李兴
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 福林霉素生物合成基因簇的组装和异源表达被引量：3
- 2022年
- 【目的】本研究旨在以来源于林可链霉菌NRRL2936中的nosokomycin B_(2)的生物合成基因簇(noso-BGC)为基础,组装获得完整的福林霉素生物合成基因簇(pho-BGC),再利用异源表达策略,激活pho-BGC的表达并通过底盘宿主的优选实现福林霉素发酵产量的提升。【方法】首先,在林可霉素基因簇缺失突变株JCK126基因组中,整合了福林霉素生物合成所缺失的moeA4、moeB4和moeC43个环合成基因(来源于加纳链霉菌ATCC 14672),通过对重组菌株LX19的发酵和提取物的检测确认了pho-BGC在林可链霉菌中的沉默表达。然后,利用基因组装技术将moeA4、moeB4和moeC43个环合成基因与noso-BGC进行连接,得到了含有完整pho-BGC的质粒pJQK572。接着,通过接合转移将质粒pJQK572分别导入Streptomyces coelicolor M1152、Streptomyces lividans SBT18、Streptomyces lividans LJ1018和Streptomyces coelicolor M1446宿主中获得不同的重组菌株LX20、LX21、LX22和LX23。最后,通过对不同重组菌株进行发酵并对提取物进行生物活性分析以及UPLC-TOF MS检测,确定福林霉素在不同异源宿主中的合成情况,并结合二级质谱分析(ESI-MS_(2))对其结构进行确定。【结果】pho-BGC在天蓝色链霉菌M1152中成功实现了异源表达,并在4拷贝天蓝色链霉菌M1446中发酵产量提高了约20%。【结论】本研究通过系统的发酵检测确定了福林霉素生物合成基因簇在林可链霉菌中是沉默的;然后,在nosokomycin B_(2)基因簇的基础上,构建了含有完整pho-BGC的质粒pJQK572;获得了pho-BGC在不同宿主中的异源表达产物后,利用多种液相-质谱联用技术对发酵提取物进行检测,确定了pho-BGC在天蓝色链霉菌M1152中成功表达,接着通过多拷贝整合技术在菌株LX23中将福林霉素的产量提高了约20%。完整pho-BGC的拼接和在菌株LX20&LX23中的异源表达,为福林霉素生物合成机制的探索和高产优化奠定了基础。
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- 关键词：异源表达
- 一种在白色链霉菌中高效合成默诺霉素A的方法
- 本发明公开了一种在白色链霉菌中高效合成默诺霉素A的方法；是基于默诺霉素A生物合成基因簇异源表达宿主Streptomyces.albus导入定点突变型A类青霉素结合蛋白基因优化其异源宿主的方法，默诺霉素A通过作用于细菌细胞...
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- 抗细菌药物默诺霉素的化学生物学研究进展被引量：1
- 2021年
- 默诺霉素(moenomycins)家族类化合物主要是由链霉菌产生,属于磷酸糖脂类抗生素。该类化合物通过与细菌细胞壁肽聚糖糖基转移酶(peptidoglycan transferase,PGT)的活性位点结合,可以抑制众多革兰氏阳性细菌细胞壁的合成,具有很强的生物活性和重要的应用开发潜力。本文针对默诺霉素的化学结构、生物活性机制、抗性机制、生物合成研究途径、外排机制和新结构创制等化学生物学方面进行了系统综述,并对默诺霉素化学生物学研究现状以及可能存在的问题进行了总结,旨在为高活性磷酸糖脂类临床药物的研究与开发提供借鉴。
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- 关键词：生物合成
- 术后认知功能障碍的临床研究
- 本研究分为二部分：
第一部分、老年患者术后认知功能障碍发生率及相关因素分析的研究
目的：研究老年患者术后认知功能障碍（POCD）的发生率及相关影响因素。
方法：对2005年1月至2006年6...
- 李兴
- 关键词：老年患者术后并发症认知功能障碍Β-淀粉样蛋白C-反应蛋白
- 文献传递
- 颅内血块成像检测关键问题研究
- 脑部血块(ICH)对患者生命健康危害极大,致死致残率较高。应用近场微波探测技术对颅内血块的探测成像是近年来生物电磁学研究领域的热门问题,对医学检测具有重要的价值。目前,一方面,如何设计有效的探测源进行颅内全方位高效探测受...
- 李兴
- 文献传递
- 差分激励的圆形贴片微带天线特性分析
- 研究了差分激励的圆形贴片微带天线特性.腔模理论模型被扩展分析差分激励下的阻抗特性,对比HFSS仿真结果,说明扩展模型的正确性.基于HFSS仿真,比较了差分和单端激励下圆形贴片微带天线的反射,阻抗和辐射特性.比较可知,差分...
- 徐光辉李兴
- 关键词：微带天线
- 一种在白色链霉菌中高效合成默诺霉素A的方法
- 本发明公开了一种在白色链霉菌中高效合成默诺霉素A的方法；是基于默诺霉素A生物合成基因簇异源表达宿主Streptomyces.albus导入定点突变型A类青霉素结合蛋白基因优化其异源宿主的方法，默诺霉素A通过作用于细菌细胞...
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- 文献传递
- 浅紫灰链霉菌CQ01819及其次级代谢产物的定向发掘被引量：4
- 2020年
- 【目的】采用特征次级代谢产物生物合成的保守功能基因探针,定向分离土壤中产生特征次级代谢产物的菌种资源,借助基因转录分析为导向的培养基优化方法,获得目标次生代谢产物。【方法】首先,根据5种特征次级代谢产物保守的合成功能基因设计简并引物,定向从土壤样品中筛选、分离并纯化菌株。然后,以RT-qPCR为指导开展目标产物的发酵培养基优化;最后,对菌株进行发酵,利用多种色谱技术分离纯化目标天然产物,并结合高分辨质谱与核磁共振等技术对所获得的化合物进行结构鉴定。【结果】从土壤中筛选得到了一株AHBA合酶基因和环氧化酶基因均为阳性的链霉菌菌株(编号为CQ01819),根据转录分析优化发酵培养基,最终从该菌株分离纯化得到了含有AHBA结构单元的丝裂霉素C、聚醚类抗生素莫能霉素A和缬吲霉素。【结论】本研究通过菌株的定向分离纯化,筛选得到了产生预期抗生素的浅紫灰链霉菌菌株CQ01819;基于RT-qPCR指导的发酵培养基优化,确定了菌株的发酵条件;获得发酵粗提物后,采用多种色谱整合技术和光谱分析策略,快速分离并鉴定了目标产物。该研究为目标菌种资源的定向筛选、菌株的发酵条件的快速优化和化合物的定向分离提供了较好的参考。
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- 关键词：链霉菌
