李华
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人防御素-5基因的克隆和真核表达载体的构建
- 2010年
- 目的对人防御素5(HD-5)基因进行克隆,构建真核表达载体HD5-pPICZαA。方法从人cDNA文库中PCR扩增HD-5基因片段,用EcoRⅠ和XbaⅠ分别双酶切HD-5基因扩增产物和毕赤酵母表达载体pPICZαA,用T4DNA连接酶连接目的基因片段和pPICZαA,然后转化到E.coli Top10中,Zeocin筛选转化子并进行PCR、酶切和序列鉴定。结果提取阳性克隆的重组质粒,EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后跑电泳获得预期条带;同时重组质粒经序列测定,证实HD-5基因正确插入pPICZαA中,插入位置、方向均正确。结论成功构建人防御素5基因的真核表达载体HD5-pPICZαA,为HD-5蛋白的真核真核表达奠定基础。
- 陆航李华吴学敏单颖
- 关键词：克隆毕赤酵母
- pGAPZαA/HD5酵母表达载体的构建被引量：4
- 2009年
- 目的利用分子生物学技术和方法将pGAPZαA质粒改建为带有人防御素5(HD5)基因的新型表达载体pGAPZαA/HD5,为大量生产和提纯具有生物活性人防御素5抗菌肽的研究提供实验基础。方法PCR技术,以设计的引物P1/P2从克隆载体pMD18-T/HD5中扩增人防御素5基因片段,并将扩增出来的目的基因和pGAPZαA质粒用EcoRI和XbaI双酶切后连接构成重组质粒,然后转化至E.coliTop10感受态细胞,筛选阳性克隆。最后对PCR及酶切鉴定含有目的基因的克隆进行测序和电泳。结果获得HD5基因片断大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;电泳结果证明已将此片段克隆到pGAPZαA内。结论成功构建了HD5基因的新型表达载体pGAPZαA/HD5。
- 吴学敏单颖李华卢颖佟伟张轶博李会
- 关键词：克隆毕赤酵母
- PU-498钠氢交换蛋白-1的表达与AD大鼠模型海马神经元凋亡的关系研究
- 方伯言李华黄美风
