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成人自体心肌干细胞体外高效扩增及特异性鉴定: 2012年; [目的]建立一种稳定、高效的成人自体心肌干细胞体外培养扩增及特异性鉴定方法。[方法]手术中取下的心脏组织标本,通过胶原酶消化的方法获得细胞,使用自体血清进行贴壁培养和传代的方法纯化细胞,细胞增殖至3代后进行RT-PCR基因表达检测,流式细胞表面标记检测及染色体核型分析的鉴定。[结果]通过本实验的方法可以在成人心肌组织中分离和纯化心肌干细胞,并在体外可大量增殖,至3代细胞可增殖至5×107。RT-PCR鉴定其具有全能干细胞因子Nanog、Oct-4、Sox-2、Rex-1的mRNA表达,及心肌转录因子Nkx2.5和GATA4的mRNA和蛋白表达;表达间质干细胞表面标记CD29、CD90、CD105;不表达造血干细胞表面标记CD45和人免疫抗原HLA-DR;且培养后46条染色体无移位和缺失等染色体突变。[结论]通过本研究确立了一种稳定、高效的成人自体心肌干细胞体外培养,扩增和特异性鉴定的方法,为自体心肌干细胞移植技术的临床应用奠定重要的基础。; 纪军张利桑丽敏林海龙何学志吴园园颜培实孙喜琢; 关键词：自体组织心肌干细胞流式细胞术核型分析

传染性单核细胞增多症和传染性单核细胞综合征患儿PD-1以及Tregs差异比较被引量：2: 2021年; 目的探讨传染性单核细胞增多症(IM)患儿和传染性单核细胞综合征(IMS)患儿程序性死亡受体1(PD-1)以及调节性T细胞(Tregs)的差异。方法选择2016年1月至2019年9月大连市中心医院儿科收治的IM患儿40例与IMS患儿40例为观察对象。IMS组男24例,女16例,年龄(5.11±4.07)岁;IM组男22例,女18例,年龄(8.33±5.32)岁。流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群百分数、Tregs细胞百分数以及CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞PD-1的表达水平。希森美康XE-2100进行外周血细胞分类检测,用奥林巴斯显微镜进行异型淋巴细胞计数,采用散射比浊法检测血清免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgA,补体C3和C4水平。结果IM组外周血CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分数、CD3^(+)T细胞百分数、CD8^(+)PD-1^(+)细胞百分数、PD-1^(+)细胞百分数、白细胞计数[(17.83±8.81)比(7.81±4.82)×10^(9)/L]、淋巴细胞百分数[(63.49±15.61)%比(44.21±13.80)%]、淋巴细胞绝对值[(10.29±2.91)比(3.28±1.63)×10^(9)/L]、异型淋巴细胞百分数[(19.23±11.24)%比(0.78±0.90)%]、抗体水平[IgG:(1314.86±408.14)比(874.46±222.10)mg/dl,IgA:(206.53±81.31)比(10^(9).24±73.26)mg/dl]都较IMS组明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);而CD3^(+)CD4^(+)T细胞、Tregs细胞百分数和补体水平[补体C3:(85.52±8.53)比(103.85±13.01)mg/dl;补体C4:(20.84±1.31)比(28.36±6.81)mg/dl]较IMS组明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论IM患儿较IMS患儿免疫细胞PD-1的表达明显增高,Tregs明显下降,为临床鉴别诊断以及疾病治疗提供依据。; 吴园园潘艳艳蔡红娇纪军张利; 关键词：传染性单核细胞增多症免疫功能 TREGS PD-1

