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链亲和素标记的GM-CSF治疗膀胱癌疗效的初步观察被引量：1: 2010年; 目的:将链亲和素标记的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(SA-GM CSF)原位锚定成瘤小鼠膀胱,探求该新疗法的可行性和有效性。方法:选择雌性C57BL/6小鼠50只,随机均分成5组,组1到组4建立原位表浅膀胱癌模型后,按照处理的不同又分为PBS组、GM CSF组、SA-GFP组和SA-GM-CSF组,分别给予相应治疗;6次治疗后,SA-GM-CSF组和组5(对照组)接受第二次肿瘤细胞攻击;观察所有小鼠的一般情况、肿瘤情况和生存期,并对死亡小鼠进行解剖,留取器官组织做病理切片或免疫组织化学染色。结果:SA-GM CSF组与其它各组比较,肿瘤出现的时间晚,肿瘤生长速度慢,小鼠生存期长(P_(max)=0.023,P<0.05);MB49细胞二次攻击后,SAGM-CSF组与对照组相比,生存期差异有显著统计学意义(x^2=9.551.P=0.002)。结论:SA GM-CSF原位锚定于雌性C57BL/6成瘤小鼠膀胱黏膜,有效抑制了膀胱肿瘤的生长,延长了小鼠的生存时间,并且能抵抗同源肿瘤的再次攻击,提示可能诱导了小鼠针对MB49的免疫保护作用;SA-GM-CSF原位锚定治疗比单纯细胞因子灌注法疗效更好。; 梁中锟张琳谭万龙高基民陈忠黄鑫; 关键词：膀胱肿瘤生物素链亲和素粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

SA-hIL2双功能融合蛋白的研制及其生物学鉴定被引量：2: 2009年; 目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素-2(SA-hIL2)融合蛋白,并研究其生物学功能。方法:构建SA-L-IL2-pET24重组表达质粒,在大肠杆菌中表达SA-hIL2融合蛋白,对表达的SA-hIL2融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,透析复性。CCK-8法检测SA-hIL2融合蛋白对PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增值活性,流式细胞仪分析SA-hIL2融合蛋白对生物素化的B16.F10肿瘤细胞表面锚定修饰效率。结果:SA-hIL2在大肠杆菌中实现了高效表达,约占菌体总蛋白的20%,制备的SA-hIL2融合蛋白纯度达到95%,并具有双重活性,即hIL-2促进PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增值活性和SA介导的高效结合至已生物素化的B16.F10肿瘤细胞表面的功能(表面锚定修饰效率约95%)。结论:研制的SA-hIL2融合蛋白具有双重活性,可为研制表面修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供基础。; 张琳胡志明法萍萍梁中锟高基民; 关键词：白细胞介素2 链亲和素融合蛋白

新方法简便高效建立小鼠原位膀胱癌模型被引量：10: 2009年; 目的用物理化学的方法建立小鼠原位表浅膀胱癌模型,并对影响成瘤率的因素进行探讨,筛选出高效简便建立小鼠原位表浅膀胱癌模型的方法。方法用改造过的静脉留置针经小鼠尿道插入膀胱腔内,实验组用酸碱腐蚀的方法对小鼠膀胱粘膜进行预处理,按观察目的的不同分为4组;对照组不作预处理。PBS冲洗后将MB49灌注入膀胱,构建小鼠原位表浅膀胱癌模型。所有小鼠观察一般情况和肿瘤生长情况。按计划处死小鼠并解剖观察膀胱肿瘤生长情况及有无转移,取标本做病理切片。结果病理显示膀胱粘膜已预处理的小鼠接种肿瘤细胞后可在膀胱部位成瘤(成瘤率100%);丝裂霉素能显著减缓膀胱肿瘤的生长(P=0.000,P<0.05);对照组接种肿瘤细胞后未见成瘤。结论膀胱粘膜处理的时间以酸20s,碱5s较合适;简便的物理化学方法成功建立了可靠性、稳定性和重复性均好的小鼠原位表浅膀胱癌模型,为表浅膀胱癌术后复发的防治研究尤其是抗癌药物的筛选和免疫治疗研究提供了理想的动物实验模型。; 梁中锟张琳胡志明陈忠黄鑫石向华谭万龙高基民; 关键词：膀胱肿瘤 C57BL/6小鼠丝裂霉素

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子修饰MB49制备膀胱肿瘤疫苗及应用: 2011年; 目的链亲和素标记的细胞因子锚定MIM9细胞和成瘤小鼠膀胱，探讨锚定率、锚定量与时间的关系。方法MB49细胞与链亲和素标记的绿色荧光蛋白（SA—GFP）体外锚定后，在荧光显微镜下观察；建立小鼠原位表浅膀胱癌模型后，实验组膀胱灌注锚定链亲和素标记的粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（SA—GM—CSF）；对照组小鼠不锚定直接膀胱灌注SA—GM—CSF。取膀胱作冰冻切片免疫组织化学分析。结果MB49细胞基本被SA—GFP锚定，锚定率为98．78％；冰冻切片免疫组织化学显示实验组膀胱黏膜有阳性显色，以第1天最浓，以后逐日变淡，至第7天仍可见较明显染色；对照组膀胱黏膜无阳性显色。结论链亲和素标记的细胞因子可以锚定在细胞表面，且锚定效率高、保留时间长。; 梁中锟张琳谭万龙高基民陈忠黄鑫; 关键词：膀胱肿瘤疫苗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

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张琳