张洪杰
- 作品数：18 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 铜在铜蛋白azurin分子构象及其促口腔肿瘤细胞凋亡中的作用
- 2007年
- 为了解铜对铜蓝蛋白azurin的构象和细胞毒性的影响，用重组表达的azurin作为研究材料，对结合铜的holo—azurin和除去铜的ado—azurin采用紫外、荧光和圆二色光谱进行了对比研究，其特征性变化为：去除铜离子后，该蛋白的紫外吸收光谱在628nm的吸收峰消失，圆二色光谱出现轻微改变。采用两株p53呈阳性表达的中国人口腔癌细胞株Acc2和Acc3为研究对象，经四唑盐（MTT）比色法和流式细胞仪分析发现，azurin具有抑制上述肿瘤细胞株的生长，并促进肿瘤细胞凋亡的作用，而脱铜后的apo—azurin抗肿瘤活性降低。
- 王云虹柏小丽钟金王正平张洪杰高锦
- 关键词：铜AZURIN圆二色光谱细胞凋亡
- 放射自显影技术应用的现状及未来趋势
- 2023年
- 放射自显影通常指结合了放射标记探针的分子或组织通过感光材料(如X光胶片)曝光、显影、定影获得金属银颗粒图像的实验技术,它是定性、定量分析与探针结合的靶分子含量及其在组织中分布的传统手段,在生物学基础研究以及临床前新药研究等方面有着广泛的应用。近年来磷屏成像技术的普及显著缩短了放射自显影技术的实验周期,并拓展了在短半衰期正电子放射核素中的应用。本文重点介绍放射自显影技术应用中尚不能全面被非放射性替代技术取代的一些实验工作进展,主要包括某些酶活性的测定、磷酸化位点分析、低丰度核酸检测以及与放射性探针特异结合的靶点(如受体等)在组织中的分布等实验技术工作。适应当前应用趋势的变化对放射示踪共用技术平台的建设,对帮助技术支撑人员提供更好的、具有针对性的技术性服务具有一定的指导意义。
- 张洪杰
- 关键词：放射自显影受体分布功能分析
- 去辅基天青蛋白两种天然构象共存的热力学证据——差热温度扫描和圆二色的研究(英文)被引量：3
- 2005年
- 天然态蛋白质能否在溶液中存在多种构象是一个有争议的问题. 在前报道中已经鉴定出绿脓杆菌去辅基天青蛋白突变体M121L可以多种构象共存. 用差热扫描量热和圆二色性的方法研究了野生型去辅基天青蛋白的热变性. 结果表明在pH从4.0到9.0的范围内存在着两个摩尔热容最大值. 较低温度下的去折叠反应在所研究pH范围内均部分可逆,而较高温度下的去折叠反应均不可逆. 蛋白质去折叠的热容变化双峰用可相互转化的两种构象共存模型进行拟合. 较低温度下能够去折叠的构象在pH 4.0时占64%,在pH 9.0时占55%. 监测热变性过程中圆二色谱在219 nm处的信号变化也可以观测到两个独立的去折叠变化. 信号变化的比值与在相同条件下差热扫描法测得的两种构象摩尔比一致. 上述结果进一步支持了前文提出的去辅基天青蛋白在溶液中至少存在着两种构象的设想.
- 张洪杰
- 关键词：热变性圆二色性蛋白质构象
- 腺苷酸激酶基因在大肠杆菌中的可溶性高表达被引量：7
- 1997年
- 报道了鸡肌腺苷酸激酶基因的克隆和在温控启动子PRPL 调控下在大肠杆菌中的可溶性高效表达 .SDS PAGE分析表明 ,鸡肌腺苷酸激酶的含量可占大肠杆菌细胞总蛋白含量的 38% .利用John son等的干冰 /乙醇 冰水浴反复冻融法 ,可将此重组蛋白进行富集 ,纯度可达 85%以上 .
- 静恩周波罗杰张洪杰
- 关键词：腺苷酸激酶大肠杆菌基因表达
- 细胞穿透肽及其结构改造在siRNA传递中的应用被引量：3
- 2012年
- 小RNA药物应用于临床的主要技术瓶颈在于如何高效、低毒地将小RNA分子传递到它发挥功能的场所.基于细胞穿透肽在小RNA透皮给药的临床应用中所取得的进展,本文系统评述了近年来细胞穿透肽在小RNA的体内、体外传递方面的研究动态,分析了细胞穿透肽的结构改造对肽/小RNA复合物转染进入细胞发挥功能的影响,展望了细胞穿透肽作为小RNA的体内药物传递载体的发展方向.
- 张洪杰殷勤伟
- 关键词：细胞穿透肽小RNA结构修饰
- 基于RNAi技术产品的商业化被引量：2
- 2011年
- 发现于20世纪末的小RNA干扰技术，经历了10余年的快速发展，不仅深刻改变了基因调控相关的生物学、基础医学的研究，同时也为现代制药业的变革提供了雄厚的技术基础。RNAi技术被美国《科学》杂志评为2001、2002、2003和2006年的年度突破进展。2006年该技术的发明者Andrew Fire和Craig C．Mello被授予诺贝尔医学／生理学奖。
- 张洪杰殷勤伟
- 关键词：RNAI技术RNA干扰技术ANDREW基因调控
- 一类能将间充质干细胞分化为造血细胞的小RNA分子及其作用靶点
- 本发明提供了一种能够将人的非造血干细胞，如间充质干细胞(MSC)，分化为造血干细胞(HSC)的一种小RNA(shR337)以及其衍生物，该小RNA的发现还提供了能够将非造血干细胞，如骨髓间充质干细胞，分化成造血细胞的作用...
