杨丽金
- 作品数：9 被引量：6H指数：1
- 供职机构：青岛农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金青岛市科技发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 感染鹅细小病毒后雏鹅组织器官的3种消化酶及同工酶
- 2015年
- 鹅细小病毒（GPV）侵染引发机体酶或酶蛋白的变化,扰动平衡的代谢网络,调节多种代谢生理活动,其变化多样性和复杂性是研究病毒基因型与宿主遗传易感性互作病理学机制的有效标记物。通过鹅细小病毒YZ毒株（GPV-YZ）感染雏鹅,采用分光光度法分析脑、心、肝、肺、脾器官组织的蛋白酶、淀粉酶及转氨酶活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）鉴定同工酶。结果显示,与对照组（CK）相比,受GPV感染雏鹅的各器官组织中,3种消化酶的活性分别增强1.6~6倍、1~2倍、2~3.6倍。淀粉酶同工酶存在4~7条不等的谱带变化,肝和脾新增1条慢区主带,而心脏缺少1个慢区谱带;转氨酶同工酶在慢区显示1条谱带,酶蛋白在慢中区谱带增多2~3条,而脑和脾脏的快区酶蛋白谱带减少1~2条。提示：慢区淀粉酶同工酶可能是GPV感染的敏感同工酶,酶蛋白/同工酶基因不同程度表达差异变化,直接或间接控制感染雏鹅的调节代谢生理机能,增强对入侵GPV的防御应激性能。
- 朱新产韩彬杨丽金
- 关键词：雏鹅鹅细小病毒转氨酶同工酶
- 牡丹丙酮酸脱氢酶基因PsPDH的克隆和表达特性分析被引量：1
- 2016年
- 根据454测序得到的丙酮酸脱氢酶基因PDH的部分cDNA片段设计引物,运用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术扩增得到牡丹(Paeonia suffruticosa)PDH基因的全长cDNA,命名为PsPDH。PsPDH cDNA序列全长为1 313 bp,包括132 bp的5′非编码区、173 bp的3′非编码区和1 008 bp的编码区,共编码335个氨基酸,其分子量为35.844 kDa。推测的氨基酸序列包括17个可能的磷酸化位点,其中包括12个Ser位点,这可能与活性位点的调节有关。亚细胞定位预测该蛋白位于线粒体基质中。同源性比对表明,PsPDH与葡萄(Vitis vinifera)VvPDH同源性最高,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtPDH的相似性最低。实时定量PCR(quantitative real-time PCR)结果表明PsPDH基因在初花期叶片、根和心皮中表达水平较高,在人工低温处理14 d的牡丹花芽中表达水平最高,PDH的酶活力变化趋势与该基因表达趋势一致,可见,PsPDH基因的活化可能是促进花芽休眠解除的原因。本研究为深入解析休眠解除中呼吸代谢的调控提供参考。
- 杨丽金甘甜盖树鹏刘春英张玉喜
- 关键词：克隆生物信息学分析酶活力
- 快长系F1鹅主要组织相容性复合物Ⅰ基因的克隆与序列分析
- 2014年
