张晓东
- 作品数：28 被引量：110H指数：7
- 供职机构：玉溪师范学院资源环境学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划云南省教育厅科学研究基金重点项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生文化科学更多>>
- 滇龙胆甲羟戊酸二磷酸脱羧酶基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2015年
- 为获得滇龙胆GrMDC基因序列,以滇龙胆转录组为基础,采用RT-PCR技术从滇龙胆幼叶克隆GrMDC基因,并进行原核表达和组织特异性表达分析。结果表明:滇龙胆GrMDC基因(登录号KJ917169)全长1 275bp,GrMDC蛋白相对分子量为46.77kD,pI为5.97;该蛋白可能定位于细胞质,无信号肽,为亲水不稳定蛋白,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成;GrMDC蛋白与长春花CrMDC蛋白相似性较高(88.12%),且亲缘关系最近;GrMDC基因在大肠杆菌中表达的重组蛋白相对分子质量约为72.77kD(含GST标签26kD),与预期蛋白大小一致;GrMDC基因主要在根中表达。
- 张晓东李彩霞王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达组织特异性表达
- 三种滇龙胆叶片总RNA提取方法的比较被引量：1
- 2015年
- 分别使用传统异硫氰酸胍法和Takara公司的两种试剂盒来提取滇龙胆幼叶的总RNA,比较所提取RNA质量和纯度.结果表明,三种方法各有优缺点,但MiniBEST Plant RNA Extraction Kit试剂盒提取的RNA质量好、纯度高、提取效率高,且无基因组污染,优于其他两种方法,而异硫氰酸胍法从经济的角度考虑则最为实惠.
- 张海晨张晓东
- 关键词：总RNA异硫氰酸胍法
- 滇龙胆GrDXR基因特异性片段的克隆
- 2018年
- GrDXR基因功能分析是揭示滇龙胆中MEP途径的基础,试验提取滇龙胆总RNA,通过RT-PCR技术进行进行扩增,所获得片段连接T载体后,进行测序,并进行序列分析。结果获得了279 bp的基因片段,将测序结果与原基因序列进行比对,确认序列为GrDXR基因特异片段,为阐明其基因功能奠定基础。
- 桂子昌李猛张晓东
- 关键词：基因克隆
- 基于应用型人才培养目标的微生物学实验教学改革和实践被引量：1
- 2017年
- 基于应用型人才培养目标,通过创建新的实验课程体系,优化整合教学内容,学生参与实验准备及实验教学活动,改革考核评价机制等方面对微生物学实验教学进行了改革探索和实践。结果表明,学生上课的积极性明显提高,学生独立获取知识、独立思考能力得到提升。
- 陈艳刘家忠李淑英赵静张晓东李红梅
- 关键词：微生物学实验教学改革
- 滇龙胆GrCYP450-17基因的克隆、序列分析与原核表达被引量：2
- 2014年
- 目的从滇龙胆幼叶中克隆萜类合成相关酶基因GrCYP450-17,进行序列分析和原核表达。方法根据滇龙胆转录组中GrCYP450-17基因序列,设计引物,通过RT-PCR扩增得到GrCYP450-17开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrCYP450-17,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下进行表达。结果 GrCYP450-17 ORF全长1 545 bp,编码514个氨基酸。序列分析表明,GrCYP450-17基因是CYP714家族成员;蛋白质序列系统发育分析表明,GrCYP450-17与番茄SlCYP450亲缘关系最近。构建pGEX-4T-1-GrCYP450-17重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrCYP450-17基因,建立其稳定的原核表达体系,为进一步纯化GrCYP450-17蛋白、研究其结构和功能奠定基础。
- 张晓东李彩霞李泽君李涛王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达
- 滇龙胆GrGPPS基因的克隆及其序列分析与原核表达被引量：11
- 2014年
- 目的从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆单萜化合物合成的关键酶牻牛儿基焦磷酸合成酶基因GrGPPS,进行序列特征分析和原核表达。方法根据三年生滇龙胆转录组GrGPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到GrGPPS cDNA序列,并进行TA克隆、测序及序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrGPPS,转入Escherichia coli Rosetta(DE3)中,在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下进行表达。结果 GrGPPS cDNA全长1 107 bp,编码369个氨基酸;序列分析表明,GrGPPS基因是异戊烯基合成酶家族的成员;氨基酸序列系统发育分析表明,GrGPPS与金鱼草AmGPPS亲缘关系最近;构建pGEX-4T-1-GrGPPS重组质粒,获得稳定的pGEX-4T-1-GrGPPS原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrGPPS基因,建立pGEX-4T-1-GrGPPS稳定的原核表达体系,为进一步纯化和鉴定GPPS蛋白并研究其结构和功能奠定基础。
- 王彩云李富生李涛李彩霞张晓东王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达
- 滇龙胆GrCMS基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2016年
- 2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶是赤藓糖磷酸酯(MEP)途径中的第三个催化酶。以滇龙胆转录组为基础,采用RT-PCR技术从滇龙胆幼叶克隆2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶基因GrCMS,并进行原核表达和组织特异性表达分析。序列分析显示,GrCMS基因(登录号KJ917164)开放阅读框(ORF)长933 bp,编码310氨基酸,推测分子量为34.23 kD,等电点为7.68。蛋白质序列分析显示,GrCMS无信号肽,为亲水稳定蛋白,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,可能定位叶绿体;具有CMS保守结构域。进化分析结果表明,GrCMS蛋白与长春花CrCMS蛋白亲缘关系最近。原核表达结果表明,GrCMS与预期蛋白大小一致。定量PCR结果表明,GrCMS基因主要在叶中表达。结果为进一步研究该基因功能和龙胆苦苷生物合成途径奠定基础。
- 张晓东李彩霞王元忠
- 关键词：基因克隆
- WRKY在植物次生代谢物合成中的作用及研究进展被引量：6
- 2013年
- WRKY蛋白是被广泛研究的一类DNA特异结合转录因子,其通过结合植物次生代谢生物合成途径关键酶基因的启动子元件来调节代谢过程。次生代谢物种类繁多,结构多样,在植物中广泛存在,在自然界中起重要作用,具有较高的应用价值。综述了WRKY转录因子的起源、进化、结构,及其对萜类、黄酮类、生物碱等次生代谢物生物合成的调控,为植物次生代谢物的进一步开发利用提供参考,同时也为植物次生代谢途径的研究提供依据。
- 王彩云张晓东沈涛李涛王元忠李富生
- 关键词：WRKY次生代谢生物合成萜类生物碱
- 基于RNA-Seq的滇龙胆龙胆苦苷生物合成途径及其调控机理研究
- 张晓东王元忠章新李泽君王连春赵静沈涛金航
- 滇龙胆1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因GrDXR的克隆、序列分析与原核表达被引量：4
- 2014年
- 目的从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆萜类合成关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因GrDXR,进行序列分析和原核表达。方法根据滇龙胆转录组中GrDXR基因序列,设计引物,通过RT-PCR扩增得到GrDXR开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrDXR,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达。结果 GrDXR ORF全长1 425 bp,编码474个氨基酸。序列分析表明,GrDXR基因是DXR家族成员;蛋白质序列系统发育分析表明,GrDXR与萝芙木RvDXR、橡胶树HbDXR和长春花CrDXR亲缘关系较近。构建pGEX-4T-1-GrDXR重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrDXR基因,建立其稳定的原核表达体系,为进一步纯化GrDXR蛋白,研究其结构和功能奠定基础。
- 张晓东赵静李彩霞李涛王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达
