李晓彤 作品数:16 被引量:7 H指数:2 供职机构: 厦门大学 更多>> 发文基金: 厦门市科技计划项目 福建省科技重点项目 国家基础科学人才培养基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 理学 更多>>
抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位单克隆抗体制备和鉴定及其应用 被引量:3 2014年 目的制备抗幽门螺杆菌(Hp)的单克隆抗体(mAb),并对该Hp mAb进行分析鉴定,建立一种检测患者由于Hp感染而在血清中产生Hp抗体的竞争ELISA检测方法。方法用灭活的Hp免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备Hp mAb。我们采用Hp混合蛋白包括毒素相关蛋白A(CagA)、空泡毒素A(VacA)和尿素酶以及灭活的Hp菌体筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA和Western blot等技术对所获得的Hp mAb进行鉴定。利用辣根过氧化物酶(HRP)标记所筛选的Hp mAb来建立一个可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。结果通过大规模的杂交瘤筛选,我们选择了1株将其命名为C3 Hp mAb,其抗体亚型为IgG2a,腹水效价可达1×107。Western blot法、ELISA和质谱检测结果显示,该C3 Hp mAb能特异地识别Hp的尿素酶B亚单位。用这个C3 Hp mAb,我们建立了一种可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。结论成功获得一种可以特异识别Hp尿素酶B亚单位的mAb,建立了一种可检测患者血清中Hp抗体的竞争ELISA。 丁焕弟 韩莹 黄安根 孟圆 胡华新 李晓彤关键词:幽门螺杆菌 单克隆抗体 竞争ELISA Tip60的pSer86单克隆抗体与制备方法和应用 Tip60的pSer86单克隆抗体与制备方法和应用,涉及一种新的细胞株和单克隆抗体。所述细胞株为Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体细胞株pSer86-13MAb;所述Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体是由... 李晓彤 陈艳 苏勇 李阳 叶志云一种检测结核菌蛋白抗原的试剂盒及其制备方法 一种检测结核菌蛋白抗原的试剂盒及其制备方法,涉及两种结核菌蛋白抗原。试剂盒设有盒体、PBST洗液瓶、四甲基联苯胺显色液瓶、CFP10-ESAT6蛋白标准样品瓶、PPD蛋白标准样品瓶、样品稀释液瓶、聚苯乙烯酶联检测板、终止... 李晓彤 于占娇 杨赟文献传递 曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体的制备及初步应用 被引量:3 2020年 目的:制备抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体,并基于获得的抗体建立用于快速准确检测曲霉菌感染的双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),以期可用于侵袭性曲霉菌病的临床诊断。方法:提取曲霉菌半乳甘露聚糖后免疫BALB/c小鼠,筛选与制备抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体,通过间接ELISA法与Western Blot方法开展单克隆抗体检测性能分析,使用获得的单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA方法,并初步应用于曲霉菌感染血清检测。结果:获得抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体5株,均可特异性识别曲霉菌半乳甘露聚糖,以其中性能最佳的3C9抗体和辣根过氧化物酶标记的3C9抗体配对为基础,建立了双抗体夹心ELISA方法,通过初步评价确定该方法可应用于临床侵袭性曲霉菌病血清检测,并且该方法与现有商品化试剂盒相比检测背景值较低,可更有效区分曲霉菌感染阴阳性血清。结论:本研究筛选获得针对曲霉菌半乳甘露聚糖的特异性单克隆抗体,以该抗体为基础建立双抗体夹心ELISA方法具有潜在转化应用前景,可为侵袭性曲霉菌病的临床诊断提供支持。 黄茜 杨萍萍 张强 廖雨晴 李晓彤关键词:曲霉菌 半乳甘露聚糖 酶联免疫吸附法 单克隆抗体 PFKFB3蛋白的第194位酪氨酸的磷酸化及其应用 PFKFB3蛋白的第194位酪氨酸的磷酸化及其应用,涉及PFKFB3蛋白酪氨酸第194位的磷酸化。通过各种基于抗原‑抗体的方法检测细胞或组织中PFKFB3‑Y194位点的磷酸化水平;开发能抑制PFKFB3‑Y94位点磷酸... 李勤喜 马欢欢 张佳 李晓彤一种筛选细胞纺锤体检验点抑制剂的方法 一种筛选细胞纺锤体检验点抑制剂的方法,涉及一种纺锤体检验点抑制物。