吴晓明
- 作品数：16 被引量：90H指数：6
- 供职机构：华中科技大学公共卫生学院环境与健康教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区卫生厅重点科研课题湖北省教育厅优秀中青年人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体的构建及功能研究被引量：15
- 2003年
- 目的 构建核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体 ,初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及药物敏感性的影响。方法 通过RT PCR技术获取XPDcDNA (2～ 6 6 7bp)片段并反向插入真核 7表达载体反义载体pcDNA3 1,采用脂质体法将构建的载体质粒转染肺癌细胞株A5 4 9,经G4 18筛选 ,采用抗肿瘤药物阿霉素、顺铂对细胞进行染毒干预 ,干预结果采用SCGE和MTT综合判定。结果 转染细胞XPDmRNA表达受到抑制。单细胞凝胶电泳显示转染细胞DNA损伤修复能力降低。MTT法显示转染细胞药物敏感性增高。结论 XPD反义RNA能降低肺癌细胞DNA损伤修复能力 。
- 蒋易周李承吴晓明周宜开雷于生任恕
- 关键词：核苷酸切除修复XPD基因药物敏感性
- 酶联免疫法检测MTHFRC677T位点基因多态性
- 2006年
- 目的建立一种基于错配杂交及酶联免疫检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的新方法。方法针对多态位点设计两条寡核苷酸探针,分别与野生型及突变型序列互补。将两条地高辛标记的探针分别与含多态位点C677T的PCR扩增产物杂交,然后显色检测,根据两条探针的吸光度值之比确定样品的基因型。结果用本法随机检测了50例DNA样品,结果三种基因型的发光值之比可以严格区分,其中野生型(C/C)15例,杂合型(C/T)28例,突变型(T/T)7例,与参考方法(PCR-RFLP)的检测结果完全一致。结论本方法操作简便、检测快速而且费用低廉,可广泛应用于MTHFR基因突变及多态性检测。
- 姚群峰宁勇吴晓明周宜开
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性酶联免疫法
- 髓过氧化物酶基因多态性与肺癌遗传易感性的研究被引量：16
- 2003年
- 背景与目的:髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)基因启动子区域-463bp处存在G/A多态位点,国外研究表明此位点与肺癌遗传易感性有关,但中国人MPO基因型与肺癌易感性关系尚未见报道,本研究拟对此问题作一探讨。方法:采用病例-对照分子流行病学方法,以PCR-RFLP技术检测98例原发性肺癌和112名健康对照MPO基因型,通过比较不同基因型者的比值比(oddsratio,OR)及其95%可信区间(confidenceinterval,CI)分析基因多态性与中国人肺癌易感性的关系。结果:正常人群G/G、G/A、A/A基因型频率分别为47.3%、42.9%和9.8%,肺癌病例组分别为63.3%、33.7%和3.0%,杂合子G/A在两组人群中分布无显著性差异(P>0.05),但病例组A/A基因型频率显著低于对照组(P<0.025)。携带至少一个等位基因A者患肺癌的风险是基因型为G/G者的52.0%(95%CI0.29～0.93)。在吸烟人群中,等位基因A对肺癌易感性的保护作用有显著性意义(OR=0.41,P<0.025),而在非吸烟人群,这种保护作用无显著性意义(P>0.25)。结论:本研究人群MPO基因多态与肺癌遗传易感性相关,等位基因A对吸烟人群的肺癌易感性有保护作用。
- 吴晓明周宜开任恕郝巧玲
- 关键词：髓过氧化物酶基因多态性肺癌遗传易感性
- 银杏叶浸膏中异鼠李黄素的提取与分离研究
- 银杏叶制剂临床上广泛用于治疗心脑血管疾病,其有效成分为黄酮类和银杏内酯类化合物.银杏黄酮主要是槲皮素、山奈酚和异鼠李黄素的甙类化合物,银杏总黄酮的测定多采用高压液相色谱法(HPLC),将银杏叶提取物水解后测定其主要的三个...
