孙跃辉
- 作品数：14 被引量：64H指数：3
- 供职机构：天津大学化工学院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 葡萄球菌A型肠毒素检测竞争ELISA方法的建立被引量：3
- 2010年
- 为建立快速、灵敏、特异的检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的方法,应用构建的pGEX-6P-SEA、pET28α-SEA重组质粒表达带有不同融合肽的葡萄球菌A型肠毒素,分别通过谷胱甘肽亲和纯化、镍螯合纯化获得SEA的重组融合表达蛋白HIS-SEA、GST-SEA,以HIS-SEA为包被抗原,以GST-SEA、天然SEA肠毒素为竞争抗原,确立了SEA型肠毒素ELISA检测的工作条件:包被浓度为2.5μg/mL,阳性血清稀释度为1∶50,辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡免疫球蛋白工作浓度为1∶2000。建立了以重组肠毒素GST-SEA作为竞争抗原检测葡萄球菌肠毒素SEA的间接竞争ELISA(ciELISA)方法,竞争肠毒素GST-SEA蛋白浓度x与P/N值y的关系式:x(GST-SEA)=1.99-y/0.34,R2(GST-SEA)=0.9964,线性检测范围均为1～62.5ng/mL,最低检测量为1ng/mL,此方法丰富了食品中A型肠毒素的检测手段。
- 徐丹丹黄金海刘莹孙跃辉周凤娟
- 关键词：重组蛋白
- 猪流感H1N1亚型病毒dM2蛋白的原核表达及鉴定
- 2012年
- 为构建猪流感病毒H1N1亚型dM2蛋白的原核表达系统,获得具有生物活性的GST-dM2重组蛋白。研究从H1N1亚型猪流感病毒核酸中克隆出M2全长基因,采用OE-PCR技术得到缺失跨膜区的M2基因(dM2),构建重组表达质粒pGEX-6p-dM2,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后,进行GST亲和层析柱纯化和Western-blotting鉴定。结果表明GST-dM2融合蛋白在大肠杆菌BL21中获得较高表达,并以可溶形式存在,表达量为22.75%。纯化后的GST-dM2重组蛋白为38 kD,经Western-blotting证明具有良好的反应原性。GST-dM2重组蛋白的成功获得,为进一步研究猪流感亚单位疫苗奠定了基础。
- 孙跃辉刘业兵黄金海王芳张晓杰宁宜宝
- 关键词：猪流感病毒原核表达
- 山羊关节炎-脑炎病毒陕西分离株全基因组克隆和序列分析
- 根据GenBank中发表的山羊关节炎-脑炎病毒CAEV-CO株的全基因组序列,设计合成了5对引物,对CAEV陕西株的全基因组进行了PCR扩增,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果表明,CAEV-陕西株基因组全长为9 065...
- 黄金海孙跃辉庄世文肖华志
- 关键词：脑炎病毒基因克隆
- 葡萄球菌肠毒素O表达及其生物学活性的初步分析被引量：1
- 2009年
- 目的克隆葡萄球菌肠毒素O（seo）基因，构建其两种原核表达载体，表达、纯化重组蛋白SEO，并对其生物活性进行初步研究。方法设计引物PCR获得seo成熟肽基因，将其分别克隆至原核表达载体pGEX-6P-1、pET28a，转化E．coli BL21、E．coli BL21（DE3），重组蛋白分别经GST亲和层析、镍螯合层析纯化，利用Westernblot验证重组SEO的免疫原性，MTT法测定重组SEO对ICR小鼠脾淋巴细胞的增殖作用，Caspase3酶活及DNA电泳分析重组SEO诱导细胞凋亡的能力。结果克隆的seo基因序列与报道的序列完全相同。纯化获得重组蛋白GST—SEO和P28-SEO的表达量分别占菌体蛋白的25％和22％。免疫印迹表明两种蛋白均具有良好的免疫原性。生物活性检测表明，低剂量的肠毒素对小鼠脾淋巴细胞有刺激增殖作用，较高剂量则会导致细胞凋亡。结论两种重组的SEO仍具有超抗原的活性，对小鼠脾淋巴细胞具有诱导凋亡的能力。
- 刘莹黄金海孙跃辉张丽霞王建华庄世文王静思李琳徐丹丹
- 关键词：葡萄球菌生物学活性
- 可视化的RT-LAMP方法检测禽白血病病毒被引量：14
- 2011年
- 本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异性和敏感性,并对加入SYBR GreenⅠ肉眼判定与仪器监测结果进行比对。结果表明:建立的RT-LAMP方法在63℃水浴中36min可对ALV核酸进行高效扩增,在反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼判断结果与Real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有很强特异性,对其它相关鸡病病原检测结果均为阴性;其检出限量为14.2pg.μL-1,显示出很高的敏感性;用建立的LAMP方法对24个样品进行检测,结果表明LAMP法与其原检测结果基本一致;本研究建立了可对ALV进行快速检测并可肉眼判定结果的可视化RT-LAMP方法,其操作简便、无需昂贵设备,适用于ALV的快速检测。
- 刘业兵张磊孙跃辉毛娅卿李俊平宁宜宝
- 关键词：禽白血病病毒
- 山羊关节炎脑炎病毒分子检测技术研究
- 由山羊关节炎脑炎病毒/(CAEV/)引发的山羊关节炎脑炎/(CAE/)是世界养羊业中破坏力最强、经济学意义最重要的病毒性传染病。本研究对CAEV89-GB1026株进行了全基因组克隆和序列测定,分析了CAEV的分子特性;...
