周凤娟
- 作品数：25 被引量：66H指数：5
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 庆大霉素诱导LLC-PK1细胞凋亡与p27^(Kip1)表达关系的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用 ;研究细胞周期调节蛋白 p2 7Kip1蛋白和mRNA表达在凋亡过程中的变化 ;并探讨细胞凋亡与p2 7Kip1之间的关系。方法 对体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株 (LLC PK1细胞 )予以不同浓度的庆大霉素溶液分别作用 2 4～ 96h ,以MTT法测定庆大霉素对LLC PK1细胞增殖的抑制率 ,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡条带 ,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞增殖动力学 ,WesternBlot法检测细胞内p2 7Kip1的蛋白表达 ,RT PCR法检测细胞p2 7Kip1mRNA表达的变化。结果 庆大霉素对LLC PK1细胞增殖有抑制作用 ,具诱导LLC PK1细胞凋亡的作用 ,凋亡率呈药物浓度和作用时间依赖性 ;庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。p2 7Kip1蛋白在细胞内的表达随着干预的庆大霉素浓度增加而逐渐上调 ,蛋白水平与凋亡率之间呈正相关 ,其mRNA表达趋势与其蛋白表达一致。结论 庆大霉素诱导的LLC PK1细胞凋亡与细胞周期蛋白p2 7Kip1表达密切相关。
- 傅鹏崔若兰袁伟杰周凤娟梅小斌戴建新孙树汉
- 关键词：P27^KIP1细胞凋亡MTT法
- 卡介菌基因组DNA制备工艺研究被引量：1
- 2005年
- 目的 摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨ｒｉｎ ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法 采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子交换和凝胶过滤层析 ,去除残余菌体蛋白和多糖 ,精制DNA ,并进行质量检测。结果 所制备的BCG -DNA片段大小介于 2 0 0～ 2 5 0bp之间 ,纯度大于 95 % ,蛋白含量占 0 . 1% ,多糖残留占 3 .5 %。结论此方法制备的BCG- DNA纯度较高 ,且无有机溶剂残留 ,适用于BCG DNA制备。
- 王静胡振林周凤娟凌亦凌孙树汉
- 关键词：BCG卡介菌多糖结核杆菌酶消化
- 卡介菌基因组 DNA和卡介菌多糖核酸免疫调控活性的比较(英文)被引量：4
- 2004年
- 目的 :比较研究卡介菌 (Mycobacterium bovis Bacillus Calm ette- Guérin,BCG)基因组 DNA(BCG- DNA)和卡介菌多糖核酸 (BCG- PSN)的免疫调控活性。 方法 :制备高纯度的 BCG- DNA,小鼠脾细胞 (splenocyte)和人外周血单个核细胞 (pe-ripheral blood m ononuclear cell,PBMC)分别与 BCG- DNA和 BCG- PSN共同培养 72 h,采用 EL ISA方法检测细胞培养上清中 IFN -γ的水平。结果 :所制备的 BCG- DNA纯度较高 ,DNA含量达 95 .3%。琼脂糖电泳显示 :BCG- DNA片断大小集中于2 0 0～ 2 5 0 bp。EL ISA结果表明 BCG- DNA与 BCG- PSN均可显著激活小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞 ,有效诱导 IFN-γ的产生 (P<0 .0 1 )。当浓度达 1 0μg/ m l以上时 ,BCG- DNA免疫调控作用优于 BCG- PSN(P<0 .0 1 )。 结论 :BCG- DNA可显著诱导 Th1型细胞因子 IFN-γ的产生 。
- 王静胡振林周凤娟万斌何晓文凌亦凌孙树汉
- 关键词：卡介菌基因组DNA多糖核酸干扰素Γ
- 应用酵母单杂交系统筛选CpG免疫激活序列的特异性结合蛋白被引量：9
- 2001年
- 目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。 方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性克隆以电泳迁移率变动分析 (EMSA )进行验证。结果 :已获得 4个双阳性克隆 ,其中两个编码功能未知的蛋白 ,而另外两个均属抗体轻链 ,分别与抗 DNA抗体和抗乙肝表面抗原抗体 (HBs Ab)高度同源 ;EMSA发现 HBs Ab可在偏酸 p H条件下 (p H6 .4和 5 .8时 )特异性地与含 ISS的寡核苷酸 (Cp G- ODN)结合。 结论 :HBs Ab可与
