曹诣斌
- 作品数：26 被引量：96H指数：7
- 供职机构：浙江师范大学化学与生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生自然科学总论更多>>
- 基于核酶技术的人线粒体色氨酸tRNA的高效转录及其活性鉴定
- 2009年
- 利用T7RNA聚合酶(T7 RNA polymerase,T7 RNAP)的体外转录方法因其简便、高效而在RNA制备中得到广泛应用,但该法由于T7RNAP的启动子跨越转录起始位点而会导致转录产物多出附加序列;如果去掉T7启动子的转录起始位点,则会严重降低T7RNAP的转录活性。本实验很好地消除了以上弊端,将T7RNAP的高效转录系统与核酶高度专一的自剪切技术相结合,成功构建了一种不影响转录效率的体外转录方法,而且转录后核酶能够在设计的特定位点进行自剪切并释放出目的RNA,得到了活性达113.6pmol/μg的人线粒体色氨酸tRNA(HmtRNATrp(UCA))。该方法转录效率高、重复性好,适合RNA的大量精确制备。
- 巩菊芳曹诣斌陈祥龙齐育平杨小强金晓玲
- 关键词：体外转录核酶
- 青藏高原代表性脊椎动物低氧应答功能基因组比较研究
- 环境相关功能基因组比较研究对认识物种对环境适应与进化的分子机理具有十分重要的理论意义,本文就本实验室近年相关低氧应激与适应功能靶基因组研究结果进行了初步综合和分析。
- 陈学群杨甲芳赵阳石艳军王世君刘宇曹诣斌杜继曾
- 关键词：IGFHIF根田鼠高原鼢鼠
- 文献传递
- 佛手氨基酸及多糖含量的测定被引量：8
- 2002年
- 为了测定佛手中氨基酸及多糖的含量 ,采用微量凯氏定氮法测定粗蛋白 ,氨基酸自动分析仪测定氨基酸 ;用柱层析法分离、纯化多糖 ,电泳鉴定其纯度 ,苯酚 硫酸法比色测定多糖的含量 .结果表明佛手中w(粗蛋白 )为 9.375 %,w(氨基酸 )为 8.334 %,含 16种氨基酸 ,其中人体必需的氨基酸有 6种 ;佛手水提取液经分离、纯化 ,得到 3种多糖 ,经电泳鉴定为单一多糖 ,命名为JFS Ⅰ、JFS Ⅱ和JFS Ⅲ ,苯酚 硫酸比色法测得 3种多糖的质量分数分别为 41.2 %、9.8%和 2 1.4%.说明佛手具有较为丰富的氨基酸和多糖 ,提示有较高的营养价值和药用价值 .
- 金晓玲曹诣斌徐丽珊殷英
- 关键词：佛手氨基酸多糖营养价值药用价值
- 葡甘露聚糖海绵环境友好制备方法
- 本发明是一种葡甘露聚糖海绵环境友好制备方法。本发明的目的是针对现有的沐浴用魔芋海绵的生产工艺中所存在的产生大量的碱性污水和脱色污水，严重污染环境的不足之处，提供一种在生产工艺中不会产生的碱性污水和脱色污水的沐浴用葡甘露聚...
- 邵邻相张均平郭卫东曹诣斌巩菊芳
- 文献传递
- 低氧对金鱼鳃形态重塑过程中EMT途径的影响
- 2021年
- 为探究金鱼鳃形态重塑过程中低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)对细胞黏附的影响,以金鱼鳃组织为材料,通过克隆金鱼E-钙黏蛋白(E-cadherin)基因约2000 bp的启动子区域,对启动子转录位点进行了生物信息学分析,并通过荧光定量PCR检测了相关基因的表达水平,利用免疫组化对金鱼鳃组织中的E-cadherin蛋白进行了定位.结果表明:金鱼E-cadherin启动子区序列可能存在Twist,GCM-1和HOXB9等多个转录结合位点;低氧促进金鱼鳃组织上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)途径关键转录因子Snail的表达,但对另一个关键转录因子Twist无明显作用;低氧处理促进金鱼鳃组织E-cadherin蛋白的表达,这一过程可以被蛋白酶体抑制剂Botezomib和HIF-1α反义核酸处理抑制.研究结果显示,低氧对金鱼鳃组织EMT相关基因的调控模式与人类、小鼠等哺乳动物存在一定区别,可为后续金鱼鳃形态重塑机制的研究提供参考.
