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孙长俭: 作品数：14 被引量：43H指数：5; 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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灭活贝氏柯克斯体免疫小鼠抗登革病毒感染的实验研究: 2007年; 目的研究灭活贝氏柯克斯体增强小鼠非特异性抗登革病毒感染的免疫效能。方法用灭活贝氏柯克斯体全细胞疫苗（WCV）免疫BALB／c小鼠，每只小鼠皮下注射50μgWCV，初次免疫后第5周及第7周分别腹腔注射20μg WCV加强免疫。1周后，用10^5 TCID50剂量的登革病毒2型经尾静脉注入感染小鼠，于感染后48、72h分别解剖小鼠，自血和脑组织提取RNA样本，用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测样本。结果用登革病毒特异的定量PCR检测感染小鼠血RNA样本，结果显示感染72h血样本中病毒含量显著低于48h样本，但免疫小鼠与未免疫小鼠之间无显著差异。检测脑组织RNA样本，未免疫小鼠和免疫小鼠的感染48h样本检出病毒均为少量；但未免疫小鼠感染96h样本检出病毒量明显增加，显著高于免疫小鼠。结论灭活贝氏柯克斯体可诱导机体产生非特异的免疫应答，具有一定增强小鼠抗登革病毒感染的能力，但具体机制有待进一步研究。; 孙长俭陈梅玲王锡乐杨晓温博海; 关键词：贝氏柯克斯体登革病毒非特异性免疫

贝氏考克斯体毒力与毒力相关蛋白芯片的研制被引量：2: 2008年; 目的:构建贝氏考克斯体毒力与毒力相关蛋白芯片。方法:根据贝氏考克斯体全基因组序列,筛选出约160个编码毒力及毒力相关蛋白的基因,采用PCR扩增基因片段,将获得的基因片段与pET32a表达载体连接,然后将该重组质粒转化大肠杆菌并使目的基因表达,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达的目的重组蛋白。将纯化的重组蛋白点在醛基化玻片上制备蛋白芯片。结果:由贝氏考克斯体104个重组蛋白构建毒力与毒力相关蛋白芯片,通过荧光扫描仪分析蛋白芯片与贝氏考克斯体感染的小鼠血清反应,发现10个重组蛋白与该血清反应为强阳性。结论:所制备的毒力与毒力相关蛋白芯片具有贝氏考克斯体特异性,可用于贝氏考克斯体感染患者血清的检测。; 王锡乐温博海陈梅玲王君孙长俭杨晓; 关键词：重组蛋白蛋白芯片

氯仿—甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的研制及其免疫保护性和安全性初步评价: 贝氏柯克斯体/(Coxiella burnetii，又称Q热立克次体/)为Q热病原体。该病原体为专性细胞内寄生菌，可通过气溶胶传播，对人和动物的感染性极强，是一种重要的生物战剂／生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感，...; 孙长俭; 关键词：贝氏柯克斯体 Q热体液免疫; 文献传递

实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体被引量：13: 2006年; 目的建立检测恙虫病东方体的实时荧光定量PCR(quantitative real-ti me PCR)方法。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计引物和探针,以克隆的56kD基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.999)。荧光定量PCR检测恙虫病东方体的灵敏度约为套式PCR的100倍,并且具有良好的重复性。用该定量PCR检测其它相关立克次体和病原菌DNA样本,检出结果均为0。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肺脏、肝脏标本,结果脾脏中东方体出现最早和检出量最多,肝脏和肺脏次之。血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立的荧光定量PCR方法具有很高的特异性和敏感性,可用于东方体感染早期血样本的快速检测作恙虫病感染早期诊断,并且可以定量分析评价恙虫病东方体感染的程度。; 朱丽娜张晶波陈梅玲温博海牛东升李青凤孙长俭杨晓; 关键词：恙虫病东方体实时荧光定量PCR

氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的免疫原性和免疫保护性的实验研究: 贝氏柯克斯体(又称Q热立克次体)为Q热病原体。该病原体为专性细胞内寄生菌,可通过气溶胶传播,对人和动物的感染性极强,是一种重要的生物战剂/生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感,畜牧相关从业人员是高危人群。不管是预防贝...; 孙长俭陈梅玲杨晓温博海; 关键词：免疫保护免疫原性贝氏柯克斯体 Q热立克次体; 文献传递

氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的免疫原性和免疫保护性的实验研究: 贝氏柯克斯体Coxiella burnetii，又称Q热立克次体为Q热病原体。该病原体为专性细胞内寄生菌，可通过气溶胶传播，对人和动物的感染性极强，是一种重要的生物战剂/生物恐怖剂。人、畜对贝氏柯克斯体普遍易感，畜牧相关...; 孙长俭温博海; 关键词：贝氏柯克斯体氯仿免疫保护性免疫原性 Q热疫苗脂肪酸; 文献传递

实时荧光定量PCR检测普氏立克次体被引量：6: 2006年; 目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测普氏立克次体的实时荧光定量PCR方法。方法根据普氏立克次体外膜蛋白B的基因(ompB)序列设计引物和探针,以克隆的OmpB基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI 7900型)上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0．999)；与巢式PCR相比较,荧光定量PCR检测敏感性是其100倍。用荧光定量PCR检测莫氏立克次体及其他相关立克次体和细菌DNA,检出结果均为阴性。用荧光定量PCR检测普氏立克次体感染的豚鼠血标本,某些样本检测为阳性,而用巢式PCR检测的结果均为阴性。结论研究中建立的检测普氏立克次体实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量普氏立克次体DNA,可用作临床实验室快速确诊流行性斑疹伤寒。; 杨晓陈梅玲温博海牛东升朱丽娜李青凤孙长俭; 关键词：流行性斑疹伤寒普氏立克次体实时定量PCR

贝氏柯克斯体感染与免疫的研究: 贝氏柯克斯体是一种嗜单核一巨噬细胞寄生的革兰阴氏性小球杆菌,为Q热的病原和潜在生物恐怖剂。将贝氏柯克斯体与人单核细胞(THP-1)在体外共同培养,结果发现人单核细胞对活贝氏柯克斯体的吞噬效率则显著低于对Ξγ射线灭活贝氏柯...; 温博海孙长俭李青凤李丽莉; 关键词：贝氏柯克斯体细菌感染免疫功能; 文献传递

实时荧光定量PCR检测五日热巴通体被引量：5: 2006年; 目的采用TaqMan- MGB探针建立检测五日热巴通体的实时荧光定量PCR(real- timequantitativePCR)方法。方法根据五日热巴通体特异的16-23SrRNA间隔区序列设计引物和探针,以克隆的1623SrRNA间隔区基因片段作DNA模板,建立了检测五日热巴通体实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.996);与普通PCR相比较,荧光定量PCR检测的灵敏度约为它的200倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌,检出结果为阴性。实时荧光定量PCR检测五日热巴通体实验感染小鼠血、脾脏、肝脏和肺组织DNA样本,脾脏和肝脏样本中检出较高水平五日热巴通体DNA,血和肺部检出的目的DNA的水平较低。结论本研究建立的检测五日热巴通体的实时荧光定量PCR法具有很高的检测灵敏度和特异性,可用于临床患者血样本的检测,作五日热的早期诊断。; 陈梅玲张晶波孙长俭温博海杨晓牛东升; 关键词：实时定量PCR 16S-23S RRNA

氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的免疫原性及免疫保护性研究被引量：6: 2007年; 目的实验评价氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分(CMR)疫苗的免疫特性及免疫保护性。方法采用国内分离贝氏柯克斯体新桥株制备CMR疫苗,用CMR免疫Balb/c小鼠;采用间接免疫荧光法检测CMR免疫小鼠血清特异性抗体水平和用淋巴细胞增殖试验评价CMR疫苗体外刺激小鼠脾细胞增殖的能力;以贝氏柯克斯体攻击免疫小鼠和用贝氏柯克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠血和脾脏样本。结果CMR免疫第4周起,小鼠血清中检出高水平的特异性抗体,CMR加氢氧化铝佐剂免疫小鼠的血清特异性抗体显著高于未加佐剂组。CMR在体外刺激正常小鼠和免疫小鼠脾淋巴细胞增殖水平显著高于对照组,WCV则抑制正常脾淋巴细胞增殖。三种剂量(30μg、10μg、1μg/只)CMR免疫小鼠血和脾脏样本贝氏柯克斯体含量显著低于未免疫组,以30μg组及加佐剂免疫小鼠的样本含菌量更显著低于对照组。结论采用我国分离株制备的CMR疫苗能诱导机体产生高效特异性体液免疫和细胞免疫应答,使机体抵抗大剂量的贝氏柯克斯体感染,具有良好的免疫原性和免疫保护性;氢氧化铝佐剂能显著增强CMR疫苗的免疫保护效能。; 孙长俭陈梅玲杨晓温博海牛东升李青凤王锡乐; 关键词：贝氏柯克斯体 Q热疫苗

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