张振亚
- 作品数：7 被引量：75H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院毒物药物研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 一种改进的抗呼吸道合胞病毒药物筛选方法被引量：1
- 2005年
- 目的:在细胞病变抑制实验的基础上,对观察指标和结果评价的方法进行改进,建立一种快速、可靠的筛选抗呼吸道合胞病毒药物的方法.方法:通过观察计数接种病毒后出现的病变数目,确定改进实验中最佳的细胞接种密度和结果判定时间,并推算药物的半数有效浓度EC50.比较空斑减数实验和改进方法测定利巴韦林(病毒唑)的EC50的差异.结果:改进方法和空斑减数实验测得的利巴韦林的EC50平均值没有显著性差异(P＞0.05).最佳实验条件是:每孔接种Hep-2细胞(1.5～2.0)×104个为宜,24～36 h接种病毒,第4～5天可判读最后结果.结论:该方法具有准确可靠、简单和快速的特点,可以应用于抗呼吸道合胞病毒药物的筛选.
- 方学平张振亚曾瑞红刁志花梅兴国
- 关键词：呼吸道合胞病毒抗病毒药药物筛选
- 野菊花提取物抑制呼吸道合胞病毒作用的体外实验研究被引量：40
- 2006年
- 目的评价野菊花提取物体外抑制呼吸道合胞病毒的效果方法采用MTT和空斑减数实验法,以病毒唑为阳性对照,测定野菊花提取物对呼吸道合胞病毒的抑制作用,并就野菊花提取物对呼吸道合胞病毒抑制的作用机制进行了初步研究结果药物的半数有效剂量(EC50)为(60.9±2.41)μg·ml-1,MTT法测定其半数中毒浓度(CC50)为(2.03±0.08)mg·ml-1,选择指数(SI)>33,有意义,在不同时间给药,对病毒的抑制实验中发现呼吸道合胞病毒感染HEp-2细胞后2、4、6、8h给野菊花提取物均有抑制作用(P<0.01),穿入和吸附抑制实验表明其对病毒穿入过程和吸附过程同样均有明显的抑制作用(P<0.01)。
- 张振亚方学平刁志花曾瑞红梅兴国
- 关键词：野菊花呼吸道合胞病毒抗病毒作用
- 干扰素α-2b缓释微球的制备及影响因素考察被引量：1
- 2007年
- 目的:制备以明胶粉形式固化的干扰素α-2b(IFNα-2b)聚乙二醇/聚对苯二甲酸丁二醇酯共聚物(PEG/PBT)-乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓释微球,并考察微球制备方法,基质材料,IFNα-2b存在形式[包括液态含人血清白蛋白(HSA),固态含HSA及液态不含HSA]及胶粉粒径对微球性质的影响。方法:将IFNα-2b溶于明胶溶液后,冷冻干燥,研磨制备胶粉,然后用S/O/O法、W/O/W法或S/O/W法制备微球;以粒径、包封率及释放为指标,考察微球的制备方法、基质材料、IFNα-2b形式及胶粉粒径对微球性质的影响;采用ELISA法测定IFNα-2b。结果:以液态不含HSA形式的IFNα-2b为原料药,胶粉粒径为14.5μm,以PEG/PBT及PLGA(9∶1)为混合基质材料,S/O/W法制备的微球最为理想,该微球突释约为20%,体外可持续释放19 d以上,累积释放量可达80%以上。结论:微球制备方法、基质材料、IFNα-2b形式及胶粉粒径对微球性质影响很大;将IFNα-2b以胶粉形式固化后制备微球可增加其稳定性,利于其连续释放。本研究为蛋白多肽类药物微球的制备提供了新思路。
- 李志平李云富张振亚刘燕曲燕燕梅兴国
- 关键词：干扰素Α-2B微球缓释明胶
- 呼吸道合胞病毒重组蛋白候选疫苗的质粒构建、表达及免疫原性和保护性研究被引量：4
- 2005年
- PCR扩增呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)M2蛋白的CD8+T细胞表位F/M2:81-95和RSV-G蛋白的B细胞表位片段G:125～225(简称G1),以一个Linker连接,插入质粒pET-DsbA中构建原核表达重组质粒,转染E.coli BL21(DE3)后成功表达了融合蛋白DsbA-G1-Linker-F-M2:81-95(简称D-G1LF/M2),Western-blot结果表明该融合蛋白是RSV特异性的,采用Ni+螯合亲和层析法纯化变性的包涵体溶液,经梯度透析法复性,用该蛋白免疫BALB/c小鼠,结果表明被免疫小鼠肺部及血清中产生了高滴度的抗D-G1LF/M2及抗RSV IgG抗体和中和抗体,同时还诱导产生了RSV特异性的CTL应答;IgG的亚型IgG1/IgG2a的比值为2.66;用RSV攻击免疫后的小鼠,病毒滴定法检测肺部RSV滴度,结果表明D-G1LF/M2对小鼠肺部具有保护作用.
