吴英
- 作品数：4 被引量：9H指数：1
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- 成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养及鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的:建立成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养及鉴定的方法。方法:V型胶原酶溶液灌注消化成年大鼠胰腺组织,并经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织,培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,而后加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)继续培养,7天可形成单层细胞,用0.25%胰酶-EDTA消化并传代培养。取第2代细胞利用免疫荧光染色和RT-PCR方法检测CK19、Pdx-1、Nestin、insulin及glucagon的表达。结果:经胶原酶灌注消化胰腺导管上皮,再经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织,可使胰腺导管细胞得到较好的纯化。免疫荧光结果示:胰腺导管细胞CK19、Pdx-1和Nestin染色呈阳性,阳性细胞率分别为(88.6±6.2)%、(84.6±8.6)%和(79.3±10.5)%,而insulin及glucagon染色为阴性。RT-PCR结果显示该细胞表达CK19、Pdx-1和Nestin基因。结论:该方法可较好的分离出胰腺导管细胞,经鉴定该法培养所获细胞具有胰腺干细胞的特性。
- 陈海燕张强吴英柴怡李娟杨涛
- 关键词：胰腺干细胞细胞培养
- 大鼠胰腺导管上皮细胞体外诱导的研究被引量：1
- 2010年
- 目的:观察大鼠胰腺导管上皮经四步法诱导分化为胰岛样细胞团后移植治疗糖尿病的效果。方法:采用Ⅴ型胶原酶胆管内灌注消化法,经Ficoll不连续密度梯度离心后分别获得导管上皮细胞和新鲜胰岛。导管上皮细胞经原代培养及传代后取2～6代细胞开始进行四步18天的诱导,分化为胰岛样细胞团,行免疫荧光鉴定。将链脲佐菌素造模成功的18只SD大鼠采用完全随机法均分成3组,空白对照组、新鲜胰岛组、胰岛样细胞团组进行左肾包膜下移植。分别给予RMPI1640、新鲜胰岛和胰岛样细胞团,移植后隔日固定时间监测血糖。结果:经免疫荧光鉴定,分离纯化的胰腺导管细胞具有干细胞特性,诱导后的胰岛样细胞团胰岛素、胰高血糖素染色均为阳性。移植后空白对照组血糖维持在高血糖范围。新鲜胰岛组移植后血糖逐步下降至正常水平,并在2周之内基本稳定在正常范围内但略有上升。胰岛样细胞团组移植后前2天血糖不降反升,之后有所下降但始终未能降至正常范围,然后又逐渐上升。结论:胰腺导管上皮细胞经该方案诱导后分化为胰岛样细胞团,使糖尿病大鼠血糖有一定程度的下降,但下降幅度及维持时间不能令人满意,可能与移植量不够及诱导的胰岛样细胞团功能不良有关。
- 于晓竹吴英李娟陈恒杨涛
- 关键词：胰腺干细胞糖尿病
- 成人胰腺导管干细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定
- 2009年
- 目的:建立人胰腺导管干细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定的方法。方法:胶原酶分次消化剪切的人胰腺组织,经过Ficoll密度梯度离心后去除胰岛组织,培养于含10%胎牛血清的CMRL1066培养液中,7-10天可行成单层细胞,用0.25%胰酶-EDTA消化并传代培养。取2-3代细胞利用免疫荧光染色和RT-PCR方法检测CK19、Pdx-1、Nestin、Insulin及Glucagon的表达。结果:经过胶原酶消化、Ficoll密度梯度离心及后续的培养,去除了胰岛组织及外分泌腺,可获得较纯化的鹅卵石样的胰腺导管细胞。免疫荧光结果示:胰腺导管细胞CK19、Pdx-1和Nestin染色呈阳性,阳性细胞率分别为(87.5±6.2)%、(77.5±8.6)%和(50.9±9.5)%,而Insulin染色为阴性。RT-PCR结果显示该细胞表达CK19、Pdx-1和Nestin基因,而未观察到Insulin及Glucagon基因的表达。结论:该方法可较好的分离纯化出人胰腺导管细胞,经鉴定获得细胞具有胰腺干细胞的特性。
- 李娟陈海燕吴英张强于小竹王云杨涛
- 关键词：干细胞胰腺细胞培养
- 应用INGAP多肽体外分步诱导胰岛新生研究被引量：1
- 2009年
- 目的应用INGAP多肽在体外建立新的分步诱导分化体系诱导胰岛新生。方法分离纯化SD大鼠的胰腺导管干细胞。并体外扩增培养,取2～6代细胞进行分步诱导分化,于分化末期添加INGAP多肽,待诱导结束后收获新生类胰岛样细胞团(ILCs)分别行免疫荧光和RT-PCR检测,并通过葡萄糖刺激的胰岛素释放试验(GSIS)评价ILCs的胰岛素分泌能力。结果 (1)分离纯化的胰腺导管干细胞经过四步诱导后最终可形成立体结构的ILCs,其insulin和glucagon染色均为阳性,RT-PCR检测该ILCs也有insulin和glucagon基因的表达。(2)GSIS结果:新生ILCs和新分离胰岛的高糖组胰岛素释放量均显著高于低糖组(P<0.01);新生ILCs的胰岛素刺激指数接近新分离胰岛(P>0.01)。结论通过建立新的包含INGAP多肽的体外分步诱导分化体系,能够获得具有立体结构和一定胰岛素分泌能力的立体ILCs,为获取胰岛移植所需的β细胞提供了更有效的方法。
- 陈海燕李娟张强吴英周红文张克勤郭锡熔陈家伟韩晓张辰宇陈琪杨涛
- 关键词：INGAP胰岛细胞分化胰岛移植