Doranidazole对结肠癌细胞的放射增敏作用: 2007年; 目的观察放射增敏剂-Doranidazole对结肠癌细胞的放射增敏作用。方法对5种人结肠癌细胞系施行2～50Gy不同剂量放射线照射，照射后1—5d检测细胞生长及死亡率，通过克隆形成实验绘制细胞存活曲线。从时间、剂量相关性、凋亡诱导等方面评价增敏效果。结果Doranidazole对照射后细胞的生长起到显著的抑制作用，其放射增感比为1．79；5种结肠癌细胞经30Gy放射线照射后分别引起的18．7％、21．9％、16．7％、15．7％、19．5％的细胞死亡率，因Doranidazole的添加而增高至36．4％、33．8％、28．9％、22．2％、27．0％，并诱导了细胞的凋亡。这种增敏作用具有显著的时间和剂量相关性。结论Doranidazole对人结肠癌细胞系具有明确的放射增敏效果。; 张利宫爱民纪军吴园园朱晓钰孙喜琢; 关键词：结肠肿瘤照射脱噬作用

TNF-α、CK20在结肠癌淋巴微转移中表达关联性的研究被引量：3: 2010年; 目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA和细胞角蛋白20(CK20)mRNA在结肠癌患者淋巴结中的表达情况,探讨二者与结肠癌淋巴微转移的关系。方法选取手术切除并经病理证实的30例结肠癌患者,收集淋巴结共计398枚,采用连续切片和RT-PCR法,检测淋巴结中微转移灶的存在情况和TNF-αmRNA、CK20 mRNA的表达情况。结果连续切片结果显示,在常规病理无转移的淋巴结中有20.2%的淋巴结存在微转移,TNF-αmRNA和CK20 mRNA的表达与连续切片的检查结果基本吻合,三者之间具有良好的关联性。TNF-αmRNA和CK20mRNA的表达在转移阳性淋巴结中表达高于转移阴性淋巴结,且随Dukes分期加深而增高。结论TNF-αmRNA和CK20 mRNA均可以准确反映结肠癌淋巴微转移的情况,TNF-α可能在结肠癌淋巴微转移的过程中起重要作用。; 贾友鹏王忠裕吴园园赵俊军赵德明徐晧; 关键词：结肠肿瘤淋巴转移肿瘤坏死因子角蛋白逆转录聚合酶链反应

肿瘤坏死因子-α、细胞角蛋白20在结肠癌浸润中作用的研究被引量：2: 2008年; 目的研究TNF-α和细胞角蛋白20（CK20）在结肠癌患者组织中的表达和相关性，及与肿瘤生物学行为的关系。方法选取手术切除并经病理检查证实为结肠癌患者30例，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法，检测结肠癌患者癌组织、癌旁组织、切缘组织中TNF—α mRNA和CK20mRNA的表达情况。结果癌组织、癌旁组织、切缘组织中TNF-α mRNA阳性表达率分别为70．0％、43．3％、20．0％，三者之间比较及每两者之间比较差异均有统计学意义（P〈0．01）；CK20 mRNA阳性表达率分别为63．3％、33．3％、16．7％，三者之间比较差异有统计学意义（P〈0．01），但在癌旁组织和切缘组织之间表达差异则无统计学意义（P〉0．05）。TNF-α mRNA和CK20 mRNA在三种组织中的表达具有良好的相关性。TNF-α mRNA和CK20 mRNA与结肠癌分化程度无关（P〉0．05），但TNF-α mRNA与结肠癌Dukes分期、侵犯肠壁范围密切相关（P〈0．05）。结论 TNF-α mRNA可以作为反映结肠癌浸润、侵袭能力的客观指标。; 贾友鹏王忠裕张利吴园园; 关键词：结肠肿瘤肿瘤坏死因子Α 逆转录聚合酶链反应

急性冠状动脉综合征患者血清同型半胱氨酸检测的临床意义被引量：5: 2012年; 目前以急性心血管事件为主的心血管疾病已成为危害人类生命和健康的头号杀手。据估计2009年美国约有70多万人新发心血管疾病,因此心血管疾病的诊断和预防成为医学领域重要的研究课题之一。急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）可分为不稳定型心绞痛（UA）、急性心肌梗死（AMI）和心源性猝死。; 吴园园李志; 关键词：急性冠状动脉综合征血清同型半胱氨酸急性心血管事件不稳定型心绞痛

