利用CRISPR/Cas9技术建立敲除RNA结合蛋白(RALY)基因的PK-15细胞系PK-15-RALY^(-/-),并初步探究RALY对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响。根据GenBank中猪的RALY基因的外显子,设计合成sgRNA并克隆至PX459载体;将质粒转染PK-15细胞,并采用有限稀释法筛选单克隆细胞株,经Western-blot及测序检测RALY基因的敲除效果。通过RT-qPCR检测FMDV感染PK-15-RALY^(-/-)和PK-15细胞后FMDV m RNA的转录水平,Western-blot检测FMDV-VP0、FMDV-VP3和FMDV-VP1的表达水平,最后检测子代病毒感染力。测序结果证实RALY基因发生了移码突变,且Western-blot无法检测到PK-15-RALY^(-/-)细胞中RALY蛋白的表达。FMDV感染两种细胞后,RT-PCR结果显示,FMDV在PK-15细胞中的m RNA水平显著低于PK-15-RALY^(-/-)细胞,Western-blot结果显示,VP0、VP3和VP1蛋白在PK-15-RALY^(-/-)细胞中的表达显著高于PK-15细胞,病毒感染力测定结果显示,PK-15-RALY^(-/-)细胞中子代病毒滴度显著高于PK-15细胞。上述结果表明,本研究成功构建了RALY基因敲除的PK-15细胞系,首次表明RALY可以抑制FMDV复制,为进一步开展RALY在细胞内调控病毒复制机制研究奠定了基础。
生物素—亲和素系统(Biotin—Avidin System BAS)是近年来建立的一种新型生物放大系统,它具有高灵敏度,高特异性和高度的稳定性。适用于微量抗体和抗原的检测。本文采用生物素—亲和素与酶联免疫吸附试验相结合的免疫放大作用,将ABC—ELISA技术引入猪旋毛虫病检测,对57头实验感染旋毛虫病猪血清特异抗体及抗体出现的时间进行了检测,其结果如下。
本文报道从我国河南省卢氏县混合感染有瑟氏泰勒虫的犊牛体,利用虫种间潜伏期的差异性,分离到一种形态较大的巴贝斯虫。将清洁长角血蜱成虫释放到感染该种的牛体上,雌虫饱血产卵后,用次代幼虫和若虫叮咬健康牛。结果证实,该种可由长角血蜱经卵传递,次代幼虫和若虫均能传播病原,潜伏期皆为8天。虫体形态呈卵形、圆形、出芽形、阿米巴形、单梨子形及双梨子形等,内含1—2个染色质团,核外逸现象较常见,中央往往形成空泡。虫体大小为2.3—3.9×1.1—2.1μm,平均为3.57—1.71μm。根据媒介(?),虫体形态和大小、病原性及感染动物的临床症状和病理变化,该种被鉴定为卵形巴贝斯虫(Babesia ovata Minami and Ishihara,1980)。