以Hela细胞为模型,根据纺锤体检验点在细胞分裂中的作用机制,利用有丝分裂细胞与间期细胞有着不同粘着力的特性,利用MTT的实验原理,借助一个已知的阳性纺锤... 李晓彤 吴振华文献传递 Mucin 16蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1 2012年 目的:在原核生物中表达带有His标签的mucin 16N端重组蛋白(简称为His-mucin 16N),制备抗mucin 16的单克隆抗体(mAb)。方法:将mucin 16基因片段插入原核表达载体pET-32,在大肠杆菌中表达重组蛋白,用亲和纯化方法纯化后免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合。筛选可稳定分泌抗mucin 16抗体的阳性单克隆杂交瘤细胞株,用Westernblot、ELISA、免疫荧光和免疫组化等方法分析和鉴定抗mucin16的mAb。结果:表达并纯化了His-mucin 16N蛋白;筛选出几株可稳定分泌特异性抗人mucin 16 mAb的细胞株;挑选出效价高、特异性好的1株进行纯化。获得的抗mucin 16 mAb,可用于Western blot、ELISA、免疫组化、免疫荧光等检测,并鉴定该抗体亚型为IgG1。通过上述免疫学实验,分析了在不同肿瘤细胞中mucin 16的表达情况。结论:在原核生物中成功表达和纯化带His标签的mucin 16N重组蛋白,制备出具有高特异性的抗mucin16的mAb。 杨赟 丁宇婷 龚慧婷 于占娇 李晓彤关键词:MUCIN CA125 蛋白纯化 单克隆抗体 杂交瘤 Smurf2单克隆抗体的制备与鉴定 2012年 Smad泛素调节因子家族的两个E3泛素连接酶成员Smurf1和Smurf2(Smad ubiquitin regulatory factor 1and 2)具有至少80%的同源性.为了更好地研究它们的功能,需要获得一个能区分Smurf1和Smurf2的单克隆抗体.选取Smurf2与Smurf1蛋白序列中仅有的非同源区域序列作为抗原免疫Bal b/C小鼠,成功制备若干株能稳定分泌抗Smurf2抗体的杂交瘤细胞株.对所获得的单克隆抗体的效价和特异性等进行一系列检测,结果表明该抗体能特异性地识别过表达及细胞内源Smurf2蛋白.此外该抗体能被应用于Western blot和免疫荧光实验,从而为深入研究Smurf2的细胞生物学功能提供了良好的实验基础. 丁宇婷 林志妙 李振 李晓彤关键词:SMURF2 杂交瘤 单克隆抗体 裂殖酵母Hsp90多克隆抗体的制备与鉴定 2011年 为制备兔抗裂殖酵母Hsp90多克隆抗体,在通过PCR获得了裂殖酵母Hsp90(Swo1)基因后,构建了pMALc2x-Swo1表达载体,可用于表达编码正确氨基酸序列的目的基因。转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Amylose Resin柱纯化。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。纯化后的MBP-Swo1融合蛋白抗原加福氏完全佐剂背部皮内注射首次免疫新西兰大白兔,第28天用MBP-Swo1融合抗原加福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第35天时再次免疫。第49天心脏采血。收集血清后,用免疫印迹(westernblot)检测Swo1多克隆抗体的特异性。免疫印迹检测结果显示该抗体能够特异性识别内源性的裂殖酵母Hsp90/Swo1蛋白,但并不识别人类细胞中的Hsp90α/β。 李文珠 李晓彤 张连茹 靳全文关键词:裂殖酵母 多克隆抗体 自制NSE单抗的鉴定及其双抗夹心ELISA方法的建立 2012年 目的:制备并鉴定NSE(Neuron-specific enolase)单克隆抗体,建立可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA方法。方法:用本实验室已表达纯化的NSE融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用WB、IP、IF、IHC等方法对获得的NSE单抗进行鉴定及亚型检测。利用辣根过氧化物酶标记纯化后的NSE单抗,建立一个可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA法。结果:通过分析和鉴定,选定2株可稳定分泌抗NSE抗体的杂交瘤细胞株,效价达4.2×107~6.5×107,亚型为IgG2b。免疫印迹结果显示,该抗体不仅能识别细胞内源NSE蛋白,还能识别分泌到细胞培养上清液中的NSE蛋白,此外还可用于免疫荧光及免疫组化检测。文中所建立的双抗夹心ELISA法,最低检测极限为8.85 ng/ml。结论:成功获得了效价高、灵敏度好及特异性强的NSE单抗,建立了一个双抗体夹心ELISA检测系统,具有良好的临床应用前景。 丁焕弟 林志妙 杨赟 于占娇 龚慧婷 李晓彤关键词:单克隆抗体 双抗体夹心ELISA