- 根据GenBank中已发表的鸭科(Anatidae)雁属水禽主要组织相容性复合物Ⅰ(major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ)基因的多重比对确定保守序列,用Primer Premier 5.0软件在保守序列区域设计1对特异性引物,从快长系F1鹅的基因组DNA中扩增获得MHCⅠ基因片段序列,采用DNAsis、Mega 5.10、BLAST等多种生物学软件对核苷酸序列和氨基酸序列的结构、性质和功能进行分析。结果显示,克隆的F1鹅MHCⅠ基因片段长1036bp,编码96个氨基酸,与NCBI中五龙鹅MHCⅠ基因和编码序列的同源性达93%和83%,有72处碱基序列不同,16个氨基酸发生改变。与其他家禽也有较高的同源性,亲缘关系依次为四季鹅>鸡>鸭。F1鹅MHCⅠ基因片段编码蛋白分子质量为11.342ku,PI值为5.32,不稳定系数为34.92,脂肪系数为42.81,平均疏水性为-1.066,可能存在9个B细胞抗原表位,但不含信号肽,提示该蛋白为亲水性的非分泌蛋白,具有较高的免疫原性。在蛋白的二级结构中α-螺旋占31.25%,β-折叠占16.67%,β-转角占14.58%,无规则卷曲占37.50%,三级结构呈现近似哑铃型,具有2个结构域:氨基末端结构域和羧基末端结构域。因此,环境中的病原压力使MHC基因在物种之间和种群的个体之间都产生了明显差异,存在着多态性MHC分子与多样性抗原肽相互作用的关系。MHC决定着疾病易感性个体的差异,是研究疾病抗性的最佳候选标记基因。
- 杨丽金朱峰伟吕春伟朱新产
- 关键词：克隆生物信息学
- GPV YZ株非结构蛋白1基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2014年
- 对鹅细小病毒YZ株非结构蛋白1的基因进行克隆、测序、比对及蛋白质结构和功能等生物信息学分析,探究了非结构蛋白1的基因分子特征和理化特性及病理学相关致病机理。通过PCR、质粒克隆及核苷酸序列测定方法获得病毒YZ株非结构蛋白1基因序列,采用DNAsis、Mega 5.10、Blast等多种生物学软件完成核苷酸序列及氨基酸序列和系统进化分析。结果显示,鹅细小病毒YZ株非结构蛋白1的基因全长1 881个核苷酸,编码627个氨基酸。与GPV-GB标准株、MDPV、ChPV、AAV的NS1基因序列存在很高的同源相似性,与MDPV的亲缘关系最近,提示番鸭和鹅细小病毒来自共同的祖先,其宿主的不同而演化为不同的分支。对应GPVNS1-YZ的同源区段序列（293-524）含231个氨基酸,分子量为26.446 kDa、PI=6.04,带负电的氨基酸30个,带正电的氨基酸28个,体外表达半衰期为5.5 h时,不稳定系数为40.23,脂肪系数为78.01,平均疏水值为-0.43,表明这一蛋白质为亲水性蛋白;该蛋白还存在9个抗原肽的位置：55-69,185-195,94-129,156-167,19-30,76-83,6-12,205-210,40-45,出现16个可能的B细胞抗原表位,表明它具有较高的免疫原性;但不存在跨膜片段,也不含信号肽和二硫键,可能不会分泌到宿主细胞的细胞膜外发生作用;其二级结构包含α-螺旋占30.74%,β-折叠占17.32%,无规则卷曲占51.95%,三级结构近似球状,包含一个SF3解旋酶超家族的DNA病毒解旋酶功能域（AA17-AA173）,提示鹅细小病毒的非结构蛋白1可能在感染发生后参与病毒DNA自我复制中的DNA解旋过程。
- 吕春伟朱峰伟杨丽金朱新产
- 关键词：鹅细小病毒非结构蛋白基因
- GPV感染扰动雏鹅系统互作网络的研究
- 2016年
- 为了解GPV(Goose parvovirus)侵染的病理学致病机理,探究GPV感染扰动雏鹅动态代谢网络平衡系统,对GPV感染雏鹅血液中的蛋白质、代谢酶活性及其同工酶结构和功能等进行生化分析。