张可心
- 作品数：9 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用的研究
- 为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析...
- 张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白生物学作用
- 鸭β-防御素16的分离、鉴定及其抗病毒机制被引量：1
- 2012年
- 【研究目的】旨在克隆与表达鸭β-防御素16(AvBD16)基因及测定其生物学特性,监测了鸭肝炎病毒感染后麻鸭不同组织AvBD16与TLR-7的动态变化。【方法】采用RT-PCR方法,从鸭骨髓组织中扩增到鸭AvBD16,并将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对其重组和合成蛋白进行生物学活性测定。采用荧光定量PCR方法,分别检测了鸭肝炎病毒对鸭AvBD16和TLR-7在不同组织中表达量的影响。【结果】鸭AvBD16 cDNA大小为155bp,编码50个氨基酸残基,与鸡AvBD3氨基酸同源性最高,为62%。重组和合成鸭AvBD16蛋白对12种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响,且溶血活性极低。重组AvBD16蛋白具有体外抗病毒活性。经鸭肝炎病毒诱导后,鸭AvBD16在肝脏及其他组织中被诱导表达或表达量显著上调,且与TLR7的表达量呈正相关。【结论】成功克隆并表达了鸭AvBD16基因,重组和合成AvBD16蛋白具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性。重组AvBD16蛋白具有抗鸭肝炎病毒的活性,体内抗病毒作用可能受TLR-7通路调节。
- 张可心张名岳辛胜男韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：抗菌活性抗病毒活性信号传导
- 鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用被引量：4
- 2011年
- 为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性,采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5,将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基,分别在分子内形成Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6共3对二硫键,与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97%。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 kD,具有良好的抗菌活性,对11种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外,该重组蛋白对红细胞溶血活性极低。
- 张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- 鸽β-防御素5基因克隆及其抗菌活性被引量：5
- 2012年
- 从鸽的骨髓和肝组织中扩增到2个禽β-防御素(AvBD)基因,在大肠杆菌中高效表达,检测其重组蛋白的抗菌活性。应用RT-PCR方法从鸽的骨髓和肝脏组织中扩增AvBD5基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-5的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。测序得到这2个基因的cDNA大小均为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基。经遗传进化分析发现,该基因推导的两组氨基酸序列与鸭AvBD5的同源性最高,分别为87.9%和78.8%,这两组氨基酸序列的同源性为83.3%。因此,将其分别命名为鸽AvBD5α(骨髓)和鸽AvBD5β(肝脏)。进一步将这两个基因分别亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。两个重组融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,及其融合蛋白的溶血活性。结果表明,重组鸽AvBD 5α、AvBD 5β融合蛋白的分子量约为32 kDa。具有明显的抗菌活性,对12种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性显著影响。此外,这两个重组蛋白对红细胞无显著溶血活性。
- 辛胜男张可心张名岳韩宗玺邵昱昊刘晓丽刘胜旺马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- 3个新的鹅β-防御素的分离、鉴定及其抗菌机制的初探
- 本试验应用RT-PCR方法,从鹅的脾脏、骨髓和法氏囊等组织器官中扩增到3个新的鹅AvBDs基因.将其推导的氨基酸序列与其他β-防御素序列分析比较,结果显示这3个AvBDs基因分别为鹅β-防御素1(AvBD1)、鹅β-防御...
- 张名岳张可心韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：抗菌活性TOLL样受体信号转导
- 鸭β-防御素4cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的初步分析被引量：3
- 2011年
- 本研究旨在克隆与表达鸭β-防御素4(AvBD4)基因及测定其生物学特性,并检测其在鸭脏器组织中的分布。采用RT-PCR方法从鸭法氏囊组织中扩增到鸭AvBD4,其cDNA大小为171bp,编码56个氨基酸。经同源性分析,鸭AvBD4与鸡AvBD4的氨基酸序列同源性最高,达73.2%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-duck AvBD4。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃进行诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鸭AvBD4蛋白的相对分子质量约为32ku,与预期大小一致。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性,结果显示,重组鸭AvBD4蛋白具有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。在高盐离子条件下,重组鸭AvBD4蛋白仍具有抑制金黄色葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌的作用。此外,该重组蛋白的溶血活性极低。运用实时荧光定量PCR法检测到该基因在鸭组织器官中表达局限,仅在盲肠扁桃体、脾脏和法氏囊中表达。
- 蔺利娟韩宗玺邵昱昊张可心刘胜旺李子瑞马得莹
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- TLR-4介导的鹅β-防御素1抗肠炎沙门菌感染的信号传导机制初探被引量：1
- 2012年
- 为研究鹅β-防御素1(AvBD1)的生物学特性以及初步尝试探寻其抗肠炎沙门菌的作用机理,利用RT-PCR方法从鹅骨髓组织中扩增到鹅AvBD1基因片段,并将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鹅AvBD1蛋白在原核高效表达(相对分子质量约31ku)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性。结果显示,鹅AvBD1基因cDNA片段大小为198bp,编码65个氨基酸残基。经相似性分析发现鹅AvBD1氨基酸序列与鸵鸟AvBD1氨基酸序列相似性最高,为77.1%,而且重组鹅AvBD1蛋白具有广谱的抗菌活性,对12种细菌(包括革兰阳性菌和革兰阴性菌)均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD1蛋白的抗菌活性,且该重组蛋白的溶血活性极低。试验表明,肠炎沙门菌确实会诱导鹅AvBD1基因在鹅骨髓组织中的表达,说明鹅AvBD1起到了抗肠炎沙门菌感染的作用,而这种作用有可能与TLR4介导的信号转导有关。
- 张名岳张可心辛胜男韩宗玺邵昱昊刘晓丽刘胜旺马得莹
- 关键词：TOLL样受体4
- 5个新的鸭β-防御素的分离、鉴定及其抗病毒机制的初探
- 本研究采用RT-PCR方法,分别从鸭肺脏和骨髓组织中扩增到5个新的β-防御素基因,将测序结果与已发现的禽β-防御素(AvβD)和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树并进行同源性分析.结果显示,这5个基因分别是鸭...
- 张可心蔺丽娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：抗菌活性抗病毒活性信号转导
- 鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用
- 为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析...
- 张可心蔺丽娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：生物学特性抗菌活性重组蛋白
