孙妍琳
- 作品数：25 被引量：71H指数：5
- 供职机构：山东大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 短发夹状RNA抑制GCS基因在人乳腺癌细胞的表达及逆转其多药耐药被引量：3
- 2006年
- 目的构建葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的短发夹状RNA(shRNA),观察其对人耐药乳腺癌细胞GCS表达的抑制及多药耐药的逆转作用。方法设计2对GCS基因编码的反向重复序列,中间间隔6个nt,体外合成并克隆至载体pSUPER。转染乳腺癌细胞,Westernblot和免疫细胞化学方法测定GCS表达。Westernblot、比色法检测细胞内caspase-3的表达,流式细胞仪分析细胞凋亡率。四氮唑盐(MTT)法检测半数细胞抑制浓度。结果酶切和DNA测序证实重组质粒构建成功。转染后GCS蛋白含量分别下降80%和82%,GCS表达阳性率降低为18·1%和16·7%。caspase-3表达和活性均显著增强,细胞凋亡率明显增加,细胞对化疗药物耐药性有明显下降。结论shRNA可有效抑制人耐药乳腺癌细胞中GCS表达,并可提高其对多种化疗药物的敏感性。
- 孙妍琳周庚寅孙建国林晓燕李红白艳花张翠娟
- 关键词：短发夹状RNA乳腺癌葡萄糖神经酰胺合成酶凋亡
- 肠道病毒71型微复制子的构建
- 2015年
- 目的 构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系,研究微复制子的复制及表达情况。方法聚合酶链式反应扩增绿色荧光蛋白（EGFP）,利用特定酶切位点及连接酶,将目的基因片段连接至p MD19-T载体,分别构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系。荧光显微镜下观察微复制子表达情况,实时荧光定量PCR观察微复制子复制情况。结果 EV71非结构蛋白微复制子及EV71 3C蛋白酶微复制子表达后,均可观察到特异性绿色荧光,荧光强度有明显差异;转染后12~72 h取样所测RNA含量几乎不变。结论 非结构蛋白全长及3C蛋白酶启动微复制子转录强度不同,所构建微复制子不具备复制功能,提示结构蛋白编码区对病毒RNA复制有重要意义。
- 马英伟孙乐乐李静乔乔庄志超赵丽于学杰王志玉温红玲孙妍琳
- 关键词：肠道病毒71型报告基因非结构蛋白
- 葡萄糖糖基神经酰胺合成酶特异性小干扰RNA表达载体的构建及其逆转乳腺癌细胞耐药的研究被引量：1
- 2005年
- 目的 构建葡萄糖糖基神经酰胺合成酶(GCS)小干扰RNA表达载体,观察其对乳腺癌耐药细胞(MCF- 7 /ADR)GCS基因表达和耐药性的影响。方法 设计合成2对GCS基因的特异性siRNA,分别定向克隆入真核表达载体pSUPER,构建pSUPER -GCS1和pSUPER -GCS2重组质粒,脂质体LipofectAMINE2000介导转染MCF -7 /ADR细胞,空载体pSUPER转染作为对照,逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)分析GCSmRNA的表达,流式细胞仪观察GCS蛋白的表达,四氮唑盐法检测阿霉素对MCF -7 /ADR细胞的半数抑制浓度(IC50 ),流式细胞技术检测细胞凋亡率的改变。结果 酶切分析和测序证实成功构建了针对GCS的siRNA表达载体pSUPER -GCS1和pSUPER GCS2。两对重组质粒均可特异性抑制GCS基因表达,转染后48hGCSmRNA抑制率分别为89 .4%、88. 5%,GCS蛋白含量分别下降为8 .3%±1 .0%, 9. 2%±0 .8%,四氮唑盐法显示重组质粒对阿霉素耐药性相对逆转率分别为93. 7%、91. 6%,明显提高了乳腺癌细胞对于阿霉素的药物敏感性,流式细胞仪结果表明细胞凋亡率增加为15. 38±1 .16, 13. 92±1 .73,而空载体对照组无以上作用。结论 GCS特异性siRNA表达载体构建成功,且有效抑制了GCS基因表达,并通过诱导耐药细胞凋亡率增加,逆转乳腺癌细胞多药耐药。
- 孙妍琳周庚寅李锴男李文通宋现让高鹏
- 关键词：逆转特异性小干扰RNA合成酶神经酰胺
- 人乳腺癌细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶基因的表达和意义被引量：3
- 2005年
- 目的探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramidesynthase,GCS)基因在人乳腺癌细胞的表达及意义。方法体外培养人耐阿霉素乳腺癌细胞MCF7/ADR和人敏感乳腺癌细胞MCF7,MTT法检测MCF7/ADR细胞耐药倍数,RT PCR法检测两种细胞GCSmRNA的表达,免疫细胞化学法检测GCS蛋白表达水平。结果MCF7/ADR细胞耐药倍数为53倍,RT PCR检测结果显示两种细胞均有GCSmRNA表达,且MCF7/ADR细胞GCSmRNA表达水平较MCF7细胞有显著升高(P<0.05),免疫细胞化学结果显示二者GCS蛋白均有表达且表达水平有显著差异(P<0.05)。结论GCS基因在乳腺癌细胞中表达,GCS对于乳腺癌的发生发展具有重要作用,GCS在耐药乳腺癌细胞的高表达证明GCS与肿瘤耐药密切相关,为肿瘤耐药的逆转治疗提供了新的方向。
- 孙妍琳周庚寅李锴男林晓燕高鹏郭成浩侯丽
- 关键词：乳腺肿瘤葡萄糖神经酰胺合成酶基因表达
- Netrin-1在乳腺浸润性导管癌中的表达及与转移的相关性被引量：4
