杨涵江
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- MSTN基因克隆、表达及其主动免疫研究
- 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是一种抑制骨骼肌生长和发育的负向调控因子,其在肌细胞的生成过程中有着重要的功能。MSTN基因的突变或者人为的添加MSTN的抗体都能够提高动物的体增重,促进肌肉的发育(Mcph...
- 杨涵江
- 关键词：口服免疫肌肉生长抑制素体增重
- 文献传递
- 一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法和该锌指核酸酶及其表达载体
- 本发明一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法和该锌指核酸酶及其表达载体，属于基因工程技术领域。其中所述的方法包括：(1)内源基因靶位点的选择；(2)构建穿梭载体pAdTrack-CMV-T2A；(3)制备重...
- 张智英王令张婷婷李亚明李战伟任刚杨涵江张存芳雷洁王瑞麻丽霞
- 文献传递
- 一种由PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体、其构建方法及其应用
- 本发明是一种由PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体、其构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。所述载体为PB-rtTA-NIT-STP，是通过下述方法构建：LoxP-SV40P nco-IRES-tk-P...
- 张智英张婷婷辛颖杨涵江张志强徐坤王令
- 文献传递
- 口服酵母主动免疫MSTN基因对小鼠生长的影响
- 在本研究中使用表达MSTN的酵母作为抗原，利用了酵母本身是天然佐剂和可以在肠道中递呈抗原给树突状细胞的能力，将表达MSTN的酵母饲喂小鼠便可以引起小鼠针对MSTN的特异性免疫反应，产生的抗MSTN的抗体使小鼠体内自身的M...
- 杨涵江张婷婷张智英
- 关键词：MSTN酵母小鼠
- PiggyBac转基因载体的构建及检测
- 本研究应用重叠PCR技术，以小鼠胚胎干细胞CESC)为研究材料，制备转基因小鼠，研究在转基因过程中多基因表达及标记基因删除的可行性。
- 张婷婷辛颖张志强杨涵江张智英
- 关键词：基因载体胚胎干细胞转基因技术
- 文献传递
- 人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因腺病毒载体的构建及包装被引量：3
- 2012年
- 【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-hTERT。将pAdEasy-hTERT PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后,收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液;反复扩增3次后,测定重组hTERT腺病毒的滴度。【结果】①利用酶切连接的方法得到了穿梭载体pAdTrack-hTERT;②通过同源重组将外源目的基因hTERT整合到腺病毒骨架载体中,得到重组质粒pAdEasy-hTERT;③成功获得了滴度为6.73×1010 GFU/mL的高滴度腺病毒颗粒。【结论】含有hTERT基因的重组腺病毒颗粒包装成功,为后续哺乳动物原代细胞永生化研究奠定了基础。
- 任充华张婷婷杨涵江王昕陈知龙张智英
- 关键词：重组腺病毒细胞永生化
- 人工锌指蛋白随机库的构建及其在锌指核酸酶筛选中的应用被引量：3
- 2012年
- 利用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP)。以已知三锌指蛋白为框架,使单个锌指关键位点氨基酸编码序列产生随机突变,构建3个人工锌指蛋白随机库,建立和完善应用人工锌指蛋白随机库筛选特异性锌指蛋白的技术平台。以人DYRK1A基因为例,测试和验证该技术平台的可行性和效率,分别获得对DYRK1A基因靶序列中左侧和右侧位点具有较高亲和性的50个三锌指蛋白;然后将得到的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ连接,构建DYRK1A锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN),应用酵母验证系统测试DYRK1A锌指核酸酶的活性,结果表明,90%的组装锌指核酸酶能够在靶位点进行切割。
- 李战伟王昕任刚王令杨涵江张智英
- 关键词：锌指蛋白锌指核酸酶
- 一种开源方式筛选靶向结合人DYRK1A基因靶位点的锌指蛋白的方法
- 本发明一种开源方式筛选靶向结合人DYRK1A基因靶位点的锌指蛋白的方法，属于基因工程技术领域。该方法包括：(1)3个锌指蛋白库的构建；(2)报告载体和报告菌株的构建；(3)有效锌指库的筛选；(4)有效锌指库的连接、组装；...
- 张智英李战伟杨涵江任刚王令张存芳张婷婷王瑞贾杰只雷洁李亚明支旭勃韩新艳辛颖
- 文献传递
- PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测
- 2012年
- 【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。
- 张婷婷辛颖张志强任充华杨涵江王令张智英
- 关键词：SV40PIGGYBAC转座子
- 鸡PLA2基因的克隆与原核表达及PLA2蛋白卵黄抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 【目的】克隆并原核表达鸡PLA2基因,小量制备鸡PLA2卵黄抗体,为大规模制备PLA2卵黄抗体作为饲料添加剂提供参考。【方法】提取鸡胰脏总RNA,利用RT-PCR方法获得鸡PLA2基因,将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,构建表达载体pGEX-4T-1-PLA2,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-PLA2融合蛋白。将GST-PLA2融合蛋白免疫青年蛋鸡,每次0.3mg/只,共免疫4次,收集鸡蛋,提取卵黄抗体,采用West-ern Blotting检测抗体的特异性。【结果】成功克隆出了鸡PLA2基因,构建了pGEX-4T-1-PLA2原核表达载体,并诱导表达了分子质量为44.59ku的GST-PLA2融合蛋白。GST-PLA2融合蛋白免疫蛋鸡后获得了卵黄抗体,经West-ern Blotting检查,制备的卵黄抗体具有很好的特异性。【结论】构建了表达鸡PLA2基因的表达系统,并成功的制备了抗鸡PLA2的卵黄抗体。
- 杨涵江辛颖麻丽霞张智英
- 关键词：原核表达卵黄抗体
