张常印 作品数:111 被引量:321 H指数:10 供职机构: 江苏出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 江苏检验检疫局科研项目 国家质检总局科技计划项目 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 轻工技术与工程 生物学 更多>>
马流感病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:2 2009年 根据GenBank上马流感病毒H3N8 HA和NA的基因序列,设计并合成了扩增HA和NA基因RT-PCR引物及NA基因荧光定量RT-PCR引物探针,经条件优化,建立的HA和NA RT-PCR方法检测下限为10 TCID50;荧光PCR方法检测下限为0.1 TCID50。对H5、H7、H9、H3N1、H3N2、Pi等6种病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性,显示建立的方法具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于马流感病毒的检测和监控。 贾晓庆 唐泰山 黄金华 张常印 剧世强 雷治海关键词:马流感病毒 PCR 特异性 敏感性 空肠弯曲菌免疫磁珠富集方法的建立 被引量:3 2014年 为建立空肠弯曲菌富集方法,研究利用空肠弯曲菌特异性多表位人工多肽的特异性抗体包被磁珠,制成免疫磁珠富集空肠弯曲菌。在不同稀释梯度的菌液中加入免疫磁珠,富集目标菌,铺于CFA显色平板培养,统计菌落个数,确定免疫磁珠的敏感性;在非空肠弯曲菌和弯曲菌中分别添加空肠弯曲菌,用免疫磁珠富集,确定免疫磁珠的特异性。结果表明2 mg免疫磁珠可以在1 mL空肠弯曲菌菌液(浓度为2.5×103/mL)中稳定富集到空肠弯曲菌,统计菌落数为100~300 CFU,具有较好的敏感性;在干扰菌中富集空肠弯曲菌,铺板培养后,荧光PCR鉴定为阳性,富集不受干扰菌影响。用建立的免疫磁珠富集方法富集采集样品中的空肠弯曲菌,结果显示该方法有较好的特异性,具有较好的应用前景。 王壮 欧瑜 唐泰山 祝长青 栾军 蒋原 张常印关键词:空肠弯曲菌 特异性抗体 免疫磁珠 口蹄疫病毒实时RT-PCR检测方法的建立 被引量:16 2006年 目的用TaqMan技术建立了一种实时RT-PCR的方法,用于检测口蹄疫病毒,并优选出最佳检测样品。方法设计合成一套引物和TaqMan探针,通过反应条件的优化,建立实时RT-PCR的方法,以扩增口蹄疫病毒的3D基因,并用该法检测患病仔猪的气管、前肢肌肉、皮肤、舌、颈浅淋巴结、脾脏、喉头、食管、腹股沟淋巴结、肺脏、扁桃体、肝脏、肾脏、胸肌、心脏、鼻黏膜、后肢肌肉、脑、骨髓、软腭和血清等样品。结果(1)该方法检测FMDV下限为0.01TCID50,其敏感性比普通RT-PCR高100倍,并具有较好的特异性和重复性,(2)FMDV感染仔猪血清、淋巴结、扁桃体和肝脏中病毒含量较高是检测口蹄疫病毒很好的样品。结论建立了一种实时RT-PCR检测口蹄疫病毒的方法。 李永东 张常印 姜平 唐泰山 杨晓伟 杜以军关键词:口蹄疫病毒 TAQMAN 实时RT-PCR II型猪圆环病毒PCR检测方法的建立及试剂盒的研制 2005年 根据Genbank上已发表的II型猪圆环病毒(PCV-2)的基因序列,设计并合成一对能特异性扩增II型猪圆环病毒的引物,通过对PCR方法的优化,建立了PCR方法检测PCV-2并研制出试剂盒。然后对试剂盒的敏感性、特异性和有效期进行了研究。结果表明,该试剂盒具有很好的特异性和敏感性,有效期在-20℃至少可以保存一年。 姜焱 王凯民 张常印关键词:PCV-2 PCR 特异性 敏感性 空肠弯曲菌特异性多表位人工多肽的特异性抗体及其包被的免疫磁珠和应用 本发明公开了空肠弯曲菌特异性多表位人工多肽的特异性抗体及其包被的免疫磁珠和应用。