李洪钊
- 作品数：12 被引量：131H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD3/CD22双特异性单克隆抗体的研制
- 2001年
- 佘鸣沈德诚孙同哲李洪钊白金芬黄丽华陈晓钎周立山芝芳张金香郭桂庆廖晓龙
- 关键词：双特异性单克隆抗体双功能抗体
- CD3/CD19双特异性单克隆抗体的制备、鉴定及其再导向的研究被引量：3
- 1998年
- 目的制备ＣＤ３／ＣＤ１９双特异性单克隆抗体（ＢｓＡｂ）并研究其生物学作用。方法采用杂交－杂交瘤技术制备ＢｓＡｂ，以双亚类ＥＬＩＳＡ和细胞结合试验确证ＢｓＡｂ的存在，再用５１Ｃｒ释放试验证实ＢｓＡｂ的再导向细胞毒效应。结果获得３株ＣＤ３／ＣＤ１９四源杂交瘤细胞，其中１株已成为稳定分泌ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ的四源杂交瘤细胞株。细胞毒试验表明ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ上清、ＣＤ３／ＣＤ１９纯化抗体以及ＣＤ３／ＣＤ１９化学交联ＢｓＡｂ都能增强ＣＤ３激活杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）对Ｎａｌｍ－６靶细胞的杀伤作用（Ｐ＜０．０５～０．００１）。结论ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ具有显著的再导向激活Ｔ细胞杀伤特异肿瘤靶细胞的功能，提示该ＢｓＡｂ有临床应用的潜在价值。
- 陈晓钎沈德诚孙同哲白金芬黄丽华佘鸣山芝芳李洪钊张金香刘俊霞郭桂庆周立
- 关键词：双特异性单克隆抗体CD3CD19
- 抗CD34单克隆抗体HI273的制备和鉴定
- 2000年
- 佘鸣沈德诚廖晓龙黄丽华周立李洪钊张金香郭桂庆陈辉树
- 关键词：CD34单克隆抗体
- E.coli表达HEV ORF2编码蛋白第112～607氨基酸片段的免疫原性及其诱生抗体的病毒中和活性被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨E.coli表达的戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码蛋白第112～607氨基酸片段(pORF2-56K)的免疫原性及其诱生抗体的病毒中和活性。方法 pORF2-56K免疫小鼠和豚鼠,用ELISA检测血清抗体效价。将HEV毒种与高效价豚鼠灭活血清在体外孵育后,接种于2BS细胞,用RT-PCR检测病毒RNA的复制情况。结果E.coli表达的pORF2-56K可诱导机体产生高水平的HEV特异性抗体和强烈的免疫记忆。该抗体可在体外有效中和HEV,使之失去在2BS细胞中有效复制的能力。结论 E-coli表达的pORF2-56K具有良好的免疫原性,且其诱生抗体具有中和HEV的能力,可作为HEV重组疫苗的候选抗原。
- 李洪钊冮宏映刘晓张光明孙强明李燕马雁冰孙茂盛
- 关键词：免疫原性中和活性戊型肝炎病毒
- 一种获取巴斯德毕赤酵母高拷贝重组子的新方法被引量：10
- 2003年
- 目的 :探讨一种简化的高效获取用于表达重组蛋白的巴斯德毕赤酵母高拷贝重组子的新方法 ,即多重转化筛选法。方法 :按经典方法转化宿主菌和利用G4 18多拷贝筛选法从转化子中筛选出含目的基因表达盒拷贝数最高的菌株 ,然后以之作为新一轮的转化宿主菌。如此重复进行数轮上述转化筛选过程 ,直到获得含有尽可能多拷贝目的基因表达盒的重组子 ;同时将此方法 ,即多重转化筛选法与经典方法进行比较。结果 :与经典方法相比 ,多重转化筛选法通过筛选较少量转化子即可轻而易举地获得较多的高拷贝重组子 ,工作量更小 ,效率更高。结论 :多重转化筛选法是一种更高效地获取毕赤酵母高拷贝重组子的新方法。
- 冮宏映李洪钊
- 关键词：巴斯德毕赤酵母
- SV40病毒的培养、增殖及鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的:建立SV40病毒在Vero细胞上培养的方法,观察其生长过程,获得SV40病毒,并建立相应的SV40病毒检测方法,为SV40灭活疫苗的制备奠定良好的基础。方法:在Vero细胞上培养和增殖SV40-776株病毒。收获病毒后,应用PCR、免疫荧光以及克隆特异性片段进行测序比较来鉴定SV40病毒。结果:SV40在Vero细胞中增殖很快,并且使细胞出现明显的病变。小规模分离到了SV40病毒颗粒,获得了病毒DNA。不同的鉴定方法均显示出良好的特异性。结论:探讨了SV40病毒病变的基本过程,建立了病毒的培养、增殖和鉴定的方法。
- 曹增孙强明孙娟蒋鸿超李洪钊别俊张光明孙茂盛戴长柏
- 关键词：SV40VERO细胞免疫荧光PCR