- 胡振林孙树汉戴建新周凤娟
- 关键词：免疫球蛋白
- 钩端螺旋体膜表面蛋白LipL41基因的克隆、序列分析及表达被引量：2
- 2002年
- 目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆至原核表达载体pGEX－5T进行原核表达，Western印迹分析其免疫原性。珐票：获得长 1068 hp的片段，DNA序列分析表明该菌株的LipL41基因与文献报道具有很高的同源性（95．0％～99．4％），在大肠杆菌中获得了表达，并与抗钩端螺旋体血清反应。结论：该抗原为致病性钩端螺旋体所具有的保守性抗原成分，可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。
- 寇志华孙树汉郭嬴军陈祖欢施柯胡振林张洪英周凤娟
- 关键词：免疫原性钩端螺旋体外膜蛋白原核表达基因克隆
- 乙肝DNA疫苗的构建及表达HBsAg P815细胞的筛选及鉴定
- 乙型肝炎(乙肝)是全球特别是发展中国家所面临的重要健康问题,我国是高发区,约有50％-70％的人群有过乙肝病毒的感染(未加免疫的人群),8％-10％为乙肝病毒表面抗原
- 周凤娟戴建新胡振林孙树汉
- 文献传递
- 绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的克隆及高效表达被引量：3
- 1997年
- 目的：在大肠杆菌中克隆及高效表达绿色荧光蛋白基因（ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ）。方法：ＰＣＲ法克隆ＧＦＰ－Ｓ６５ＴｃＤＮＡ并改造其两端的限制性内切酶位点，构建重组原核表达载体ｐＲＳＥＴ－ＧＦＰＳ６５Ｔ。结果：在ＩＰＴＧ诱导条件下，ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ的表达量占细菌总蛋白量的１５％以上。细菌培养物及其超声上清在长波紫外线的照射下，发出明亮的绿色荧光。结论：ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ可以作为原核细胞中的报告基因，用标准的长波紫外线即可检测其表达。
- 陆惠萍周凤娟孙树汉
- 关键词：基因表达大肠杆菌绿色荧光蛋白克隆
- CpG-寡核苷酸对免疫细胞基因表达的影响被引量：3
- 2003年
- 目的:研究CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)对免疫细胞基因表达的影响。方法:用Cy3和Cy5两种荧光分子通过逆转录反应将CpG-ODN刺激前后的单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞的mRNA分别标记成探针,混合后与小鼠基因表达谱芯片杂交,通过扫描、计算机分析,寻找经CpG-ODN刺激后差异表达的基因。结果:CpG-ODN刺激RAW264.7细胞6 h后,2次芯片杂交筛选出重复差异表达的基因119条,其中74条上调,45条下调;这些基因涉及细胞周期、免疫调控、脂肪代谢、泡沫细胞形成、信号转导等过程。结论:CpG-ODN可广泛调控巨噬细胞内多种基因的表达,对相关基因群的进一步研究有助于深入了解CpG-ODN的作用机制。
- 胡振林万斌周凤娟王静王庆敏孙树汉
- 关键词：免疫细胞基因表达巨噬细胞表达谱芯片
- 绿色荧光蛋白作报告基因的研究
- 1997年
- 海洋无脊椎动物的生物发光现象源于一类绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFPs)。自1992年Aequorea GFP cDNA被克隆后,GFP作为一个新的报告基因已取得了广泛的应用。 GFP-S65T是野生型GFP的Ser65→Thr的一个突变体。
- 陆惠萍周凤娟孙树汉
- 关键词：绿色荧光蛋白报告基因分子遗传学海洋无脊椎动物真核表达载体长波紫外线照射
- 稳定表达HBsAg的P815细胞株的建立及鉴定被引量：3
- 2002年
- 目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了重组质粒pcDNA3－HBsAg（S），转染细胞及其培养上清中均可检测到HBsAg（S）的存在，PCR扩增也证实HBSAg（S）基因已稳定整合于p815细胞的染色体中。结论：获得了稳定表达HBsAg的P815细胞株，为今后在小鼠体内检测乙肝DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础。
- 周凤娟戴建新胡振林孙树汉
- 关键词：乙肝DNA疫苗PCR方法乙型肝炎表面抗原ADR亚型