- 曾瑞红龚伟方学平张振亚梅兴国
- 关键词：中和抗体CTL
- 呼吸道合胞病毒M2：81-95与热休克蛋白70L1融合蛋白的制备及其免疫原性被引量：1
- 2009年
- 目的构建呼吸道合胞病毒（RSV）CTL表位M2：81-95与热休克蛋白（HSP）70L1融合蛋白的重组质粒，原核表达后初步研究其免疫原性。方法从SMMC7721细胞中克隆HSP70L1基因，PCR扩增M2：81-95基因片段，鉴定后构建质粒pET-HSP70L1-M2：81-95（pET-HSP70L1-M2），经PCR和酶切鉴定，转化E．coli BL21（DE3），用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达HSP70L1-M2：81-95（HSP70L1-M2），Ni^＋螯合亲合层析纯化，梯度透析复性。用该蛋白免疫10只BALB／c小鼠，ELISA检测IgG抗体及其亚型，噻唑蓝（MTT）法检测CTL杀伤活性。结果成功构建重组质粒pET-HSP70L1-M2，并在E．coli中表达重组蛋白HSP70L1-M2，该蛋白诱导RSV及表位特异性的CTL活性，还诱导蛋白抗原特异性的IgG，为4．87±0．35、IgG1为5．53±0．28、IgG2a为4．40±0．21，且IgG1／IgG2a（1．26）的比例平衡，与PBS对照组的IgG，为0．33±0．17、IgG1为0．51±0．21、IgG2a为0比较，差异有统计学意义（t=3．512，3．681，5．856；P＜0．05）。结论成功构建原核表达质粒pET-HSP70L1-M2，并表达纯化获得重组蛋白，免疫小鼠后诱导RSV及表位特异性的CTL活性和辅助性T淋巴细胞（Th）1／Th2混合型应答。
- 曾瑞红梅兴国亓晓温张振亚魏林
- 关键词：呼吸道合胞病毒T淋巴细胞T淋巴细胞热休克蛋白质类重组融合蛋白质类
- 现代荧光免疫分析技术应用及其新发展被引量：27
- 2006年
- 免疫分析作为一类特殊的试剂分析技术,已经被广泛应用于多个不同领域。作为免疫分析方法家族中的一员,现代荧光免疫分析技术在相关领域里也扮演了重要角色。现代荧光免疫分析技术主要包括荧光偏振免疫分析(FPIA)和时间分辩荧光免疫分析(TRFIA)两种技术。本文从原理角度出发,综述了FPIA和TRFIA近年来在分析领域中的应用,并且阐述了二者的一些最新发展动态。
- 张振亚梅兴国
- 关键词：荧光免疫分析荧光偏振分析技术
- 紫杉醇衍生物对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 目的:通过体外实验评价紫杉醇衍生物GT对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用。方法:应用MTT法测定GT对Hep-2细胞的增殖抑制作用;通过细胞形态学及流式细胞术考察GT对Hep-2细胞诱导凋亡的作用。结果:MTT实验显示GT对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用;当GT作用细胞后,在光镜下能观察到较为典型的细胞凋亡的形态学变化,如细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧贴于核膜周边,核碎裂、染色质断片化、凋亡小体形成等。流式细胞仪分析结果可见G2/M期的细胞比例明显增加,并出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。结论:GT对Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用,其效果与紫杉醇基本相同,可使细胞分裂阻滞于G2/M期,并诱导肿瘤细胞凋亡,有进一步研究开发的价值。
- 刁志花龚伟尤勇曾瑞红张振亚郝丽梅梅兴国
- 关键词：紫杉醇增殖抑制细胞凋亡
