周艳荣
- 作品数：66 被引量：146H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 连续3步缺口修复技术构建牛αS1酪蛋白-人溶菌酶杂合基因座
- 2013年
- 目的:构建一个牛αS1酪蛋白调控序列指导人溶菌酶(hLYZ)基因组序列的杂合基因座。方法:采用本实验室发明的连续3步缺口修复技术。将6个无痕连接的同源臂插入以pBR322为载体的骨架中,构成能进行3次连续基因抓捕的载体,利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术,分别抓捕牛αS1酪蛋白3'端调控序列(9 kb)、hLYZ基因座序列(5 kb)、牛αS1酪蛋白5'端调控序列(20 kb),使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上,形成牛αS1酪蛋白-hLYZ杂合基因座。结果:实验经过PCR扩增、限制性内切酶酶切验证和序列测定,验证了hLYZ的基因组序列对牛αS1酪蛋白编码基因组序列的精确置换。结论:这种修复技术为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了可行的思路及方法。
- 郑芸芸周艳荣吴晓洁林艳丽熊福银李力陈红星
- 关键词：人溶菌酶
- 高效液相色谱法考察新芋螺毒素SO3的化学稳定性被引量：1
- 2002年
- 采用高效液相色谱法 ,对SO3的干粉和盐水制剂在不同温度下的化学稳定性作了比较。结果显示SO3纯品在 - 2 0℃以下更稳定 ,盐水制剂的稳定性优于干粉制剂。
- 周艳荣戴秋云刘凤云黄培堂
- 关键词：高效液相色谱法化学稳定性
- 猪血清白蛋白基因的克隆及其5′端调控序列功能分析被引量：5
- 2005年
- 目的:克隆猪血清白蛋白全基因并对其5′端调控序列的转录功能进行分析。方法:以GenBank公布的猪血清白蛋白基因启动子序列和cDNA序列为依据,设计并合成D123/D61和D81/D84两对引物,同时从猪肝中提取猪基因组DNA,并以此为模板PCR扩增猪血清白蛋白部分基因片段作为噬菌斑原位杂交探针,对猪λ噬菌体文库进行筛选。经过4轮杂交和PCR交替筛选,从噬菌体文库中共获得4个基因片段,并对这4个片段进行测序、拼接。以绿色荧光蛋白作为报告基因,对猪血清白蛋白启动子在HepG2细胞中的表达进行研究。结果:共获得包括调控区在内的猪血清白蛋白全基因序列约35kb(GenBank登录号:AY663543)。将其与人的血清白蛋白基因相比对,发现基因的同源性为53.8%,其中编码区同源性为82.3%。荧光显微镜下可见EGFP在HepG2细胞中的表达。结论:获得猪血清白蛋白全基因。猪血清白蛋白基因启动子在HepG2有转录起始功能。此项工作一方面为利用基因打靶从猪体内制备生产人血清白蛋白的研究奠定了良好基础,另一方面为利用白蛋白启动子研究外源基因在肝组织的特异性表达及进行基因治疗提供了资料。
- 孙世惠周艳荣卢建申邓继先
- 关键词：血清白蛋白基因文库聚合酶链反应绿色荧光蛋白
- ω-芋螺毒素及其衍生物的合成被引量：5
- 2003年
- 研究ω 芋螺毒素及衍生物的结构与生物活性的关系。采用固相多肽合成法合成了ω 芋螺毒素及其衍生物。结果显示 ,ω 芋螺毒素衍生物结构稳定性和生物活性均比ω 芋螺毒素差。
- 周艳荣刘凤云戴秋云
- 关键词：衍生物固相多肽合成活性
- 人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用被引量：1
- 2008年
- 目的:研究人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用,并初步确定作用区域。方法:应用免疫共沉淀、GSTpull-down实验验证人Nanog与NAC1的相互作用。结果:人Nanog与NAC1能够相互作用,且NAC1的BTB/POZ结构域对于二者相互作用是必需的。结论:人Nanog和NAC1在体内、外均能形成复合物,二者的相互作用对于人胚胎干细胞的自我更新及肿瘤的发生可能具有重要的作用。
- 韩正滨林艳丽熊福银田利源周艳荣邓继先陈红星
- 关键词：NANOGGST免疫共沉淀
- 表达人尿激酶原突变体的重组山羊乳腺特异性表达慢病毒载体的构建被引量：3
- 2009年
- 目的:构建山羊乳腺特异性表达尿激酶原突变体的重组慢病毒载体,证明其表达的有效性。方法:将劳氏肉瘤病毒增强子/启动子、复制缺陷型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的5'端长重复序列(LTR)、HIV-1ψ包装信号、HIV Rev反应元件、山羊β-酪蛋白调控序列、尿激酶原M13cDNA、ΔU3/3'LTR、牛生长激素(BGH)基因poly(A)依次连接,构建乳腺特异性表达的慢病毒载体,通过体外转染人乳腺癌细胞系MCF-7、中国仓鼠卵巢细胞及泌乳山羊乳腺注射证明其表达有效性。结果:酶切鉴定证实山羊乳腺特异性表达载体构建正确;将该载体转染细胞,采用溶圈法和Western印迹检测证实了其表达的有效性;慢病毒载体注射到泌乳山羊的乳腺,在乳汁中也检测到了尿激酶原的表达。结论:为在转基因动物乳腺中表达尿激酶原突变体奠定了基础。
- 于永生罗晓彤吴晓洁周艳荣陈红星邓继先
- 关键词：慢病毒载体
- 连续3步缺口修复构建小鼠乳清酸蛋白-人溶菌酶杂合基因座
- 2012年
