夏玉洁
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南昌大学生命科学与食品工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省重点科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学经济管理更多>>
- 鲫鱼PKZ Zα结构域与d(GC)、d(TA)重组质粒的结合被引量：1
- 2009年
- Zα是能够特异性识别并结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白结构域,首先在人ADAR1中鉴定,随后又在ZBP-1(DLM-1)和E3L等蛋白质中发现了该结构域.鲫鱼PKZ是首次报道的具有Zα结构域的鱼类eIF2α激酶.为深入了解鲫鱼PKZZα的功能,原核表达并亲和层析纯化了3种多肽,即野生型PZα(Zα1Zα2)、替换型P(Zα1)2(Zα1Zα1)和点突变型(PZαK34A、PZαS35A、PZαR39A、PZαP57A).同时,构建了含有d(GC)6、d(GC)13、d(TA)13特殊插入序列的3种重组质粒,用于体外模拟Z-DNA.凝胶阻滞实验分析了3种多肽分别与重组质粒的亲和性.结果表明,PZα和P(Zα1)2能够与d(GC)重组质粒结合,并且随着多肽含量的增加,阻滞效应越明显.与野生型PZα相比,替换型P(Zα1)2结合d(GC)重组质粒的能力更强.PZα和P(Zα1)2还能微弱地与d(TA)13重组质粒结合.点突变型多肽都不能与重组质粒结合,暗示鲫鱼PKZZα结构域中这4个氨基酸残基在结合核酸分子的过程中非常关键.该文结果有利于进一步揭示鱼类PKZZα结构域与Z-DNA结合的分子机理.
- 杨攀吴初新李琴夏玉洁胡成钰
- 关键词：鲫鱼重组质粒
- Poly d(GC)在负超螺旋下形成的Z-DNA被引量：1
- 2009年
- 为建立一个生理状态下的左旋DNA(Z-DNA)模型,本文以pMD18-T质粒为母本质粒,将含有d(GC)_6、d(GC)_8、d(GC)_(10)、d(GC)_(13)等poly d(GC)片段的特殊序列插入到pMD18-T质粒中,构建了poly d(GC)重组质粒。这些poly d(GC)重组质粒处于负超螺旋状态。甲基化抑制实验证实,这些插入到质粒中的poly d(GC)能够形成潜在的Z-DNA构象。同时,为进一步验证poly d(GC)重复的长度与形成Z-DNA效率的关系,原核表达并亲和层析纯化了鲫鱼PKZZα多肽(P★)。凝胶阻滞实验分析了d(GC)_6、d(GC)_8、d(GC)_(10)、d(GC)_(13)4种重组质粒与P_(Zα)的亲和性。结果显示,P_(Zα)对这4种重组质粒的迁移都能产生阻滞效应,并且随着GC的增多,阻滞效应越明显。说明d(GC)越多,poly d(GC)形成Z-DNA的能力越强。
- 夏玉洁吴初新马梅生胡成钰
- 关键词：POLYZ-DNA
- 草鱼穿孔素等基因的克隆、表达特性及功能分析
- 穿孔素,又称成孔蛋白(pore forming protein,PFP),是一种由激活的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)所产生、具有很强溶胞活性的糖蛋白。穿孔素的溶细胞作用是机体杀伤病毒和其他微生物感染...
- 夏玉洁
- 关键词：草鱼穿孔素基因克隆适应性进化
- 文献传递
- 体外表达鲫鱼PKR-like(PKZ)Zα多肽与d(GC)、d(TA)重组质粒亲和性分析
- 为分析鲫鱼PKR-like Zα结构域与d（GC）、d（TA）重组质粒的亲和性以及了解Zα结构域中参与核酸结合的关键氨基酸残基。本文体外表达了3种多肽,分别为野生P（Zα1Zα2）、替换型P（Zα1Zα1）和4个点突变体...
- 杨攀吴初新李琴夏玉洁胡成钰
- 关键词：鲫鱼
- 文献传递
- 草鱼穿孔素C端溶细胞活性分析被引量：1
- 2010年
- 穿孔素的溶细胞作用是机体杀伤病毒和其他微生物感染细胞以及肿瘤细胞的一种效应机制。穿孔素在鱼类非特异性免疫中起重要作用。为了解鱼类穿孔素的功能,根据穿孔素基因序列特征,在已构建的草鱼肝肾cDNA文库中克隆了草鱼穿孔素基因C端包含1个完整蛋白激酶C保守结构域(C2)的cDNA。将该cDNA与表达载体pET32a连接并转化表达菌DE3,诱导表达。His-Bind亲和柱纯化获得了草鱼穿孔素C端表达多肽(PFP-C)。将PFP-C与兔红细胞共育,结果表明:PFP-C具有溶血功能,且在pH7.5时活性最大,其溶血活性对Ca2+有明显的依赖性。
- 夏玉洁吴初新胡成钰
- 关键词：穿孔素C2草鱼
