曹胜波
- 作品数：131 被引量：498H指数：14
- 供职机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生文化科学生物学更多>>
- 稳定表达日本脑炎病毒NS2B蛋白的细胞系的建立
- 2015年
- 本研究旨在建立能稳定表达日本脑炎病毒NS2B蛋白的细胞系。利用RT-PCR扩增NS2B基因,并将之克隆至带嘌呤霉素抗性基因的慢病毒载体Psin-EF2-MCS-Pur中。然后用慢病毒载体系统包装慢病毒,并将之转导正常293T细胞,通过嘌呤霉素加压筛选纯化细胞系。最后利用Western-blot、间接免疫荧光试验等方法对NS2B蛋白在细胞系中的表达情况进行了鉴定。结果表明,NS2B蛋白可以在所建立的细胞系中被稳定、高效地表达。在此基础上,利用该细胞系,通过串联亲和层析与质谱技术,筛选出了与NS2B可能相互作用的宿主蛋白,从而为深入阐明NS2B的功能及其与宿主细胞相互作用机制的研究奠定了基础。
- 徐秋萍董倩陈焕春曹胜波
- 关键词：日本脑炎病毒细胞系相互作用
- 抗小反刍兽疫病毒N蛋白单克隆抗体及其应用
- 本发明属于生物免疫分析技术领域，具体涉及抗小反刍兽疫病毒N蛋白单克隆抗体及其应用。公开了一种抗小反刍兽疫N蛋白的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC C2016135的杂交瘤细胞株所分泌的，本发明还公开了所述单克隆抗体的...
- 曹胜波郑云霞黄少梅刘学芹叶静魏燕鸣
- 文献传递
- 猪2型圆环病毒ORF1与ORF2基因和伪狂犬病毒基因的重组与表达的研究被引量：15
- 2005年
- 根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2 )序列(AY0 35 82 0 ) ,设计两对特异性引物,采用PCR方法,分别扩增了猪2型圆环病毒ORF1和ORF2基因。将ORF1和ORF2基因的PCR产物回收并酶切后,依次插入到伪狂犬病毒gE gI双缺失通用转移载体pIECMV中,构建了猪2型圆环病毒_伪狂犬病毒重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2与伪狂犬病毒TK- gE- LacZ+ 基因组共转染IBRS_2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行空斑纯化,利用检测PCV2ORF1基因和ORF2基因的PCR方法筛选重组病毒TK- gE- gI- ORF1-ORF2 + ,用Southernblotting鉴定重组病毒,并用Westernblotting检测ORF1_ORF2融合蛋白的表达情况,在此基础上也测定了重组病毒在不同细胞上的增殖滴度。结果表明,外源基因ORF1和ORF2已成功插入到TK- gE- LacZ+ 亲本株的基因组中,并获得了表达,表达的蛋白可与PCV2阳性血清发生反应。同时发现ORF1和ORF2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。
- 琚春梅陈焕春樊惠英刘正飞曹胜波
- 乙型脑炎病毒样颗粒疫苗的制备及其免疫保护效率的初步评价被引量：5
- 2016年
- 将乙型脑炎病毒prME及其信号肽基因片段克隆到穿梭载体AcBacmid中,构建重组穿梭载体AcBac-prME。Lipofectine介导其转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-prME。Western-blotting、间接免疫荧光试验及电镜观察,证实Ac-prME介导prME在Sf9细胞中高效表达,且形成了病毒样颗粒。小鼠免疫和攻毒试验表明,该病毒样颗粒免疫可以使小鼠获得有效抵抗乙型脑炎病毒强毒株攻击的能力,保护率高达100%,从而为研制基于乙型脑炎病毒样颗粒的亚单位疫苗奠定了基础。
- 张艳芳杜瑞坤黄少梅张涛刘金良朱碧波王华林邓菲曹胜波
- 关键词：乙型脑炎病毒杆状病毒病毒样颗粒亚单位疫苗
- 间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体被引量：39
- 2002年
