张存
- 作品数：133 被引量：424H指数：8
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σC蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用
- 本发明公开了一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σC蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用。所述杂交瘤细胞分类命名为杂交瘤细胞株NDRV YT A5‑B6，保藏号为CCTCC NO：C2021124。本发明杂交瘤细胞分泌的鸭新型呼肠孤病毒...
- 云涛张存华炯钢叶伟成陈柳倪征朱寅初
- 文献传递
- 当前我国鸭病主要流行特点被引量：2
- 2013年
- 近年来,随着我国养鸭业的快速发展,饲养品种不断增多、养殖场密度不断加大,加上粗放的饲养条件、环境和水体污染以及产品的不规范流通,疫病的危害也日益突出。文章根据近年鸭病流行病学特点,提出了鸭病的防控措施。
- 张存
- 关键词：鸭病疫病防控
- 鹅细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的研制及鉴定
- 2022年
- 为了制备鹅细小病毒(GPV)VP2蛋白的特异性单克隆抗体,将VP2基因克隆至大肠杆菌原核表达载体pET28a(+),构建了pET28a-VP2原核表达质粒,经过诱导表达并纯化获得了VP2蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备了3株可稳定分泌与GPV VP2蛋白结合的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为:F5-B7、C4-4和B9-C5。抗体分型结果显示,3株单克隆抗体轻链均为κ链,F5-B7和C4-4重链亚类为IgG2b, B9-C5重链亚类为IgG1。以VP2蛋白为包被抗原,采用间接ELISA方法检测表明,F5-B7和C4-4两个单抗效价可达1∶240 000,B9-C5单抗为1∶20 000。间接免疫荧光和免疫印迹试验表明,这3株抗体皆能与GPV发生特异性反应。本研究为鹅细小病毒VP2蛋白表位鉴定、病毒和VP2蛋白结构功能研究、鹅细小病毒诊断试剂的开发及基因工程抗体的研究等奠定了基础。
- 陈柳倪征华炯钢叶伟成云涛朱寅初张存
- 关键词：鹅细小病毒VP2蛋白单克隆抗体
- 猪流行性腹泻病毒CH/ZJ分离株S基因的克隆、原核表达和免疫原性分析被引量：11
- 2010年
- 为了获得具有免疫活性的猪流行性病毒S蛋白,试验参照GenBank中所收录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株S基因序列设计1对特异性引物,去除信号肽,以PEDVCH/ZJ株为模板,通过RT-PCR扩增出目的基因,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化到Top10感受态细胞中,测序并分析。结果表明:目的基因含有1个长966bp、编码322个氨基酸残基组成的多肽;与CV777株相比较,同源性为96.0%,但在398bp处缺失编码1个异亮氨酸的密码子,将重组质粒命名为pET-P-SP1;将pET-P-SP1转化到大肠杆菌E.coliBL21-DL3(Rosetta)中,在IPTG诱导下表达;通过SDS-PAGE表达出与预期大小相符的约35.6ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;表达产物占菌体蛋白的80%;表达蛋白能与抗猪流行性腹泻病毒高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫活性。
- 刘邓冉多良袁秀芳徐丽华牛登元张存王朝文王一成
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因原核表达免疫学活性
- 2010年鸭出血性卵巢炎的流行特点及病原分离鉴定
- 引言2010年6月以来,我国种鸭和蛋鸭主产区发生一种疾病,以突发采食量和产蛋量急剧下降为特点,本文描述了该病的流行病学特点及其病原的分离鉴定。材料方法国家水禽产业技术体系18个岗位专家和23个综合试验站及其团队成员对该病...
- 曹贞贞张存刘月焕黄瑜刁有祥马学军张大丙
- 牛Ⅰ型疱疹病毒感染性细菌人工染色体的构建和gN基因缺失病毒的细胞繁殖特性被引量：4
- 2009年
- 通过同源重组将pHA2质粒插入到牛Ⅰ型疱疹病毒ZJ分离株基因组的UL15和UL18基因之间,构建了重组病毒rBHV1-HA;提取重组病毒的环状基因组DNA,转化大肠杆菌DH10B,获得了含有BHV1全基因组的感染性细菌人工染色体克隆pBHV1.pBHV1转染MDBK细胞可以拯救出病毒,该病毒与野生毒株在细胞上的繁殖特性未见差异.通过两步Red E/T重组,构建了gN基因跨膜区缺失的pBHV1突变体,并转染获得了重组病毒rBHV1-△gN.病毒繁殖动态曲线显示,rBHV1-△gN的滴度比野生毒株低9%～20%.BHV1感染性克隆的成功构建,将为研究新型BHV-1基因缺失疫苗和牛的病毒载体疫苗提供技术平台.