- 2015年
- 目的探讨Netrin-1蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测46例乳腺浸润性导管癌中Netrin-1的表达。结果 46例乳腺浸润性导管癌中30例表达阳性,16例表达阴性。Netrin-1在有淋巴结转移中的阳性率为78.6%(11/14)。Netrin-1的表达与乳腺癌患者的年龄、原发肿瘤的大小、临床分期及雌激素受体、孕激素受体、Her-2和KI-67的表达无关(P均>0.05),但与肿瘤的转移有明显的相关性(P<0.05)。结论乳腺癌患者中存在Netrin-1的异常表达,Netrin-1可能在乳腺癌的发生及转移过程中起到重要作用,Netrin-1可单独作为一个预测乳腺癌转移的指标。
- 高永生王春健蔡淑萍孙菊杰张德贤孙妍琳穆殿斌
- 关键词：乳腺肿瘤腋窝淋巴结
- RNA干扰及其在乳腺癌研究中的应用被引量：5
- 2005年
- 孙妍琳周庚寅
- 关键词：RNA干扰乳腺肿瘤
- PTEN过表达增加人乳腺癌MCF-7细胞对阿霉素的药敏性被引量：2
- 2005年
- 目的 研究野生型PTEN体外瞬时转染对人乳腺癌MCF 7细胞的生长抑制作用和对阿霉素敏感性的增效作用。方法 构建带有人全长PTENcDNA的真核表达载体pEGFP C1 PTEN ,以脂质体介导的方法转染MCF 7细胞,观察对细胞生长的抑制作用。以MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果 PTEN使MCF 7细胞出现皱缩变圆,胞质出芽等凋亡形态学改变;流式细胞仪检测显示转染PTEN 4 8hG0 /G1期细胞增加了14 79% ,并出现凋亡峰(10 6 0 % ) ;PTEN显著降低阿霉素处理后的克隆存活率;PTEN转染组细胞对阿霉素的敏感性显著增加(χ2 =8 5 9,P <0 0 5 ) ,其半数致死剂量(IC50 )仅为空载体对照的1/ 2 (t=4 77,P <0 0 1)。结论 PTEN过表达诱导MCF
- 林晓燕周庚寅宋英华高鹏孙妍琳
- 关键词：人乳腺癌MCF-7细胞PTEN阿霉素药敏性过表达半数致死剂量
- 葡萄籽多酚对人乳腺癌细胞株MCF-7/ADR的体内外耐药逆转作用被引量：8
- 2004年
- 目的:研究葡萄籽多酚(grapeseedpolyphenol熏GSP)对人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF鄄7/ADR的体内外耐药逆转作用。方法:采用MTT法检测1.2mg/L和2.4mg/LGSP对MCF鄄7/ADR的体外耐药逆转倍数。建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,实验分为4组:对照组,GSP组,阿霉素穴adriamycin熏ADR雪组和ADR+GSP组,观察GSP对肿瘤细胞的体内耐药逆转作用;采用流式细胞术测定不同用药组P鄄糖蛋白穴Pgp雪表达变化。结果:体外1.2mg/LGSP即可有效逆转耐药,2.4mg/LGSP的逆转倍数为9.44;体内裸鼠抑瘤实验显示,GSP有一定抑瘤作用,联用ADR可显著抑制肿瘤生长,20mg/kgGSP可有效逆转CF鄄7/ADR细胞的耐药性,抑瘤率为54.64%。流式细胞术结果显示,联用GSP与ADR组肿瘤细胞Pgp表达明显低于单独使用ADR组。结论:GSP能在体内外逆转MCF鄄7/ADR细胞的耐药性,此作用可能是通过抑制Pgp表达实现的。
- 张翠娟周庚寅李丽喻芳孙妍琳马超
- 关键词：MCF-7细胞株葡萄籽多酚P糖蛋白
- RNA干扰逆转GCS介导的乳腺癌多药耐药的体内外研究
- 背景：多药耐药/(multidrug resistance，MDR/)是指肿瘤对未接触过的、结构不同、靶位各异的多种抗肿瘤药物也具有交叉耐药性。它是恶性肿瘤化疗治疗失败的主要原因。MDR产生的机制常同时存在，但以一种为主...
- 孙妍琳
- 关键词：RNA干扰乳腺肿瘤
- 文献传递
- 肝癌靶向性T细胞活化融合基因scFv-CD_(3ζ)的构建与表达
- 2004年
- 目的 :构建抗肝癌单链抗体融合CD3 ζ真核表达载体。 方法 :应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcDNA3 ,在 5′端及 3′端分别引入相应酶切位点 ;用RT PCR法从正常外周血人T细胞扩增出CD3 ζ的胞内区、跨膜区基因 ,然后将其克隆于scFv的下游 ,并在5′端及 3′端引入相应的酶切位点。以脂质体转染法将pcDNA3 scFv CD3 ζ转入T细胞 ,采用免疫细胞化学的方法 ,利用抗CD3 ζ的单克隆抗体检测转染前后T细胞中CD3 ζ的表达。 结果 :二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv的cDNA片段为 73 5bp ,与已知的序列相符 ;CD3 ζ的胞内区、跨膜区的cDNA片段为 2 94bp ,与GeneBank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。转染前后T细胞中CD3 ζ染色强度显著增强。 结论 :完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及CD3 ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcDNA3 scFv CD3 ζ的构建 。
- 李锴男刘彦仿孙妍琳付勇赵君高娟杨守京
- 关键词：T淋巴细胞