- 用猪肾传代细胞 IBRS- 2增殖猪伪狂犬病病毒 (PRV)鄂 A株 ,病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇(Mr2 0 0 0 0 )浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清 Ig G免疫家兔 ,HRP标记提取的兔抗猪 Ig G,制备出高效价的酶标抗体 ,酶标抗体工作浓度为 1∶ 5 0 0 0 0 ;经各种条件的选择 ,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接 EL ISA。所建立的间接 EL ISA抗原包被浓度为 39.2 mg/ L ,血清最佳稀释度为 1∶ 2 0 ,与猪细小病毒、猪瘟、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应 ,与标准阴性血清和临床未感染 PRV的猪血清呈阴性反应 ;与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应 ;与美国进口的 PRV抗体检测 EL ISA诊断试剂盒检测结果比较 ,45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为 10 0 %。表明建立的间接 EL ISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点 ,可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。
- 邱德新陈焕春何启盖吴斌曹胜波
- 关键词：猪伪狂犬病间接ELISA抗体检测血清抗体
- 斑点叉尾鮰病毒多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 利用斑点叉尾鮰卵巢细胞增殖斑点叉尾鮰病毒,然后将经过超速离心纯化的病毒免疫4周龄BABL/C雌鼠。每2周免疫1次,第4次免疫2周后,经眼眶采血,分离血清,通过酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,并利用间接免疫荧光试验和与病毒孵育试验检测所制备多克隆抗体的生物活性。结果表明,制备的多克隆抗体ELISA效价为1∶25 600,间接免疫荧光试验证明该多克隆抗体特异性良好,同时与病毒的孵育试验证明该多克隆抗体具备中和活性,能够有效阻断斑点叉尾鮰病毒对细胞的感染。
- 吴兵罗宇良王敏曹胜波王卫民陈龙黄锋涛刘学芹
- 关键词：多克隆抗体效价生物活性
- 西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ基因的原核表达被引量：1
- 2012年
- 根据已发表的西尼罗河病毒(WNV)的DNA序列设计合成一对特异性引物,用聚合酶链式反应(PCR)扩增E蛋白结构域Ⅲ(E-DⅢ)的基因。将PCR产物克隆至pET28a原核表达载体上,获得重组表达质粒pET28a-E-DⅢ。将该质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导后提取包涵体,纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE和Western blot方法证实E-DⅢ的基因可以在大肠杆菌中高效表达。
- 魏艳鸣朱碧波曹胜波
- 关键词：西尼罗河病毒原核表达
- 实践“三个代表” 推进事业发展
- 2002年
- 江泽民同志“三个代表”重要思想产生于我国社会主义现代化建设的伟大实践,也是新时期进行社会主义现代化建设的行动指南。深入学习“三个代表”的重要思想,根本目的在于做“三个代表”思想的真正实践者。在高校内部各个学院事业建设中,应努力强化服务意识、改善服务质量,兼顾规模与质量、提高育人水平,加强学科建设、促进科技转化,在深化改革中实践“三个代表”的重要思想。
- 张金洲张韶东曹胜波
- 关键词：学科建设高校
- 1猪2型圆环病毒ORF2基因的克隆及其重组伪狂犬病毒中间转移质粒的构建
- 猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)是近年来兽医界广泛关注的新发现的病毒之一。该病毒基因组为环状单链DNA,大小约为1.7kb,病毒粒子无囊膜,呈二十面体对称,直径约为17nm。1995年,国际病毒...
- 琚春梅陈焕春郗鑫刘正飞曹胜波
- 文献传递
- 畜禽重大疫病防控的关键科学问题被引量：3
- 2023年
- 畜禽重大疫病不仅严重危害养殖业健康发展,而且还威胁着公共卫生安全与人民健康。基于第275期“双清论坛”,本文阐述了非洲猪瘟和新冠肺炎疫情下,我国畜禽重大疫病防控的重大需求及面临的挑战,回顾了近年来畜禽重大疫病研究领域的重要进展,凝炼了该领域未来需要解决的关键科学问题,探讨了本领域未来科学基金资助战略。
- 王臣曹胜波肖少波郝海红冯雪莲任红艳
- 关键词：兽医人兽共患病
