李朝飞
- 作品数：30 被引量：66H指数：5
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备被引量：2
- 2007年
- 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。
- 李玲玲李朝飞陈维春庞义
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达抗体
- 杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备被引量：1
- 2007年
- 用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。
- 李玲玲李朝飞庞义
- 杆状病毒SpltMNPV病毒粒子中存在泛素复合物被引量：2
- 2004年
- 通过间接免疫荧光分析,发现在斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)感染的Sl＿zsu＿1细胞的细胞质中存在大量的泛素或泛素复合物。Western印迹分析表明,在SpltMNPV多角体源病毒粒子与芽生型病毒粒子中均存在相对分子质量为30×103～65×103的泛素复合物。推测SpltMNPV在出芽或组装的过程中由感染细胞的胞质中获得泛素复合物。
- 李朝飞尹崇何敏儿庞义
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒SPLTMNPV泛素
- 斜纹夜蛾核多角体病毒VP39-GST融合蛋白原核表达被引量：3
- 2006年
- 用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)vp39全长基因。将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达质粒pGEX-4T-vp39,转化Escherichia.coliBL21(DE3),在1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下超量表达了与理论预测值相符的一个约60kDa的VP39-GST融合蛋白。VP39-GST融合蛋白的成功表达为进一步研究VP39在病毒侵染过程中与宿主细胞成分或病毒粒子蛋白间的相互作用奠定了基础。
- 李赛男李朝飞潘丽晶吴文碧庞义
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒融合蛋白原核表达
- 斜纹夜蛾核多角体病毒SPLT97蛋白及其抗体的制备
- 2008年
- 目的:原核表达斜纹夜蛾核多角体病毒(SpltMNPV)SPLT97蛋白并制备该蛋白的多克隆抗体,为深入研究其功能提供基础。方法:从SpltMNPV基因组中经PCR扩增得到了Splt97基因,克隆至含有6×His编码序列的原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达SPLT97蛋白;纯化重组表达的蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔制备蛋白的多克隆抗体;采用Western印迹分析感染SpltMNPV的Spli-221细胞中SPLT97蛋白的表达。结果:实现了SPLT97蛋白的原核表达,得到了该蛋白的多克隆抗体并从病毒感染细胞中检测出相对分子质量为13×103的SPLT97蛋白。结论:获得的抗体可以用于进一步研究SPLT97蛋白的功能。
- 陈维春李朝飞杨凯庞义
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒抗体原核表达
- 斜纹夜蛾核多角体病毒gp37及其邻近序列的克隆及分析被引量：8
- 2001年
- 从斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)基因组中克隆了 gp37基因 .分子生物学软件分析表明 ,在 gp37基因内部存在糖基化位点 .含有晚期表达基因的启动子序列(ATAAG) ,推测为晚期表达的病毒膜糖蛋白基因 .通过GP37蛋白的同源性比较 ,绘制了以 gp37基因为基础的杆状病毒进化树 ,发现与以多角体蛋白基因 (polyhedrin)为基础所绘制的杆状病毒分子进化树有较大差异 .以polyhedrin基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒 (Bombyxmorinucleopolyhedrovirus,BmNPV)与杆状病毒代表种———苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamultinucleocapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)分开 ,根据 gp37基因分析则将二者归到同一分枝 。
- 李充璧李朝飞闫庆生胡国栋庞义
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒克隆
- 杆状病毒SeMNPV Se29基因的克隆、表达与抗体制备
- 2011年
- 目的:克隆和表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMN-PV)ORF29全长基因(Se29),制备SE29蛋白的多克隆抗体.方法:用PCR的方法扩增得到Se29基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下超量表达了SE29蛋白.采用割胶回收的方法纯化SE29蛋白,以纯化的SE29蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔制备了特异的抗SE29蛋白的抗体.结果:构建了Se29基因原核表达质粒,在大肠杆菌中实现了SE29蛋白的原核表达,获得了SE29蛋白的多克隆抗体,West-ern blot分析表明该抗体能与SeMNPV感染的细胞蛋白样品发生特异性反应.结论:SE29蛋白的多克隆抗体的获得为进一步研究SE29蛋白的功能奠定了基础.
- 李赛男李朝飞庞义杨凯
- 关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒克隆原核表达抗体
- 斜纹夜蛾核多角体病毒的侵染机理及疾病流行规律研究
- 庞义王珣章余健秀杨凯李朝飞代小江苏德明李广宏陈其津袁美妗宋少云温小昭何敏儿
- 该项目是在原来工作的基础上，选择斜纹夜蛾和甜菜夜蛾核多角体病毒为对象，应用分子生物学、现代生物技术和遗传工程的原理和方法，着重研究病毒与宿主细胞的识别、入侵及复制，测定SpltMNPV基因组全序列，找出病毒与侵染宿主直接...
- 关键词：
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒功能基因
- 甜菜夜蛾cDNA文库的构建被引量：11
- 2006年
- 以甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)幼虫为材料建立了cDNA表达文库,经检测文库的初始滴度为1.1×105pfu/mL,重组率为97%,扩增后文库的滴度为5.4×107pfu/mL。用设计的2对引物筛选该文库,得到468 bp的1个片段,分析后证实是几丁质合成酶基因I保守区域的1个片段。该cDNA文库为进一步筛选甜菜夜蛾功能基因奠定了基础。
- 孙小洁李朝飞于航裘雪梅李庆张文庆
- 关键词：甜菜夜蛾CDNA文库
- 杆状病毒Ac60基因的原核表达与亚细胞定位研究
- 2009年
- 用PCR方法从AcMNPV基因组中扩增到ORF60基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建pET-Ac60质粒,再将该质粒转化大肠埃希菌BL21,在IPTG诱导下表达了分子量约为16 ku的融合蛋白。用纯化的表达产物免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,应用该抗体检测了AcMNPV感染的昆虫宿主细胞(Sf9)中ORF60基因的表达,结果显示:在感染后的细胞中有2条分子量分别约为33 ku和17 ku蛋白质带能与所制备的抗体发生特异性反应。间接免疫荧光分析发现:在病毒感染的晚期,Ac60蛋白同时存在于所感染宿主的细胞核和细胞质中。
- 李玲玲李朝飞庞义杨凯
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达亚细胞定位
