杨正平
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：东南大学附属中大医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CDC25B_3基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
- 2009年
- 目的构建CDC25B3基因RNAi慢病毒载体。方法合成CDC25B3基因RNAi有效靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与双酶切后的pGCL-GFP载体(含有U6启动子和GFP基因)连接产生LV-shCDC25B3慢病毒载体,挑选阳性克隆经PCR和测序鉴定。用脂质体转染法将LV-shCDC25B3、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功地构建了CDC25B3shRNA的慢病毒载体LV-shCDC25B3。浓缩病毒悬液的滴度为1×108TU/ml。结论成功构建人CDC25B3基因RNAi慢病毒载体。
- 张齐范健石欣孔波肖志杨正平
- 关键词：RNA干扰CDC25B胰腺癌慢病毒
- 胰腺癌细胞株Puta8988对培美曲塞产生获得性耐药的分子生物学机制初步研究被引量：5
- 2009年
- 目的探索胰腺癌细胞株Puta8988对培美曲塞（pemetrexed，Alimate）产生获得性耐药的机制，分析这种耐药与培美曲塞调控通路上相关基因的关系。方法对胰腺癌细胞株Puta8988进行耐药诱导，使其对培美曲塞产生获得性耐药。然后检测正常Puta8988细胞和耐药Puta8988细胞中胸苷酸合酶（thymidylate synthase，TS），叶酰聚谷氨酸合酶（folylpolyglutamate synthetase，VPGS），还原型叶酸盐载体（reduced folate carrier，RFC）的mRNA表达水平变化。结果胰腺癌细胞株Pum8988对培美曲塞产生了耐药作用，培美曲塞长期作用后，Puta8988的50％抑制浓度（IC50）上升2．2倍（P〈0．05）。mRNA分析结果提示耐药细胞株偈的mRNA表达上调，FPGS变化不明显，RFC表达下调。结论化疗药物长期作用后，TS、FPGS、RFC的基因表达失衡，胰腺癌细胞产生了获得性耐药。对这些基因进行干预有可能提高胰腺癌细胞对培美曲塞的敏感性，从而提高疗效。
- 严伟石欣葛梓肖志杨正平杨军
- 关键词：胰腺癌培美曲塞获得性耐药
- CDC25B1对人胰腺癌细胞株Patu8988的生物学行为的影响
- 2008年
- 目的探讨CDC25B1基因在人胰腺癌细胞株Patu8988中的表达情况,并将真核表达重组载体pcDNA-CDC25B1转染至细胞中,观察CDC25B1基因对细胞生物学行为的影响,以了解它在细胞周期及胰腺肿瘤细胞恶性转化方面的作用,为研究胰腺癌的发病机制与治疗提供理论依据。方法利用Lipofectamine2000将CDC25B1转染至人胰腺癌细胞株Patu8988中,通过RT-PCR和Westernblot在mRNA和蛋白水平验证质粒转染成功,通过MTT实验、侵袭实验和细胞周期检测,观察CDC25B1对细胞生物学行为的影响。结果RT-PCR发现在胰腺癌细胞株Patu8988和转染空质粒的细胞株中,CDC25B1在mRNA水平表达很弱;转染pcDNA-CDC25B1组中CDC25B1高表达。Westernblot发现在胰腺癌细胞株Patu8988中,CDC25B蛋白有少量表达;转染pcDNA-CDC25B1组CDC25B蛋白高表达。MTT实验显示,转染pcDNA-CDC25B1组的细胞生长在72h受到明显抑制(P(0.05)。侵袭实验显示,转染pcDNA-CDC25B1的细胞其穿透Matrigel胶的能力明显增强(P(0.05)。流式细胞计量术显示,转染了pcDNA-CDC25B1组中,G1期的细胞明显增多(P(0.05);同时转染了pcDNA-CDC25B1组中,G2期的细胞明显减少,与未处理组比较有统计学意义(P(0.05)。结论在胰腺癌细胞株Patu8988中的CDC25B1转录水平很弱,存在少量CDC25B蛋白表达。转染的CDC25B1基因提高CDC25B1蛋白的表达,使细胞停滞在G1期,对细胞的生长有抑制作用,但能够增强细胞的侵袭能力;CDC25B1可能不是通过单一的调控细胞周期而实现其对细胞的影响,还存在其它多种途径。
- 肖志石欣杨正平张齐孔波严伟葛梓
- 关键词：基因转染
- 慢病毒导入的CDC25B2 siRNA对胰腺癌细胞CFPAC-1生物学行为的影响
- 2008年
- 目的利用已构建成功的、在人胰腺癌细胞株CFPAC-1中稳定抑制细胞分裂周期25同源体B（CDC2582）的重组慢病毒，建立CDC2582表达降低的细胞株，以研究该基因的作用。方法将产生CDC2582小干扰RNA（siRNA）分子的、携带绿色荧光蛋白的重组慢病毒感染CFPAC-1细胞后，用流式细胞仪筛选稳定表达的细胞株。应用RT—PCR和Westernblot分别对细胞中CDC2582的mRNA和蛋白表达水平进行分析。应用MTT法、流式细胞仪、平板克隆形成和Transwell小室法分别检测其对细胞增殖、周期、细胞克隆形成能力和迁移侵袭能力的影响。结果CDC2582 siRNA显著下调CFPAC-1细胞中CDC2582的表达，所构建的重组慢病毒导入的siRNA有较高的沉默效率，CFPAC-1细胞的增殖能力、克隆形成能力以及迁移侵袭能力显著增强，细胞周期无明显改变。结论CDC2582基因可显著影响胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、克隆形成和迁移能力，为利用CDC2582所介导的信号通路进行肿瘤基因治疗提供了实验依据。
- 杨正平石欣肖志张齐孔波严伟葛梓
- 关键词：慢病毒属
- Cyclin/Cdks复合物相关调控分子与肿瘤关系的研究进展被引量：8
- 2008年
- 杨正平石欣
- 关键词：细胞周期素细胞周期依赖性激酶肿瘤细胞周期细胞周期调控
- 中度高原感染性休克微循环障碍的发病机制
- 马四清邱海波何宗钊徐静媛王皓李欣慧李江涛杨正平王云马喜明许雪侠石青军陈强郑兴辛娜
- 感染性休克时临床常见危重症，病死率高达50%，其死亡的主要原因是并发多器官功能障碍综合征或多器官功能衰竭。导致其发生MODS的病理生理变化主要是有效循环血量降低，使组织微循环血液灌流量急剧减少，从而导致细胞损伤，重要器官...
- 关键词：
- 关键词：微循环障碍发病机制
