张存
- 作品数：127 被引量：412H指数：8
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σC蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用
- 本发明公开了一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σC蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用。所述杂交瘤细胞分类命名为杂交瘤细胞株NDRV YT A5‑B6，保藏号为CCTCC NO：C2021124。本发明杂交瘤细胞分泌的鸭新型呼肠孤病毒...
- 云涛张存华炯钢叶伟成陈柳倪征朱寅初
- 文献传递
- 当前我国鸭病主要流行特点被引量：2
- 2013年
- 近年来,随着我国养鸭业的快速发展,饲养品种不断增多、养殖场密度不断加大,加上粗放的饲养条件、环境和水体污染以及产品的不规范流通,疫病的危害也日益突出。文章根据近年鸭病流行病学特点,提出了鸭病的防控措施。
- 张存
- 关键词：鸭病疫病防控
- 鹅细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的研制及鉴定
- 2022年
- 为了制备鹅细小病毒(GPV)VP2蛋白的特异性单克隆抗体,将VP2基因克隆至大肠杆菌原核表达载体pET28a(+),构建了pET28a-VP2原核表达质粒,经过诱导表达并纯化获得了VP2蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备了3株可稳定分泌与GPV VP2蛋白结合的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为:F5-B7、C4-4和B9-C5。抗体分型结果显示,3株单克隆抗体轻链均为κ链,F5-B7和C4-4重链亚类为IgG2b, B9-C5重链亚类为IgG1。以VP2蛋白为包被抗原,采用间接ELISA方法检测表明,F5-B7和C4-4两个单抗效价可达1∶240 000,B9-C5单抗为1∶20 000。间接免疫荧光和免疫印迹试验表明,这3株抗体皆能与GPV发生特异性反应。本研究为鹅细小病毒VP2蛋白表位鉴定、病毒和VP2蛋白结构功能研究、鹅细小病毒诊断试剂的开发及基因工程抗体的研究等奠定了基础。
- 陈柳倪征华炯钢叶伟成云涛朱寅初张存
- 关键词：鹅细小病毒VP2蛋白单克隆抗体
- 猪流行性腹泻病毒CH/ZJ分离株S基因的克隆、原核表达和免疫原性分析被引量：11
- 2010年
- 为了获得具有免疫活性的猪流行性病毒S蛋白,试验参照GenBank中所收录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株S基因序列设计1对特异性引物,去除信号肽,以PEDVCH/ZJ株为模板,通过RT-PCR扩增出目的基因,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化到Top10感受态细胞中,测序并分析。结果表明:目的基因含有1个长966bp、编码322个氨基酸残基组成的多肽;与CV777株相比较,同源性为96.0%,但在398bp处缺失编码1个异亮氨酸的密码子,将重组质粒命名为pET-P-SP1;将pET-P-SP1转化到大肠杆菌E.coliBL21-DL3(Rosetta)中,在IPTG诱导下表达;通过SDS-PAGE表达出与预期大小相符的约35.6ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;表达产物占菌体蛋白的80%;表达蛋白能与抗猪流行性腹泻病毒高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫活性。
- 刘邓冉多良袁秀芳徐丽华牛登元张存王朝文王一成
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因原核表达免疫学活性
- 2010年鸭出血性卵巢炎的流行特点及病原分离鉴定
- 引言2010年6月以来,我国种鸭和蛋鸭主产区发生一种疾病,以突发采食量和产蛋量急剧下降为特点,本文描述了该病的流行病学特点及其病原的分离鉴定。材料方法国家水禽产业技术体系18个岗位专家和23个综合试验站及其团队成员对该病...
