉Β-甘露聚糖酶重叠延伸PCRPK15细胞
- 携带脂肪酸去饱和酶Fatl-Fat2双基因打靶载体及其表达与功能鉴定
- 本研究克隆得到猪体内缺乏的ω-3和△-12脂肪酸去饱和酶的关键基因FAT1与FAT2，经密码子优化后，构建了携带FAT1-FAT2双基因的多位点打靶载体。该载体以猪γRNA基因间的内部转录间隔序列为靶位点;为提高定点整合...
- 汤飞林纯刘德武李紫聪吴珍芳
- 关键词：多不饱和脂肪酸基因打靶
- 黑曲霉木聚糖酶基因xynA的克隆及真核表达载体的构建被引量：2
- 2010年
- 从黑曲霉(Aspergillus niger)GI M3.452中克隆得到木聚糖酶基因xynA的成熟肽编码序列。通过重叠延伸PCR将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因片段和猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽进行拼接得到融合片段SPA,并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-SPA,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性,在脂质体介导下将重组质粒pcDNA-SPA转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测到木聚糖酶活性为7.6I U/mL。
- 张茂刘德武林纯贺晓燕孟繁明周庆丰杜云平吴珍芳
- 关键词：黑曲霉木聚糖酶真核表达
- 脂肪酸去饱和酶双基因打靶载体的构建
- 多不饱和脂肪酸(PUFAs)对人类有着重要的医疗价值与营养价值。本研究通过克隆线虫编码的ш-3.△-12脂肪酸去饱和酶的关键基因fat-1与 fat2，构建以CMV-β actin为启动子，含以rRNA基因间的内部转录间...
- 林纯刘德武黄志华欧阳志平周荣周秀吴珍芳
- 关键词：真核表达载体
- 文献传递
- 宇佐美曲霉木聚糖酶在哺乳动物细胞中的分泌表达被引量：1
- 2012年
- 本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。在脂质体介导下将重组质粒转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中测定木聚糖酶酶活,结果显示,重组质粒pcDNA-spna转染细胞后表达的酶活力最高为8.53U/mL,较pcDNA-spnb表达的酶活(6.87U/mL)高24%,实现了微生物基因在哺乳动物细胞的分泌表达,为xyn基因在转基因方面的利用提供了依据。
- 张茂邹娴林纯刘德武吴珍芳蔡更元
- 关键词：宇佐美曲霉木聚糖酶哺乳动物细胞分泌表达
