周军民
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中山大学肿瘤防治中心（肿瘤医院、肿瘤研究所）更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 高密度脂蛋白对ERK1/2表达及其磷酸化的影响
- 2003年
- 丝裂素活化蛋白激酶是信号从细胞表面转导到细胞内部的重要传递者 ,通过磷酸化活化转录因子而调控特定基因的表达。本实验观察了人高密度脂蛋白对U937细胞信号转导分子ERK1 2表达水平及其磷酸化的影响。人单核—巨噬细胞株U937用含 10 %胎牛血清的RPMI 16 4 0培养基 ,在 5 %CO2 、37℃培养箱中培养。待细胞长至 5× 10 5时 ,换无血清的RPMI 16 4 0培养基 5mL。高密度脂蛋白制备方法 ,取新鲜抗凝血浆 ,用超速离心机进行密度梯度离心 ,收集密度 1.0 6 3～ 1.2 10g cm3组分 ,PBS透析后冷藏备用。SDS PAGE采用 12 %的分离胶 ,浓缩胶的电流为 10mA ,分离胶的电流为 15mA ,每孔加约 5 0 μg的样本。在转膜前 ,每一批样本用考马斯亮蓝R2 5 0染色以检测提取细胞蛋白情况。转膜采用 10 0mA的电流 ,时间为 2h ,膜为聚偏氟乙烯膜 ,用前用甲醇浸泡 10min左右 ,封闭液为Pierce公司产品 ,漂洗液为PBS +5 0 %的吐温 ,一抗稀释度为 1∶2 0 0 ,二抗稀释度为 1∶10 0 0 ,温育时间均为室温 1h ,显色液为Pierce公司产品。其余步骤按常规操作。Westernblot实验结果显示 ,高密度脂蛋白刺激ERK1 2表达 ,并诱导ERK1 2磷酸化水平增加。ERK1 2磷酸化诱导过氧化体增殖物激活型受体γ的磷酸化 。
- 易光辉王燕周军民莫中成杨永宗
- 关键词：高密度脂蛋白ERK1/2磷酸化分子生物学免疫印迹技术丝裂素活化蛋白激酶