- 曹贞贞张存刘月焕黄瑜刁有祥马学军张大丙
- 牛Ⅰ型疱疹病毒感染性细菌人工染色体的构建和gN基因缺失病毒的细胞繁殖特性被引量：4
- 2009年
- 通过同源重组将pHA2质粒插入到牛Ⅰ型疱疹病毒ZJ分离株基因组的UL15和UL18基因之间,构建了重组病毒rBHV1-HA;提取重组病毒的环状基因组DNA,转化大肠杆菌DH10B,获得了含有BHV1全基因组的感染性细菌人工染色体克隆pBHV1.pBHV1转染MDBK细胞可以拯救出病毒,该病毒与野生毒株在细胞上的繁殖特性未见差异.通过两步Red E/T重组,构建了gN基因跨膜区缺失的pBHV1突变体,并转染获得了重组病毒rBHV1-△gN.病毒繁殖动态曲线显示,rBHV1-△gN的滴度比野生毒株低9%～20%.BHV1感染性克隆的成功构建,将为研究新型BHV-1基因缺失疫苗和牛的病毒载体疫苗提供技术平台.
- 张存叶伟成王一成袁秀芳尹龙勃尹文玲刘蔓雯
- 关键词：感染性克隆细菌人工染色体
- 浙江省鸭、鸡、鹅群感染坦布苏病毒的血清学调查与分析被引量：4
- 2016年
- 为分析坦布苏病毒(TMUV)在鸭、鸡、鹅群中的感染情况,开展了血清流行病学调查。2010—2014年间,在浙江省11个地市采集鸡、鸭、鹅血清样品4 989份,采用ELISA方法检测TMUV抗体水平。结果表明:鸭、鹅、鸡的抗体阳性率分别为27.33%,6.94%,1.11%。按年度分析,在2010—2011年鸭TMUV引起的产蛋下降疫情流行期间,鸭感染群的TMUV抗体阳性率为54.83%,鹅、鸡未采样检测;2012年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为33.88%,20.00%,鸡未检测到抗体阳性群;2013年鸭、鹅、鸡TMUV感染群的抗体阳性率分别为49.68%,10.00%,28.00%;2014年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为39.19%,6.67%,鸡未检测到抗体阳性群。总体来看,鸭群在2010—2011年TMUV流行期间的抗体水平最高,表明鸭群是TMUV感染的主要禽种。
- 李剑秋周彩琴余斌吴雪军赵灵燕周蕾张存徐辉
- 关键词：ELISA抗体血清流行病学调查
- 猪伪狂犬病毒浙江株感染性细菌人工染色体克隆的构建被引量：9
- 2010年
- 通过同源重组将携带细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)载体和GFP表达框的pHA2质粒序列插入到PRV病毒的UL23(TK)基因内,获得了重组病毒rPRV-HA2;将该重组病毒的环状基因组电转化到感受态细胞EscherichiacoliDH10B,筛选到病毒的感染性克隆PRV BAC(pPRV)。pPRV转染VeroE6细胞可以重新启动病毒的生产性感染,该拯救病毒的细胞病变和体外增殖特性与rPRV-HA2一致。病毒生长曲线表明TK基因的部分删除和BAC载体的插入不会影响病毒在体外的复制。PRV感染性BAC克隆的成功构建,将方便在大肠杆菌内对病毒基因组进行快速、准确的操作,为进一步开展PRV基因功能和病毒载体研究奠定基础。
- 尹文玲尹龙勃叶伟成孙学强姚火春张淼涛王一成张存
- 关键词：伪狂犬病毒细菌人工染色体感染性克隆重组病毒
- 一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用，该病毒含有由猪细小病毒VP2基因、口蹄疫病毒2A基因和猪圆环病毒Cap基因依次连接构成的外源基因。该方法包括：(1)构建包含PRV全基因组的细菌人工染色体pPRV；(2...
- 张存崔尚金叶伟成陈柳余斌倪征云涛华炯钢张燕
- 新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性被引量：11
- 2014年
- 新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,获得重组质粒p ET-28a(+)-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达后经SDS-PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析,蛋白分子量约为36 k Da。重组蛋白经纯化后免疫实验兔,获得抗σC蛋白的高效免疫血清。通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明,新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应活性。
- 陈海鹏云涛张存余斌倪征华炯钢崔言顺
- 关键词：原核表达