空肠弯曲菌特异性表面蛋白多抗原表位串联表达后制备的人工多肽,其氨基酸序列为SEQ ID No.1,编码所述含空肠弯曲菌特异性表面蛋白多抗原表... 唐泰山 祝长青 蒋原 张睿 张常印 薛峰 栾军 王凯民 姜焱西尼罗病毒套式RT-PCR检测方法的建立 被引量:2 2008年 从GenBank上调取西尼罗病毒的基因序列,经过分析,设计并合成2套套式RT-PCR引物,分别对西尼罗病毒灭活苗进行扩增,结果扩增出与目的片段大小一致的条带,将其克隆入pMD18-T-Vector中,进行序列测定,证实为WNV的基因。建立了套式RT-PCR检测方法,经各反应条件的优化后,发现2套nest-PCR引物能分别扩增出85个拷贝和62个拷贝的双链DNA,对乙型脑炎病毒、黄热病毒等11种病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性,显示建立套式RT-PCR具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于口岸WNV的检测和监测。 宋捷 唐泰山 田玲玲 张常印 雷治海 孙旭辉 陈国强 赵建 王凯民 姜焱关键词:西尼罗病毒 套式RT-PCR 特异性 灵敏度 美国发生犬流感 2005年 美国正在流行一种叫犬流感的新病,是由犬流感病毒引起犬发生急性呼吸道感染,在赛犬场、宠物寄养地和兽医诊所等犬活动的场所都流行,有些赛狗场和宠物饲养园被强令关闭,美国目前已经出现此病的有十几个州,引起广泛关注。 张常印 张汇东关键词:宠物饲养 急性呼吸道感染 病毒分离 马流感病毒 鸡胚接种 血清样品 多重PCR检测PRV、PPV、PCV方法的建立及其应用 被引量:10 2005年 根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV)的gE、gI基因序列、猪细小病毒(PPV)的E蛋白的基因序列、II型猪圆环病毒(PCV-2)的ORF2基因序列,分别设计并合成3对能特异性扩增PRV、PPV、PCV-2的引物,通过DNAstar软件分析这3对引物不存在cross d im er。建立了PCR方法分别检测PRV、PPV、PCV-2,然后通过条件的优化,建立了PCR同时检测PRV、PPV、PCV-2的方法并研制出试剂盒。对试剂盒的特异性和有效期进行了研究。结果表明,该试剂盒具有很好的特异性,有效期在-20℃至少可以保存1年。 姜焱 周斌 张常印关键词:PRV PPV PCV-2 敏感性 实时荧光RT-PCR检测冷冻草莓中诺如病毒 被引量:15 2013年 目的建立冷冻草莓中的GI、GII型诺如病毒实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品的检测。方法对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA的提取和纯化,然后采用实时荧光RT-PCR进行检测。结果核酸提取方法能够有效地去除抑制因子,同时对104份送检样品进行检测,结果均为阴性。结论所建立的核酸提取与实时荧光RT-PCR结合的检测体系适合于草莓样品中诺如病毒GI、GII型的检测。 周阳 栾军 栾军 蒋鲁岩 唐泰山 张常印 张常印 付瑞燕 付瑞燕关键词:诺如病毒 实时荧光 RT-PCR 西尼罗病毒的基因进化分析 被引量:2 2007年 为更好的了解西尼罗病毒在世界各地的流行特征,从GenBank中随机选取45株西尼罗病毒的全基因或部分基因序列,进行同源性分析构建了基因进化树。发现西尼罗病毒可以分为两个谱系,1系病毒广泛分布在非洲西部、中东、东欧、印度、美国和澳大利亚等地,2系病毒分布在非洲亚撒哈拉、马达加斯加等地。1系的西尼罗病毒可进一步分为3个分支。对其中的22株西尼罗病毒部分基因序列进行同源性比较,发现1系病毒之间核苷酸同源在76.8%以上,氨基酸同源性在78.3%以上,而2系病毒与1系病毒核苷酸同源性约为64.7%~76.2%,氨基酸同源性约为64.7%~93.0%。 宋捷 唐泰山 张常印 雷治海 孙旭辉 王凯民关键词:西尼罗病毒 氨基酸同源性