- 张存叶伟成王一成袁秀芳尹龙勃尹文玲刘蔓雯
- 关键词：感染性克隆细菌人工染色体
- 浙江省鸭、鸡、鹅群感染坦布苏病毒的血清学调查与分析被引量：4
- 2016年
- 为分析坦布苏病毒(TMUV)在鸭、鸡、鹅群中的感染情况,开展了血清流行病学调查。2010—2014年间,在浙江省11个地市采集鸡、鸭、鹅血清样品4 989份,采用ELISA方法检测TMUV抗体水平。结果表明:鸭、鹅、鸡的抗体阳性率分别为27.33%,6.94%,1.11%。按年度分析,在2010—2011年鸭TMUV引起的产蛋下降疫情流行期间,鸭感染群的TMUV抗体阳性率为54.83%,鹅、鸡未采样检测;2012年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为33.88%,20.00%,鸡未检测到抗体阳性群;2013年鸭、鹅、鸡TMUV感染群的抗体阳性率分别为49.68%,10.00%,28.00%;2014年鸭、鹅TMUV感染群的抗体阳性率分别为39.19%,6.67%,鸡未检测到抗体阳性群。总体来看,鸭群在2010—2011年TMUV流行期间的抗体水平最高,表明鸭群是TMUV感染的主要禽种。
- 李剑秋周彩琴余斌吴雪军赵灵燕周蕾张存徐辉
- 关键词：ELISA抗体血清流行病学调查
- 猪伪狂犬病毒浙江株感染性细菌人工染色体克隆的构建被引量：10
- 2010年
- 通过同源重组将携带细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)载体和GFP表达框的pHA2质粒序列插入到PRV病毒的UL23(TK)基因内,获得了重组病毒rPRV-HA2;将该重组病毒的环状基因组电转化到感受态细胞EscherichiacoliDH10B,筛选到病毒的感染性克隆PRV BAC(pPRV)。pPRV转染VeroE6细胞可以重新启动病毒的生产性感染,该拯救病毒的细胞病变和体外增殖特性与rPRV-HA2一致。病毒生长曲线表明TK基因的部分删除和BAC载体的插入不会影响病毒在体外的复制。PRV感染性BAC克隆的成功构建,将方便在大肠杆菌内对病毒基因组进行快速、准确的操作,为进一步开展PRV基因功能和病毒载体研究奠定基础。
- 尹文玲尹龙勃叶伟成孙学强姚火春张淼涛王一成张存
- 关键词：伪狂犬病毒细菌人工染色体感染性克隆重组病毒
- 一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用，该病毒含有由猪细小病毒VP2基因、口蹄疫病毒2A基因和猪圆环病毒Cap基因依次连接构成的外源基因。该方法包括：(1)构建包含PRV全基因组的细菌人工染色体pPRV；(2...
- 张存崔尚金叶伟成陈柳余斌倪征云涛华炯钢张燕
- 重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗和鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)三联灭活疫苗联合免疫效果研究
- 2024年
- 为评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗和鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)三联灭活疫苗混合后的联合免疫效果,试验将120只11日龄健康商品代黄羽肉鸡随机分成4组,设混苗联合免疫组、分点免疫组和单苗免疫组,分别接种疫苗,检测免疫前和免疫后14、21、28和35 d鸡血清中特异性抗体水平,评估两种疫苗混合后联合免疫的安全性和免疫效果。结果显示:免疫后1周内各组鸡精神、食欲、呼吸等生理活动均无异常;混苗联合免疫组免疫后14 d,6种病原抗体滴度均升高,免疫后21 d均达到理想水平,免疫后28 d抗体滴度均高于5 log2;混苗联合免疫组抗体水平和抗体消长规律与其他组基本一致。研究表明,两种禽流感疫苗混合后联合免疫的安全性和免疫效果与单苗免疫相当,无干扰现象,可减少鸡群应激,节省人工,为养禽场免疫程序优化提供参考。
- 沈亚菊陶建丰冯高乐邵高姜永其黄杰偲倪征张存林瑞平
- 关键词：鸡新城疫禽流感联合免疫