- SV40灭活疫苗的制备及其对小鼠免疫的研究被引量：4
- 2005年
- 猿猴空泡病毒40(Simian vacuolating virus 40,SV40) 属于乳多空病毒科,是一种DNA肿瘤病毒。亚洲猿类特别是恒河猴是SV40的天然宿主。感染SV40病毒可导致猴体急性病变或呈长期带毒状态,此外能诱使幼鼠产生肿瘤,并能使多种培养细胞发生转化。本研究初步建立了SV40 病毒在Vero细胞中的增殖培养方法,并且初步建立了β丙内脂灭活病毒的方法和纯化工艺。使用SV40病毒灭活疫苗对Balb/c小鼠进行了免疫,结果表明该疫苗具有较好的免疫原性。随后对SV40 病毒DNA在免疫小鼠的重要脏器中的整合情况进行了调查,结果表明SV40病毒DNA未在小鼠重要脏器中整合。本研究为SV40病毒灭活疫苗的研制和进一步开展猴体抗SV40 感染实验奠定了良好的基础。
- 曹增孙强明孙娟蒋鸿超李洪钊谢天宏孙茂盛戴长柏
- 关键词：灭活疫苗VERO细胞
- 戊型肝炎病毒ORF2编码多肽抗原的表达及其特性研究被引量：6
- 2004年
- 迄今所发现的唯一的戊型肝炎病毒 (HEV)中和表位定位于开放读码框架 2 (ORF2 )编码蛋白的第 5 78和第 6 0 7氨基酸(aa)之间的区域。将对应于此区域的基因片段通过一段柔性的甘氨酸铰链与乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)基因的 3’端相连 ,构建成HBV/HEV融合基因。该融合基因在毕赤酵母细胞内的表达产物为分子量约 2 9kDa的融合蛋白 ,具有组装成嵌合病毒样颗粒 (VLP)的能力。此嵌合VLP具有与HBsAgVLP相似的特性且保留了天然HBV/HEV双重抗原性。对此嵌合VLP特性的初步研究提示其可能具有HBV/HEV双价重组疫苗的潜在应用前景。
- 谢天宏李洪钊张光明冮宏映孙强明丁云菲马雁冰孙茂盛
- 关键词：戊型肝炎病毒中和表位
- huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定被引量：7
- 2002年
- 目的 构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0 IL 6 GM CSF(9- 12 7)表达质粒 ,将表达质粒导入E .coliDH5α中 ,诱导表达融合蛋白。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用MTT法测量其huIL 6和huGM CSF生物学活性。结果 pUC18 IL 6 GM CSF(9- 12 7)的序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在E .coliDH5α中得到高效表达 ,表达的融合蛋白占总蛋白含量的 30 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白 ,其纯度达到 96 %以上。融合蛋白具有huIL 6和huGM CSF的双重生物学活性 ,其促进huIL 6依赖细胞株B9和huGM CSF依赖细胞株TF 1增殖的比活性分别为 2 .86× 10 7U/mg和 3.33× 10 8U/mg。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)
- 孙强明戴长柏李洪钊丁云菲马雁冰刘红岩徐维明
- 关键词：GM-CSF融合蛋白基因克隆白细胞介素-6
- 4种重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-6融合蛋白对环磷酰胺引起的小鼠白细胞减少的恢复作用被引量：2
- 2004年
- 目的探讨 4种重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 /白细胞介素 6 (rhGM CSF/IL 6 )融合蛋白在小鼠体内的生物学活性 ,观察它们对环磷酰胺所致Balb/c系小鼠白细胞减少及造血功能损坏的影响。方法给小鼠注射环磷酰胺建立实验模型 ,分别同时注射融合蛋白 7d ,于第 13天摘除眼球采血 ,并进行外周血白细胞计数 ,骨髓有核细胞、单个核细胞记数及CFU GM的测定。结果 4种rhGM CSF/IL 6融合蛋白用药组与生理盐水对照组相比 ,小鼠外周血白细胞数 ,骨髓有核细胞和单个核细胞数以及骨髓CFU GM数均有所增加。结论 4种rhGM CSF /IL 6融合蛋白对环磷酰胺所致小鼠外周血白细胞数减少 ,骨髓有核细胞、单个核细胞数和骨髓CFU GM数减少以及造血功能的损坏具有不同程度的恢复作用。
- 孙强明李洪钊别俊曹增张光明孙雯佳孙茂盛徐维明
- 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白白细胞造血系统