- 吴晓明
- 关键词：银杏黄酮类化合物
- 文献传递
- 肺癌遗传易感性理论与方法学研究
- 我们建立了一种基于错配杂交,采用酶联免疫或化学发光进行检测的基因突变鉴定方法.针对每个多态位点设计两根寡核苷酸探针,两根探针的区别仅在于突变位点处一个碱基,即分别与野生型和突变型DNA片段完全匹配.每个样品分别与两根探针...
- 吴晓明
- 关键词：肺癌遗传易感性细胞色素P4501A1DNA修复核苷酸切除修复苯并(A)芘
- 文献传递
- 核苷酸切除修复基因表达水平与肺癌易感性的关系被引量：7
- 2004年
- [目的 ]探讨核苷酸切除修复基因表达水平与肺癌易感性关系。 [方法 ]采用病例 对照分子流行病学方法 ,以RT PCR技术检测 98例原发性肺癌患者和 112名健康者外周血淋巴细胞核苷酸切除修复基因 (XPB、XPC、XPG、ERCC1)表达水平 ,比较基因表达水平与肺癌易感性的关系。 [结果 ]肺癌病例组 4种基因的表达水平均低于健康对照组 ,其中XPB和XPC表达水平在两组之间有显著性差异 ,吸烟人群中病例与对照组基因表达水平差异大于非吸烟人群与对照组的差异 ,低表达XPB和XPC的人群患肺癌的相对危险度分别是高表达人群的 2 .0 6和 2 .2 7倍。 [结论 ]低表达XPB和XPC的人群肺癌发病风险增高。
- 郝巧玲吴晓明姚群峰周宜开
- 关键词：核苷酸基因表达肺癌易感性
- 错配杂交化学发光法检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性
- 2005年
- 目的建立一种基于错配杂交及化学发光技术的检测亚甲基四氢叶酸还原酶(m ethylenetetrahydrofolate reducatase,MTH-FR)基因多态性的新方法。方法针对多态位点设计两条寡核苷酸探针,分别与野生型及突变型序列互补。将两条探针分别与含多态位点C677T的PCR扩增产物杂交,然后用化学发光法检测,根据两条探针的发光值之比确定样品的基因型。结果用本法随机检测了50例DNA样品,结果3种基因型的发光值之比可以严格区分,其中野生型(C/C)15例,杂合型(C/T)28例,突变型(T/T)7例,与参考方法(PCR-RFLP)的检测结果完全一致。结论本方法操作简便、检测快速而且费用低廉,可广泛应用于MTHFR基因突变及多态性检测。
- 姚群峰宁勇吴晓明周宜开
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性化学发光
- 苯并(a)芘对肺癌细胞DNA损伤及修复基因表达水平的影响被引量：9
- 2002年
- 目的 探讨苯并 (a)芘 (BaP)对肺癌细胞DNA损伤及核酸切除修复 (NER)基因———着色性干皮病B、C、G基因 (XPB、XPC、XPG)和切除修复交叉互补基因 1 (ERCC1 )表达的影响。方法 以噻唑蓝(MTT)法检测BaP对细胞的毒作用 ,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测基因表达水平。结果 BaP(0 .62 5～ 2 0 .0 0 0 μmol/L)处理肺癌A549细胞 2 4h ,细胞生存力从 95.0 %降至 70 .0 %。1 0 μmol/LBaP处理 1 2、2 4h ,细胞生存力分别降至 87.0 %、73.0 % ,DNA损伤逐渐加重 ;BaP染毒2 4h后孵育 1 2h ,细胞生存力降至 59.0 % ,DNA损伤最严重 ;继续孵育至 2 4h ,细胞生存力恢复至 71 .0 % ,DNA损伤逐渐修复。BaP处理引起XPB和XPC基因表达升高 ,在染毒 2 4h和染毒后 1 2h达峰值 ,分别为基底水平的 4.5和 1 1 .2倍 ,随后逐渐下降 ;XPG和ERCC1基因在染毒期间表达下降 ,染毒结束后逐渐恢复。结论 BaP导致肺癌A549细胞DNA损伤 。
