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猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立与应用: 引言2010年末至今,浙江省部分地区猪场出现暴发性新生仔猪严重腹泻,大批死亡的疫情,给养猪业带来巨大经济损失[1]。用ELISA方法检测血清中病毒抗体水平是临床上常用的方法之一,但到目前为止,ELISA抗体检测方法检测P...; 顾昀周晓丽袁秀芳杜晓莉徐丽华李军星王一成

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位对鸭禽流感疫苗的免疫效果被引量：2: 2014年; 从大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的生物安全性、对鸭的毒副作用以及对鸭禽流感疫苗免疫增强效果等方面进行研究,结果表明,LTB制品中未检测到自身编码基因和抗性标记基因残留;高剂量LTB能诱导产生抗LTB自身抗体,并与剂量呈正相关;当使用剂量增大至50 mg/kg时,试验鸭表现出一定的神经症状及组织学病变;肌肉注射1 mg/kg LTB可显著提高禽流感灭活疫苗免疫鸭的血凝抑制(HI)抗体滴度。研究表明LTB具有增强禽流感疫苗免疫效果的潜力,且对鸭的安全使用剂量不超过50 mg/kg。; 周晓丽王一成姜平袁秀芳李军星杜晓莉; 关键词：禽流感疫苗

重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在鸭体内的吸收代谢及组织分布: 2014年; 研究重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)在鸭体内的吸收代谢及组织分布,为rLTB的临床应用安全性提供依据。试验鸭分别肌注1,50,100 mg/kg rLTB后,以神经节苷脂GM1酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)测定注射后不同时间点鸭血清中的rLTB含量;连续3次肌注rLTB后,观察临床症状和剖检病理变化,并采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和大脑制备组织切片,HE染色观察组织病理学变化,免疫酶组织化学染色观察rLTB在各脏器内的分布及含量变化。结果表明:鸭血清中的rLTB含量变化及维持时间与rLTB注射剂量呈正相关。1 mg/kg注射组2 h达到峰值,维持至6 h开始下降,24 h后基本检测不到;50,100 mg/kg注射组分别于2 h和1 h达到峰值,并均维持至12 h才开始下降,48 h后基本检测不到。HE染色切片显示50 mg/kg注射组肝细胞轻度浊肿变性,肺脏轻微炎症;100mg/kg注射组肝细胞浊肿变性明显、肺脏重度炎症、脑组织出现局灶性坏死。免疫组化染色结果显示,在被检脏器中均检出rLTB,以大脑含量最高,脾脏和肝脏次之,心脏和肺脏检出量低。rLTB大剂量肌肉注射可引起鸭一定的组织学病变,对鸭的安全使用剂量应不超过50 mg/kg。; 周晓丽王一成姜平袁秀芳李军星杜晓莉; 关键词：吸收代谢

2010—2013年浙江省猪流行性腹泻病毒临床检测及PEDV-S基因型分析被引量：26: 2014年; 2010年以来,全国大部分地区暴发新生仔猪严重流行性腹泻,给养猪业造成巨大经济损失。为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)在浙江省的流行和遗传变异情况,对2010—2013年收集的临床腹泻样品,以针对PEDV-S基因N端序列的RT-PCR检测病原,并测序其中的41份样品的扩增序列,分析PEDV-S1基因型变异情况。临床检测结果表明:PEDV临床检出率由2010年的42.86%提高到2013年的70%以上,并且浙江省各地的检出率都在50%以上;一年中7至8月份检出率明显降低。PEDV-S1基因N端序列分析结果表明,临床检测株的S1基因与传统毒株PEDV CV777的S基因序列及中国最早检测到的基因序列亲缘关系较远,可能浙江省PEDV的流行株可能属于一个新的基因型。同时研究结果提示PEDV-S基因的变异可能是现有CV777毒株疫苗免疫保护力不佳的原因。; 杜晓莉王一成吴润徐丽华袁秀芳李军星周晓丽; 关键词：猪流行性腹泻 S1基因

重组猪干扰素-α单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1: 2015年; 利用自动发酵罐培养毕赤酵母,甲醇诱导其分泌表达重组猪IFN-α（r Po IFN-α）;经硫酸铵沉淀、G-25琼脂糖柱脱盐处理及阴离子交换柱和分子筛层析纯化。以纯化r Po IFN-α蛋白作为抗原免疫6周龄BALB/c鼠3次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选和3~5次亚克隆,共获得5株均能稳定分泌抗r Po IFN-α单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚类鉴定、特异性和叠加试验结果表明,这5株抗体均属于Ig G1亚类,能与r Po IFN-α产生特异性反应,其抗原结合位点相同或相近。该研究有助于进一步推动r Po IFN-α单克隆抗体在猪免疫学以及猪疫病诊断中的应用。; 周晓丽袁秀芳杜晓莉李军星徐丽华王一成; 关键词：单克隆抗体特异性鉴定

猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立被引量：3: 2015年; 为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平,用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为0.5μg/m L,包被时间4℃过夜,5%脱脂乳的PBS封闭37℃2 h及4℃过夜。血清稀释度为1∶100;37℃作用45 min,辣根过氧化物酶标记兔抗猪Ig G稀释度为1∶10 000,37℃温育60 min,底物显色37℃15 min。抗体临界值为OD450nm≥0.30判为阳性,OD450nm≤0.27判为阴性,介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验,结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本184份,总阳性率为68.5%。; 顾昀周晓丽袁秀芳杜晓莉徐丽华李军星方维焕王一成; 关键词：猪流行性腹泻病毒重组N蛋白 ELISA

浙江省猪流行性腹泻病毒S1基因变异分析及间接ELISA的建立: 【目的】本研究针对临床采集的仔猪腹泻样品，进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）S1基因片段进行测序，分析近年浙江省PEDV的遗传变异和流行情况;将近期PEDV流行株S1基因片段进行原核表达，纯化表达蛋白，建立检测猪流行性腹泻...; 杜晓莉; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S1基因间接ELISA; 文献传递

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杜晓莉