庄重
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目南通市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 说课在留学生医学微生物教学中的应用被引量：2
- 2018年
- 说课是一项重要的教研活动,能有效的提高教师能力、教学效果和教育质量,加强教师之间的教学经验交流。本文作者以狂犬病病毒为例,从使用教材、教学目标、教学方法、教学流程各方面对留学生医学微生物学的说课进行阐述。
- 刘晓娟王燏婵孙伟庄重孙晓雷
- 关键词：说课留学生医学微生物教学研究
- 噬菌体展示技术筛选与白介素-32相互作用的蛋白被引量：2
- 2013年
- 目的利用T7噬菌体展示技术筛选与白介素-32(interleukin-32,IL-32)相互作用的蛋白。方法构建IL-32α的原核表达重组质粒,表达并纯化重组IL-32α蛋白(recombinant IL-32α,rIL-32α);以纯化后的rIL-32α作为靶蛋白,应用T7噬菌体展示技术对人肝细胞cDNA文库进行筛选;对筛选到的阳性克隆进行DNA测序及计算机辅助分析;利用哺乳动物双杂交实验和免疫共沉淀实验对筛选到的阳性克隆进行验证。结果成功表达并亲和纯化了rIL-32α蛋白;经过5轮筛选,投入和产出的噬菌体滴度比值达到稳定;同源性分析初步确定9个与IL-32α蛋白相互作用的蛋白;进一步实验证实IL-32α与这9个蛋白片段能发生相互作用。结论利用T7噬菌体展示技术成功筛选到9个与IL-32α相互作用的蛋白,我们的发现为深入揭示IL-32的生物学功能奠定了研究基础。
- 孙伟庄重冯金荣孙晓雷朱丹丹段义农
- 关键词：原核表达
- 1个新的白介素-32剪接异构体的克隆与表达被引量：3
- 2013年
- 目的对白介素-32(interleukin-32,IL-32)的不同剪接异构体进行克隆及表达。方法设计保守引物,以Jurkat细胞的cDNA为模板进行PCR扩增,克隆IL-32不同剪接异构体;DNA测序扩增产物,计算机辅助分析IL-32基因序列特征;构建IL-32原核及真核表达重组质粒,并利用SDS-PAGE和Western blot检测其表达情况。结果克隆得到已知的IL-32的6个剪接异构体(α、β、γ、δ、ε、ζ),还克隆得到1个新的IL-32剪接异构体,将其命名为IL-32η,Genbank登录号JN546102。IL-32η编码区长度为336 bp,编码的蛋白含111个氨基酸残基,其理论相对分子质量为12 560。IL-32η原核表达产物主要以可溶形式位于宿主菌的周质腔。亲和纯化了重组IL-32η,利用重组IL-32η制备了兔多克隆抗体,该抗体能够识别IL-32全部的7个剪接异构体。结论克隆得到1个新的IL-32剪接异构体IL-32η,它的发现将为全面理解IL-32的功能提供新思路。
- 孙伟李群冯金荣庄重朱丹丹段义农
- 关键词：剪接异构体原核表达真核表达
- 白念珠菌蛋白磷酸酯酶CaPph3和调节亚基CaPsy2在调节菌丝发育中的作用
- 2013年