结果显示,GPV感染雏鹅的血液中,蛋白酶、Est、POD、SOD、ALP、ADH、Amy、CAT、GPT、LDH活性分别提高约41%/63%,30%/53%,50%/14%,36%/73%,156%/142%,1005%/22%,36%/26%,13%/51%,60%/244%,289%/139%;Ig G、IgM含量分别降低约50%,40%;蛋白质含量增长约50%,GPV感染雏鹅的血浆Est、SOD、ADH、Amy同工酶分别新增2,2,1,3条酶谱带,Est同工酶消减2条慢区谱带;血细胞Est、POD、SOD、Amy同工酶分别新增1,2,1,2条酶谱带;血液中CAT、LDH、GPT、ALP同工酶分别出现7,1,3,3条酶带变异,血细胞CAT、ADH同工酶分别缺少快区和慢、快区酶带,ALP同工酶在血浆与血细胞方面分别缺少慢区和快区酶带。同时显示重链59 kDa蛋白带是CK组IgM/G的共同特征,感染组Ig G还缺失258,36 kDa蛋白带;血浆与血细胞分别新增加131,86,43,33 kDa和144,104,58,53 kDa蛋白。血浆消减1条慢区酶蛋白,血细胞增加2条慢区酶蛋白。提示GPV感染应激与寄主蛋白质、蛋白酶及同工酶基因表达的协同作用,通过独特的扰动宿主动态平衡代谢网络直接或间接调控细胞易感性能。
- 朱新产王倩文朱峰伟杨丽金
- 关键词：雏鹅鹅细小病毒同工酶代谢网络
- 鹅细小病毒侵染雏鹅组织器官的氧化/脱氢酶及同工酶研究被引量：1
- 2015年
- 酶是催化代谢途径的高效活性基因产物,应激环境和遗传基础的不同导致同工酶结构或活性差异,使不同组织和发育阶段的酶种类和活性表现特异性变化。采用生化分析试验技术和PAGE分析鹅细小病毒（GPV）感染雏鹅氧化/脱氢酶（LDH、ADH、POD、CAT）的活性及同工酶特征变异,结果表明,GPV感染雏鹅的脑、心脏、脾脏组织新出现1条POD同工酶谱带,肺脏组织消失1条同工酶谱带;GPV感染雏鹅的肝脏、脾脏组织分别缺失慢区3条和1条CAT同工酶谱带;GPV感染雏鹅组织器官的LDH和ADH同工酶仅显示1~2个慢区带,肺脏缺失1条慢区ADH同工酶谱带,ADH活性降低了13.61%~61.08%,心脏增高1.2倍;POD、CAT、LDH活性分别增强1.2~6、1.5~3.5、2~2.5倍,而脑、肺脏的CAT活性降低了40.29%和94.68%,心脏、肺脏的LDH活性降低了75.93%和91.81%。提示氧化/脱氢酶产生的广泛变异是GPV感染应激与宿主氧化/脱氢酶基因表达的互作效应,其酶的谱型、活性等生化特征变异,直接或间接调控代谢途径、影响生理机能及病理性能,敏感的氧化/脱氢酶是研究病毒基因型与宿主遗传易感性互作病理学机制的有效标记物。
- 朱新产张兆斌黄云鸽杨丽金
- 关键词：雏鹅鹅细小病毒脱氢酶氧化酶同工酶
- 鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白IgG/IgM变异性研究被引量：4
- 2015年
- 为探究IgG／IgM蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理，对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ig进行了分级分离、纯化及 IgG／IgM 蛋白质结构和功能等生化-分子生物学分析。以 GPVYZ 感染雏鹅，采用（ NH4）2 SO4分级分离鹅血清Ig，将Sephadex G-100凝胶柱在Utro-gel ACA22凝胶柱色谱工作站上串联，分步聚集纯化出鹅血清IgM／G进行SDS-PAGE和生化分析。结果显示，初级沉淀鹅血清Ig，在非还原条件下，感染组（ RD）缺失6个蛋白主带（128，114，69，59，55，48 kDa）；而在还原条件下，RD组缺失7个蛋白主带（139，128，119，113，97，94，61 kDa），新增加3个蛋白主带（64，65，36 kDa），RD组和对照组（CK）的IgM和IgG带分别增加10，7倍和1．5，2倍。