- 王华刘梦琦胡诗蒙王冬杨曹诣斌
- 关键词：金鱼低氧细胞黏附E-钙黏蛋白
- 高原鼢鼠HIF-2α的定点突变与真核表达被引量：1
- 2017年
- 高原鼢鼠(Myospalax baileyi)是一种世居青藏高原东部的地下小型穴居啮齿类动物,其生活环境最大的特点是低氧和高二氧化碳。低氧诱导因子-2α(Hypoxia Induced Factor,HIF-2α)是调节动物低氧适应的主要转录因子之一。在高原鼢鼠的HIF-2α氨基酸序列中,其他脊椎动物保守的第480位苏氨酸变异为丝氨酸。通过真核表达载体构建、定点突变和瞬时转染,真核表达获得GFP融合蛋白,为进一步研究该物种中特有的480位丝氨酸变异对HIF-2α磷酸化修饰和转录活性的影响奠定基础。
- 吕雅琪李鑫曹诣斌
- 关键词：高原鼢鼠低氧
- 低氧与HIF-1对谷氨酰胺代谢的影响
- 2021年
- 在氧气充足的情况下,葡萄糖可以通过糖酵解和线粒体柠檬酸(TCA)循环为细胞提供能源和碳源。低氧会使TCA循环和电子传递链(ECT)受到抑制,葡萄糖无法被完全氧化,细胞缺乏能源和碳源。为了补充碳源和能源,低氧细胞促进谷氨酰胺代谢途径合成的柠檬酸参与TCA循环,为细胞提供必要的能源和碳源,低氧诱导因子(HIF-1)参与了这一调控。本文主要介绍了低氧环境下的谷氨酰胺代谢,分析了HIF-1与谷氨酰胺代谢之间的相互作用,为低氧糖代谢的调控机制提供理论依据。
- 刘梦琦王冬杨邬超越曹诣斌
- 关键词：低氧HIF-1谷氨酰胺糖代谢
- 低温胁迫下佛手和枳乙烯应答因子6(ERF6)表达变化的比较分析被引量：9
- 2011年
- 以柑橘属寒敏感植物佛手‘青皮’品种叶片cDNA为模板,通过RT-PCR与RACE扩增,获得一个1160bp的乙烯应答因子(ethylene response factor,ERF)基因的cDNA序列,其基因编码区共999bp,含有一个保守的AP2/EREBP结构域,与拟南芥AtERF6为同源基因,命名为CmsERF6(GenBank登录号为HQ698835)。4℃低温处理佛手和枳(柑橘属近缘种耐寒植物)植株,测定其寒胁迫生理指标(电解质渗出率、丙二醛含量)。使用实时荧光定量PCR,对佛手和枳叶中的ERF6表达含量进行测定分析,结果表明:低温对佛手与枳的ERF6表达均具有诱导作用,且表达量的变化趋势存在明显的差异。尤其在枳中,ERF6的表达较对照组上升约4000倍,且电解质外渗率的变化与ERF6基因表达量变化具有一致性,说明ERF6基因参与低温胁迫应答。
- 曹诣斌石瑞陈文荣郭卫东
- 关键词：佛手低温胁迫
- E-Cadherin的表达调控及对细胞增殖的影响
- 2022年
- E-钙粘蛋白(E-cadherin)主要在上皮细胞膜上表达,发挥细胞间粘附作用并抑制入侵,其在细胞增殖的过程中也扮演着重要角色,主要通过Wnt,Hippo信号通路及Rho家族的小GTPases影响上皮细胞的增殖。E-cadherin在细胞膜上的稳定性和准确的功能通过与连环蛋白(catenin, CAT)形成稳定的复合物来实现。E-cadherin功能缺失在癌症细胞中被发现,其表达失调主要发生在表观遗传学水平。E-cadherin表达水平下降与肿瘤的出现、分化、侵入和运动转移等密切相关。本文主要介绍了E-cadherin对细胞增殖的影响,分析了其在肿瘤发生和发展过程中调节细胞增殖、侵袭和细胞内信号传导的一些分子机制。
- 王冬杨吴玉青应方莉曹诣斌
- 关键词：E-CADHERINCAT细胞增殖转录调控癌症
- 金鱼HSC70和HSP40基因克隆及其原核表达被引量：1
- 2018年
- 【目的】克隆金鱼热激同源蛋白70(HSC70)和热休克蛋白(HSP40)基因,构建原核表达载体并通过IPTG诱导表达获得目的蛋白,明确HSC70和HSP40蛋白的生物学功能,为揭示金鱼的高温应答机制打下基础。【方法】提取金鱼鳃组织总RNA,利用RT-PCR扩增金鱼HSC70和HSP40基因,将目的基因片段克隆至线性空表达载体p ET-32a上构建原核表达载体p ET-32a-HSC70和p ET-32a-HSP40,转化大肠杆菌Rosetta表达菌株后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白。【结果】金鱼HSC70基因CDS序列全长1950 bp,编码650个氨基酸;金鱼HSP40基因CDS序列全长996 bp,编码332个氨基酸。金鱼HSC70氨基酸序列与斑马鱼、人类、家鼠、金线鲃和草鱼的相似度分别为96.28%、95.50%、95.35%、98.15%和98.61%;HSP40氨基酸序列与斑马鱼的完全一致(相似度100.00%),与普通鲤鱼、金线鲃、人类和家鼠的相似度均为94.12%。原核诱导表达获得的融合蛋白TrxHSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,其大小约91.5和55.0 k D,均能与Anti-Trx抗体发生特异性反应。【结论】HSC70和HSP40蛋白在鱼类及哺乳动物中高度保守,经原核诱导表达获得的金鱼融合蛋白Trx-HSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,且携带有Trx标签,能与Anti-Trx抗体发生特异性反应,可作为互作蛋白用于RNA pull down试验。
- 金新萍谢倩吕斌曹诣斌
- 关键词：金鱼克隆原核表达载体