- 目的:研究白念珠菌蛋白磷酸酯酶CaPph3及调节亚基CaPsy2在调控白念珠菌菌丝发育过程中的作用。方法:利用遗传毒性试剂HU和MMS分别处理CaPPH3和CaPSY2缺失株,观察移除毒性试剂后缺失株的菌丝发育情况。结果:(1)缺失株的表型鉴定:在含有遗传毒性试剂MMS、HU以及CP平板上,与野生型菌株RM1000相比,CaPPH3缺失株、CaPSY2缺失株和CaPPH3 CaPSY2双缺失株均表现出明显生长缺陷,且各缺失株间差异不大。(2)缺失株对遗传毒性试剂敏感度测定:用MMS和HU处理各菌株后,野生型菌株的存活率约95%,而CaPPH3缺失株、CaPSY2缺失株和CaPPH3 CaPSY2双基因缺失株存活率明显下降,且相互之间差异不大。(3)缺失株菌丝发育实验:用0.020%MMS处理各菌株4小时后,野生型菌株RM1000还维持酵母态,而CaPPH3缺失株、CaPSY2缺失株和CaPPH3 CaPSY2双基因缺失株已出芽形成菌丝;而移除MMS后野生型菌株形成菌丝,6小时后不再延长,在菌丝顶端形成酵母态细胞,而CaPPH3、CaPSY2和CaPPH3 CaPSY2双基因缺失株仍维持菌丝态。用40 mmol/L HU处理各菌株4小时后,各菌株都维持酵母态;而移除HU后野生型菌株仍维持酵母态,而CaPPH3缺失株、CaPSY2缺失株和CaPPH3 CaPSY2双基因缺失株则会逐渐形成菌丝。结论:CaPph3和CaPsy2参与调节遗传毒性试剂诱导的白念珠菌的菌丝发育。
- 冯金荣孙伟庄重朱丹丹段义农
- 关键词：白念珠菌羟基脲
- 乳酸乳球菌食品级表面表达系统建立和报告基因检测被引量：1
- 2015年
- 目的 :建立乳酸乳球菌食品级高效表面表达系统。方法 :克隆并表达枯草芽孢杆菌基因组中γ-多聚谷氨酸合成酶亚基跨膜蛋白Pgs A,同时将报告基因——金黄色葡萄球菌耐热核酸酶融合在Pgs A蛋白C-末端,通过甲苯胺蓝-DNA琼脂平板检测酶活性。结果:耐热核酸酶基因被成功表达并锚定在细胞表面,具有较高酶活性。结论:该系统的成功建立为未来高致病性病原微生物抗原簇重组表达,进而研制新型基因工程口服疫苗奠定基础。
- 庄重季莉徐莹莹李珊珊季玉红段义农
- 关键词：乳酸乳球菌核酸酶
- 白念珠菌CaPSY2基因的敲除和功能研究
- 2013年
- 目的:研究人体病原真菌白念珠菌CaPsy2蛋白的功能,探讨它在DNA损伤检查点修复过程中所起的作用。方法:采用同源重组的方法构建CaPSY2双等位基因缺失株,并利用倍比稀释法探讨CaPSY2缺失株在含有遗传毒性试剂平板上的表型。结果:PCR检测结果显示CaPSY2双等位基因缺失株构建成功,而表型结果显示CaPsy2缺失会导致缺失株对遗传毒性试剂敏感,且这种敏感性表型可以被外源的CaPSY2基因互补。结论:CaPsy2蛋白参与DNA损伤修复过程,并且可能作为CaPph3的调节亚基而发挥作用。
- 冯金荣孙乐桥孙伟庄重朱丹丹段义农
- 关键词：白念珠菌基因敲除
- 日本血吸虫T2核酸酶的原核表达及活性分析被引量：1
- 2013年
- 目的构建日本血吸虫T2核酸酶表达载体,并进行体外表达和酶活性分析。方法从日本血吸虫基因组数据库中找到与曼氏血吸虫虫卵抗原Omega-1同源性最高的蛋白AY814845,设计引物并通过PCR技术扩增得到该基因,将其成熟编码区连入pET32a表达载体,转化大肠杆菌并用IPTG诱导其表达,最后对表达产物的核酸酶活性进行分析。结果成功的构建了日本血吸虫T2核酸酶的表达载体,其编码区能够在大肠杆菌中表达,且表达产物具有一定的核酸酶活性。结论从体外扩增了日本血吸虫T2核酸酶AY814845,明确其表达产物具有核酸酶活性,为今后深入研究该蛋白的功能打下了基础。
- 冯金荣朱丹丹秦永伟孙伟庄重段义农
- 关键词：日本血吸虫虫卵抗原活性分析