表明鹅血清IgM、IgG单体的高度可变性造成了在形状构型上的多态性，其亚基条带的变化是机体抗病潜能的重要标志；纯化鹅血清IgM／G，在非还原条件下，RD组的IgG缺失150 kDa分子和重链（64 kDa），而在还原条件下，鹅血清IgG显示重链（60～70 kDa）特征蛋白带，重链62 kDa特异蛋白带仅出现在CK组的IgM／G中，同时RD的IgG还缺失91 kDa分子、IgG（ΔFc）（43 kDa）、轻链（25 kDa）蛋白带。提示GPV感染与鹅血清Ig发生相互作用，IgG与GPV感染密切相关，62 kDa重链基因可能是GPV的易感基因。试验还表明，RD组的鹅血清Ig含量仅为CK组的37％，IgG含量较IgM高2．56倍，RD组IgM、IgG比活力显著高于CK组，提示GPV拟制鹅血清IgM、IgG基因的表达，促使病毒感染雏鹅。稳定性试验显示，酸碱稳定性：鹅血清IgG＞IgM；热稳定性IgM＞IgG，RD组的IgM、IgG对碱和温度较为敏感。提示随pH值、温度的不同，Ig同时发生许多反应，GPV感染增加了鹅血清Ig的碱和温度敏感性。
- 朱新产邵艳红朱峰伟杨丽金
- 关键词：雏鹅鹅细小病毒SDS-PAGE凝胶层析
- GPV感染雏鹅的保护酶活性与同工酶变异性研究
- 2015年
- 酶是催化代谢途径的高效活性基因产物,应激环境和遗传基础的不同导致同工酶结构或活性差异,使不同组织和发育阶段的酶种类和活性表现特异性变化。采用生化分析实验技术和PAGE分析GPV感染雏鹅保护酶（POD、ES、SOD）的活性及同工酶特征变异,结果表明,GPV感染雏鹅的脑、心、脾组织新出现1条POD同工酶带,肺组织消减1条同工酶带;GPV感染雏鹅的肝、肺、心组织SOD同工酶谱带新增加2条,脑、脾组织新增加1条,脑、心、脾分别缺少慢区、中区、快区酶带;GPV感染雏鹅的心、脾组织ES同工酶分别出现2、3条新酶带,脑、肝、肺组织新出现1条酶带;POD、SOD、ES活性不同程度分别增强1.2～6倍、1～1.7倍、1～2倍,肝中最显著（6,1.7,2倍）。提示GPV感染应激与寄主保护酶基因表达的互作作用,引起酶的谱型、活性等生化特征变异,直接或间接调控代谢途径与病理生化性能,因此,保护酶是GPV感染应激的敏感酶,可作为GPV与宿主易感性互作致病机制研究的有效标记。
- 朱新产黄云鸽张兆斌杨丽金
- 关键词：雏鹅鹅细小病毒酯酶聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 鹅细小病毒感染雏鹅的主要组织相容性复合体变异性研究
- 2015年
- 为了探究MHC基因的多态性与抗病性之间的相互关联作用。采用GPVYZ感染雏鹅,经Triton X-100分级分离MHC,将Sephadex G-200凝胶柱在Bio Gel P-100凝胶柱色谱工作站上串联,分步聚集纯化鹅肝脏MHC,SDS-PAGE分析鉴定。结果显示,初级分离的MHC主带区为30~90 ku、35 ku、20 ku,纯化的鹅肝脏MHC的特征蛋白带是30 ku,33 ku,40 ku,42 ku低分子量蛋白,与MHC类分子重链/α和轻链/β一致,提示重链与轻链折叠形成多态性MHC类分子,可作为致病研究的候选标记基因。YZ0明显缺失84 ku、61 ku蛋白主带,YZ组明显缺失45 ku蛋白峰p2和42 ku蛋白峰p1特征带,新增加34 ku峰p2和38 ku蛋白峰p1带;提示GPV感染与鹅肝脏MHC基因表达蛋白发生相互作用,45 ku、34 ku MHC是GPV的敏感蛋白,42 ku、38 ku蛋白带也与GPV的感染密切相关,MHC重链基因是GPV的易感基因。
- 朱新产毕经帅杨丽金
- 关键词：雏鹅鹅细小病毒主要组织相容性复合体SDS-PAGE凝胶层析
