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徐广峰: 作品数：43 被引量：46H指数：4; 供职机构：中国人民解放军第八二医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金南京市科技发展计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>

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miR-26b过表达对不同时间点人脂肪细胞分泌脂因子的影响: 目的探讨miR-26b过表达对不同时间点脂肪细胞上清各种肥胖及炎症相关蛋白分泌的影响.方法 miR-26b过表达的病毒感染人脂肪前体细胞,并诱导分化、收集不同时间点的细胞培养基上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测...; 季晨博史春梅陈玲杨蕾庞玲霞徐广峰郭锡熔

microRNA的生物形成参与细胞生长/分化和肿瘤形成被引量：2: 2012年; microRNA(miRNA)作为一类非编码小分子调控RNAs,参与调节多种生理和病理过程。在动物细胞中,miRNA基因的转录初产物pri-miRNA被RNaseⅢ家族酶成员Drosa和DGCR8催化加工成为miRNA前体(pre-miRNA),然后由细胞核转运至细胞质中,经另一种核糖核酸酶ⅢDicer识别剪切为成熟miRNA。在pri-miRNA向成熟miRNA加工转化过程中发生的改变参与细胞生长、分化以及肿瘤形成。; 徐广峰付海龙赵亚萍; 关键词：细胞生长细胞分化肿瘤形成

miR-1268重组慢病毒质粒构建及其在人前体脂肪细胞中的表达验证被引量：1: 2018年; 目的构建miR-1268重组慢病毒质粒,观察其在人前体脂肪细胞HPA中的表达情况。方法从NCBI Gen Bank数据库查找miR-1268的DNA序列,用Primer 5.0软件设计PCR引物,以HPA细胞的DNA为模板进行PCR扩增;克隆慢病毒表达载体,进而包装成空载慢病毒和miR-1268过表达慢病毒;HPA细胞分别感染空载慢病毒和miR-1268过表达慢病毒,荧光定量PCR检测miR-1268表达水平。结果测序结果表明,miR-1268前体序列与Gen Bank上的序列完全相同。与空载慢病毒感染的HPA细胞比较,miR-1268过表达慢病毒感染的HPA细胞miR-1268上调2.5倍。结论成功构建miR-1268重组慢病毒质粒,感染的HPA细胞高表达miR-1268。; 周雨森徐广峰赵亚萍汪春晖; 关键词：慢病毒载体

miR-26b慢病毒载体构建及其在人前体脂肪细胞中的表达验证: 目的构建人miR-26b慢病毒载体,并感染人前体脂肪细胞,为后续功能研究奠定实验基础.方法以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR扩增包含miR-26b所在区域上下游100bp左右的基因组DNA,克隆慢病毒表达载体,以...; 徐广峰赵亚萍史春梅杨蕾宋桂仙陈玲庞玲霞郭锡熔

人miR-146b慢病毒载体构建及人脂肪细胞中表达验证: 2013年; 目的构建人miR-146b慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果。方法以人基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-146b区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36h开始观察荧光标记,72h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-146b的相应表达量。结果成功构建人miR-146b慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到85%以上,miR-146b过表达水平可接近4倍。结论本研究成功构建了人miR-146b慢病毒表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础。; 陈玲史春梅杨蕾朱璐徐广峰季晨博郭锡熔张春梅; 关键词：慢病毒

hsa-miR-26b表达沉默对不同时间点脂肪细胞蛋白分泌的影响: 目的:探讨hsa-miR-26b表达沉默对人脂肪前体细胞分化过程中不同时间点培养基上清中各种肥胖及炎症相关蛋白分泌的影响.方法:hsa-miR-26b表达沉默的病毒感染人脂肪前体细胞,在诱导分化过程中收集不同时间点的细胞...; 杨蕾徐广峰季晨博史春梅陈玲庞玲霞赵亚萍郭锡熔

miR-26b慢病毒载体构建及其在人前体脂肪细胞中的表达验证被引量：1: 2014年; 目的构建人miR-26b慢病毒表达载体,并检测其在人前体脂肪细胞中过表达效果。方法以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR扩增包含miR-26b所在区域上下游100bp左右的基因组DNA,克隆慢病毒表达载体,进一步包装成慢病毒并感染人脂肪细胞,荧光定量PCR检测miR-26b表达。结果成功构建miR-26b慢病毒载体,病毒感染效率为75%左右,miR-26b过表达效率达2倍以上。结论成功构建了miR-26b慢病毒表达载体,可用于研究miR-26b在人脂肪细胞中的分子机制。; 徐广峰赵亚萍史春梅陈玲杨蕾宋桂仙宋雷雷赵超季晨博郭锡熔; 关键词：慢病毒载体前体脂肪细胞

人miR-17-92 cluster慢病毒载体构建及其在人脂肪细胞的表达验证被引量：3: 2012年; 目的构建人miR-17-92cluster慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果。方法以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR扩增包含miR-17-92cluster所在区域上下游100bp左右的基因组DNA,克隆入慢病毒表达载体,与Pcgvp、Rev、Vsvg包装质粒共转染HEK-293T细胞包装病毒,收取病毒上清液感染人脂肪细胞。36h开始观察荧光标记,72h收取细胞,抽提RNA,RT-PCR检测miR-17-92cluster各miRNA及miR-103、let-7e的表达。结果成功构建人miR-17-92cluster慢病毒表达载体。包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到75%以上,miR-17-92cluster各miRNA的过表达效率均达到2倍以上,且没有干扰miRNA内源性成熟机制。结论成功构建了人miR-17-92cluster慢病毒表达载体。包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现了该cluster的过表达效果,为研究人miR-17-92cluster在人脂肪细胞中的功能提供参考。; 史春梅陈玲徐广峰倪毓辉陈小慧朱春傅君芬郭锡熔季晨博; 关键词：CLUSTER 慢病毒载体

The Expression Of Mir-26b,An Obesity-Related Microrna,Regulated By Free Fatty Acids,Glucose,Glucocorticoids And Growth Hormone In Human Adipocytes: MicroRNAs (miRNAs) are short non-coding RNAs that are involved in multiple biological processes including obes...; 徐广峰史春梅季晨博陈玲杨蕾赵亚萍郭锡熔