- 吴晓明周宜开王志勇郝巧玲任恕
- 关键词：DNA损伤苯并(A)芘RT-PCRDNA修复
- 核苷酸切除修复基因XPB反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究被引量：3
- 2003年
- 背景与目的:核苷酸切除修复机制是细胞修复损伤DNA的重要途径,肿瘤细胞的耐药常伴随DNA损伤修复基因表达增强,采取反义策略降低细胞的DNA损伤修复能力可以增加肿瘤细胞的药物敏感性。本研究拟构建能在哺乳动物细胞中表达XPB反义RNA的表达质粒pcDNA-XPB/AS(XPB:着色性干皮病B基因),并初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及抗肿瘤药物耐药性的影响。方法:采用RT-PCR技术扩增的XPBcDNA5'端一段69～520bp的序列被反向插入表达质粒pcDNA3.1/His。将该重组质粒瞬时转染肺癌A549细胞。单细胞凝胶电泳(SCGE)比较阿霉素诱导的转染前后细胞DNA损伤修复情况。MTT法检测转染前后细胞对阿霉素的敏感性。结果:酶切图谱分析和基因测序证实反义表达质粒构建成功。RT-PCR显示转染细胞XPBmRNA表达水平下降。以4.0μg/ml阿霉素诱导细胞DNA损伤,SCGE显示转染细胞修复DNA损伤能力受到抑制。MTT显示未转染细胞与转染细胞对阿霉素的敏感性存在差别,但无统计学意义。结论:构建的反义表达质粒能下调转染细胞XPBmRNA表达,抑制细胞DNA损伤修复能力,为进一步研究XPB基因功能奠定了基础。
- 周李承蒋易吴晓明郝巧玲任恕周宜开
- 关键词：药物敏感性肿瘤细胞
- 核苷酸切除修复基因XPA反义RNA增强肺癌细胞对顺铂的敏感性被引量：7
- 2005年
- 背景与目的:目前认为,肿瘤细胞自身核苷酸切除修复(nucleotideexcisionrepair,NER)能力增强是肿瘤细胞产生耐药性最重要的机制之一。着色性干皮病A(xerodermapigmentosungroupA,XPA)基因在核苷酸切除修复早期发挥核心作用。本研究拟探讨XPA基因表达与肺癌细胞株对顺铂敏感性的关系。方法:将XPA的反义RNA稳定转染人肺癌细胞株A549,用有限稀释法筛选阳性细胞克隆。分别用Northernblot和Westernblot法检测阳性细胞克隆XPAmRNA和蛋白水平;MTT法检测肿瘤细胞对顺铂敏感性;宿主细胞再活化反应(hostcellreactivation,HCR)检测肿瘤细胞DNA损伤修复能力。结果:筛选得到6个阳性克隆AS1～AS6,其中AS3～AS6细胞克隆的XPAmRNA和蛋白水平均明显降低。剂量依赖实验表明,顺铂对A549细胞与AS1～AS6细胞克隆的半数抑制浓度(IC50)分别为8.1、7.6、4.7、3.2、1.9、2.8、4.1滋g/ml。统计学分析表明,与A549细胞相比,AS3～AS6细胞对顺铂的敏感性明显增强(F=9.75、9.14、7.39、8.91,P=0.005、0.006、0.012、0.006),而且XPAmRNA表达水平与细胞IC50值呈显著相关(r=0.927,P=0.003)。处理24、48、72h后,AS3～AS6细胞对顺铂的敏感性同样显著增强。HCR实验结果表明,AS3～AS6细胞的NER能力显著减弱,而且XPAmRNA表达水平与细胞NER能力呈?
- 范玮张海龙吴晓明
- 关键词：顺铂肺癌细胞敏感性反义RNA核苷酸切除修复