- 目的:构建一个利用小鼠乳清酸蛋白(mWAP)基因座完整的上下游调控序列指导人溶菌酶(hLYZ)基因组序列在乳腺内特异性高效表达的mWAP-hLYZ杂合基因座,实现人溶菌酶的高效表达。方法:采用连续3步缺口修复的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先合成的6个同源臂序列,构成能够连续进行3次缺口修复的基因抓捕载体。然后在大肠杆菌内利用λ噬菌体Red同源重组系统介导的同源重组方法:第一步,从含mWAP基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆8 kb的mWAP基因3'端完整侧翼序列到抓捕载体上;第二步,从含hLYZ基因的BAC上亚克隆5 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAA)的hLYZ基因组序列;第三步,从mWAP BAC上亚克隆9kb的mWAP基因5'端完整侧翼序列,并使上述3个片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起。结果:构建了全长约22 kb的mWAP-hLYZ杂合基因座,经PCR扩增、限制性内切酶酶切和序列测定验证,构建的杂合基因座达到原mWAP基因座中mWAP基因组编码序列从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAA)完全被hLYZ基因组序列精确置换的目的。结论:通过连续3步缺口修复构建杂合mWAP-hLYZ基因座乳腺表达载体,为乳腺生物反应器高效表达人溶菌酶提供了可行的思路和方法。
- 邵振鲁吴晓洁林艳丽熊福银周艳荣郑芸芸李金钢陈红星
- 关键词：细菌人工染色体乳清酸蛋白人溶菌酶
- 连续3步缺口修复构建人β肌动蛋白-人凝血因子Ⅶ杂合基因座
- 2012年
- 目的:为了获得稳定高效表达凝血因子Ⅶ的哺乳动物细胞株,构建一个利用人β肌动蛋白(hACTB)基因座完整的上下游调控序列指导人凝血因子Ⅶ(hFⅦ)基因组序列在人胚胎肾细胞特异性高效表达的hACTB-hFⅦ杂合基因座。方法:采用3步连续缺口修复的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先合成的6个同源臂,构成能进行3次连续基因抓捕的载体。然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术:第一步,从含hACTB基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆10 kb的hACTB基因3′端完整侧翼序列;第二步,从hFⅦBAC上亚克隆13 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TAG)的hFⅦ基因组序列;第三步,从hACTB BAC上亚克隆20kb的hACTB基因5′端完整侧翼序列,并使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上,形成全长约50 kb的hACTB-hFⅦ杂合基因座。结果:经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,构建的杂合基因座达到了原来hACTB基因座中hACTB基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被hFⅦ从起始密码子到终止密码子的基因组序列基因组序列精确置换的目的。结论:连续3步缺口修复构建杂合基因座细胞表达载体的技术,将为细胞高效表达大载体的制备提供一种全新的思路和方法。
- 张伟张伟林艳丽周艳荣左珊珊吴晓洁熊福银刘芳尤平
- 关键词：细菌人工染色体
- 长链非编码RNA Dleu2对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响被引量：5
- 2016年
- 目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)Dleu2对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:利用高通量Lnc RNA芯片技术检测10例宫颈癌组织及对应的癌旁组织,筛选得到一批表达水平具有显著差异的Lnc RNA,进一步针对可能具有生物学功能的Lnc RNA-Dleu2,利用q-PCR验证其在癌组织样本中的相对低表达。再通过在细胞内过表达Lnc RNA-Dleu2研究其对宫颈癌Hela和Caski细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。结果:q-PCR结果验证了Lnc RNA芯片筛选的结果,即相较于癌旁组织和正常宫颈上皮细胞系,Lnc RNA-Dleu2在宫颈癌组织和细胞中均低表达。CCK8和克隆形成实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞增殖能力(P<0.01);细胞划痕实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞增殖和迁移能力;Matrigel细胞侵袭实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论:Lnc RNA-Dleu2在宫颈癌中相对低表达,提高Dleu2表达水平能够抑制宫颈癌细胞系Hela和Caski的增殖、迁移和侵袭能力。
- 张欢李立安刘芳张唯一魏云芝吴晓洁郗永义周艳荣陈红星林艳丽
- 关键词：宫颈癌长链非编码RNA
- 肽合成中多对二硫键的形成策略及分析方法被引量：6
- 2002年
- 二硫键的正确配对是富含二硫键多肽合成的关键,本文综述了含两对二硫键以上的多肽二硫键的形成策略、优化方法、以及二硫键配对方式的测定方法。
- 周艳荣戴秋云
- 关键词：分析方法
