曾卫
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Endoglin基因沉默对卵巢癌微血管内皮细胞干扰效应的研究被引量：1
- 2010年
- 目的:构建Endoglin基因siRNA的表达载体,转染至原代培养的卵巢癌微血管内皮细胞(ovarian carcinoma-derived microvascularendothelialcells,ODMECs),并观察其对ODMECs的干扰效应,为探讨使用siRNA抗卵巢癌血管生成的可行性提供实验基础。方法:根据siRNA表达载体的设计原则,设计并合成两个靶基因序列,寡核苷酸退火后插入到pGenesil-1载体中,并对重组质粒进行测序鉴定,证实Endoglin真核表达载体构建成功,插入片段测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。将重组真核表达质粒pGenesil-ENG1、pGenesil-ENG2采用脂质体法转染原代ODMECs细胞,应用半定量RT-PCR观察转染后48h重组质粒对EndoglinmRNA表达的影响;MTT法检测转染后ODMECs细胞增殖的变化;并且通过光镜观察转染pGenesil-ENG1后,对ODMECs体外二维管腔样结构形成的影响。结果:将构建成功的Endoglin基因siRNA表达载体pGenesil-ENG1和pGenesil-ENG2转染至ODMECs细胞,48h后同阴性质粒pGenesil-H和未转染组相比,二者均可引起靶基因表达水平的显著性下降。转染了pGenesil-ENG质粒的ODMECs,其生长较未转染组和阴性质粒pGenesil-H明显受到抑制(P<0.01);此外,转染了pGenesil-ENG1质粒的ODMECs体外二维血管腔样结构的形成较对照组亦有明显减少(P<0.01)。结论:成功构建了Endoglin基因siRNA表达载体,转染至ODMECs后可下调Endoglin在靶细胞中的表达,并且前者能够抑制ODMEcs的增殖和体外二维管腔样结构的形成。为进一步研究采用RAN干扰技术进行卵巢癌血管生成的治疗奠定了基础,同时也为抗卵巢癌血管生成的治疗摸索了有效的基因靶点。
- 徐燕王丹朱丽芳曾卫谢尧梁志清
- 关键词：ENDOGLINSIRNA质粒内皮细胞卵巢癌