- 殷勤伟赵春华谷同军边春景张洪杰
- 文献传递
- 新载体pET-DB对带有His-tag的仓鼠二氢叶酸还原酶的高效表达与纯化被引量：1
- 2004年
- 报道了带有His tag的仓鼠二氢叶酸还原酶基因的克隆和在DB序列增强下T7启动子调控该基因在大肠杆菌中的可溶性高效表达 ,SDS PAGE分析表明 ,带有His tag的仓鼠二氢叶酸还原酶的含量可占大肠杆菌细胞总蛋白质含量的 4 6 % .该酶的纯化可用常规的金属络合树脂一步纯化至SDS PAGE一条带 ,经凝血酶切去His tag的仓鼠二氢叶酸还原酶与用等电聚焦法获得的无His tag的酶有相同的酶活性 .
- 朱志勇谭波张文河张洪杰
- 关键词：蛋白质表达二氢叶酸还原酶
- 临近闪烁分析技术在生命科学研究中的新进展被引量：2
- 2016年
- 起源于放射免疫分析的临近闪烁分析法(scintillation proximity assay,SPA)是一种均相、灵敏、快速和简便的基于闪烁载体的分析平台.放射性标记分子和亲和标签分子的多样化和商业化,以及液闪计数器和液相操作等技术的发展,使得SPA操作具有无需分离、被测目标分子易于固定和检测的优势.SPA已成为高通量检测的重要方法,广范应用于筛选药物靶点及先导化合物筛选、药物作用机理研究,以及病毒、肿瘤标志物等抗原的高通量检测.本文在简要介绍SPA技术的原理及系统分析SPA操作中环境、条件对测试结果影响的基础上,比较全面地介绍了SPA技术在生物学研究中的应用,尤其是在膜蛋白和细胞水平上的应用进展,介绍了应用实例,归纳了国内研究人员开展相关技术应用与技术创新的制约因素,给出了未来的发展趋势.基于SPA的生物学应用技术创新必然提升我们对细胞体系生物学的全面理解.
- 张洪杰
- 关键词：猝灭效应膜蛋白
- 非贴壁微球体培养法分离T-淋巴细胞瘤干细胞及鉴定被引量：2
- 2014年
- 通过非贴壁微球体无血清培养法,体外构建并鉴定了T-淋巴细胞瘤干细胞。采用细胞球悬浮培养方法富集T-淋巴细胞肿瘤干细胞,利用抑制分化作用的抑制剂CHIR99021和PD173074(2i)进行肿瘤干细胞的筛选,采用RT-PCR法检测Sox2、Oct4、Nanog、Klf4、Bmi1、C-Myc干细胞特征基因的表达,进一步采用Western blot验证Oct4蛋白水平表达,流式细胞术分析CD34、CD44抗体表达情况,用PI检测细胞周期,用CFSE观察细胞增殖能力,并将富集的T-淋巴细胞肿瘤干细胞进行裸鼠异体移植实验。在细胞球悬浮培养法基础上,利用具有抑制分化作用的抑制剂CHIR99021和PD173074,成功富集出Hut-102干细胞球。经RT-PCR鉴定,Hut-102干细胞球的其干细胞特征基因Sox2、Oct4、Nanog、Klf4、Bmi1、C-Myc表达均显著性高于Hut-102细胞并且高表达Oct4蛋白;经流式细胞术分析CD34、CD44抗体表达,有74.20%的Hut-102干细胞球表现为CD34+,有90.82%的Hut-102干细胞球表现为CD44+,证明抑制分化药物应用于细胞球悬浮培养方法中,能够有效富集出具有CD34+CD44+表型特征的Hut-102干细胞球;用PI检测细胞周期,富集的Hut-102干细胞球中处于G1/G0期的细胞为64%,处于S期的细胞为30.56%,表明该细胞暂不增殖或处于休止状态;用CFSE检测到富集的Hut-102干细胞球分化增殖能力显著高于Hut-102细胞。在NON/SCID裸鼠中,分别移植Hut-102细胞球和Hut-102细胞,结果显示,前者检测到67.74%±5.32%的淋巴细胞表达Hut-102细胞特异性标记物(CD3),而后者的裸鼠中未检测到,说明Hut102细胞球在NON/SCID裸鼠体内表现了T-淋巴细胞肿瘤干细胞特点和移植能力。首次在传统的非黏连微球体无血清培养法中加入两种抑制剂(CHIR99021和PD173074),富集出大量的微球体,通过干细胞特征鉴定及裸鼠移植实验,证明Hut-102细胞球具有T-淋巴细胞肿瘤干细胞特性。
- 王珊珊殷勤伟张洪杰谭琰华茜
- 关键词：CD34CD44裸鼠移植