- 孙跃辉
- 关键词：基因组环介导等温扩增技术免疫印迹酶联免疫吸附试验
- 文献传递
- 食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立被引量：38
- 2012年
- 食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术(LAMP),分别对7种不同血清型沙门氏菌和4种非沙门氏菌进行扩增,同时建立沙门氏菌人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活菌计数检测的敏感性.结果表明,该方法仅对沙门氏菌产生特异性扩增,灵敏度高达336,mL-1,食品样品经细菌富集培养后,检测灵敏度高达8.25,g-1.所建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于沙门氏菌污染食品的快速检测.
- 黄金海孙跃辉陈瑞庄世文刘莹王静思
- 关键词：沙门氏菌环介导等温扩增技术
- 不同食品来源酵母分离株的生物学特性比较
- 2009年
- 以7类不同食品来源的14株酵母分离株为试验对象,从形态学观察、生理生化反应、抗性试验进行鉴定,分析了各酵母分离株的生物学特性及其生产应用潜力。将14株酵母菌分别归类为毕赤氏酵母属、类酵母属、丝孢酵母属、丝孢毕赤氏酵母属和接合酵母属等5个属。根据其发酵特性可作为不同食品的工业生产发酵菌种。
- 庄世文黄金海孙跃辉王静思刘莹
- 关键词：酵母菌生物学特性
- 山羊关节炎-脑炎病毒陕西分离株全基因组的克隆和序列分析
- 2011年
- 为了解山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)陕西分离株全基因组的特点及基因演化变化,根据Gen-Bank中登录的CAEV CO株的全基因组序列,设计合成了5对引物,对CAEV陕西株的全基因组进行了PCR扩增,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果显示,CAEV陕西株的基因组全长为9 065nt,获得的GenBank登录号为GU120138,包括两端的长末端重复序列,结构蛋白编码基因gag、pol、env和调节蛋白编码基因tat和rev,以及辅助蛋白编码基因vif。核苷酸序列比对表明,CAEV陕西株和CAEV甘肃株的同源性为99.6%,与CAEV CO株的同源性为92.4%,根据全基因组序列和gag基因序列构建的遗传进化分析结果显示,CAEV陕西分离株属于SRLV B2亚型。
- 黄金海孙跃辉庄世文肖华志张丽霞
- 关键词：山羊关节炎-脑炎病毒基因克隆进化分析
- PRRSV天津分离株Nsp2基因的克隆和遗传进化分析被引量：2
- 2010年
- 从天津市病猪中分离得到3株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为TJ-S1、TJ-S2和TJ-S3。根据GenBank中PRRSV BJ-4株的基因序列设计并合成针对Nsp2基因高变区的引物,RT-PCR扩增目的基因并将其克隆到pGEM-T载体进行测序,并与国内外已发表的毒株序列进行比较。结果表明,3个毒株都是美洲型PRRSV,而且TJ-S1、TJ-S2株的Nsp2基因发生30个氨基酸的不连续缺失;基因系统发育树分析表明,TJ-S1株、TJ-S2株与HuN株、SD-14株的亲缘关系很近,TJ-S3株与CH-1a株的亲缘关系较近。
- 孙跃辉黄金海郭立力杨爱华粱智选刘莹
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因遗传进化分析