PTEN基因的克隆及其在HepG2细胞中的表达被引量：2: 2006年; 目的克隆人抑癌基因PTEN全长cDNA,构建其真核表达载体并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法采用RT-PCR法从人正常肝组织中扩增PTEN全长cDNA,将之与pMD18-T Simple Vector连接、测序,获得PTEN基因。将该基因与pcDNA3·1(+)载体连接,构建pcDNA3.1-PTEN真核表达载体。用该载体转染HepG2细胞,RT-PCR检测PTEN的表达。结果酶切和测序证实PTEN基因克隆和真核表达载体构建成功。HepG2-PTEN细胞中PTEN mRNA的表达显著高于未转染的HepG2细胞。结论人抑癌基因PTEN在人肝癌细胞系HepG2细胞中能够高效、稳定地表达,为其在肝癌基因治疗研究中的应用奠定了基础。; 吴园园张利肖继贤朱晓钰纪军孙喜琢张众; 关键词：肿瘤抑制基因 PTEN基因分子克隆真核表达载体

糖尿病肾病患者血清胱抑素C检测的临床价值: 2012年; 糖尿病肾病（DN）是糖尿病最常见及最重要的慢性并发症之一,也是其致残致死的重要原因。DN早期常无临床症状,尿常规检查或肾功能检查多未能发现异常,一旦出现典型临床症状则预后相对较差.; 吴园园李志; 关键词：糖尿病肾病患者血清胱抑素C 慢性并发症肾功能检查尿常规检查

PINK1在人卵巢癌细胞系SKOV3增殖及顺铂诱导细胞死亡中的作用: 2018年; 目的研究线粒体丝苏氨酸蛋白激酶PINK1(PTEN induced putative kinase 1)在卵巢癌细胞生长增殖中的作用,及其表达在顺铂诱导细胞死亡中的作用。方法转染并用G418筛选稳定表达pcDNA3.1-PINK1及pcDNA3.1的SKOV3细胞系,细胞设3组:正常培养组、转染空质粒pcDNA3.1组,过表达PINK1组。采用实时定量PCR检测各组细胞PINK1 m RNA的表达,MTT和流式细胞仪检测各组细胞生长增殖及细胞周期分布情况。观察PINK1在顺铂(DDP)诱导卵巢癌细胞死亡中的作用,并检测耐药基因MDR1、MRP1以及ABCG2在各处理组中的表达水平。结果过表达PINK1的SKOV3细胞系PINK1 m RNA的表达水平显著高于正常培养组及转染空质粒pcDNA3.1组细胞(P<0.05)。过表达PINK1组较其他两组细胞增殖率显著提高,细胞进入S和G2/M期比例增加(P<0.05)。过表达PINK1显著抑制了10μmol/L和20μmol/L顺铂诱导细胞死亡,并诱导了耐药基因MDR1、MRP1和ABCG2的表达升高。结论上调PINK1的表达可促进卵巢癌细胞增殖,降低细胞对顺铂作用的敏感性并诱导耐药基因的表达。; 高雁艳纪军吴园园潘艳艳张利; 关键词：卵巢癌顺铂耐药性

血清胃蛋白酶原检测对消化性溃疡的临床诊断价值被引量：3: 2012年; 目的探讨血清中胃蛋白酶原(PG)含量对消化性溃疡的临床诊断价值。方法选取2011年3至2011年9月我院收治的因"上消化道症状"行胃镜检查确诊为消化性溃疡的消化内科患者46例作为研究对象,用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法检测对这46例消化性溃疡患者及20例正常人的血清PG含量进行统计学比较,并将临床资料进行回顾性的分析。结果消化性溃疡患者与正常组相比PGI、PGII均升高,且PGII增高较明显,有统计学差异(P<0.01),而PGI/PGII比值下降。结论血清PG的增高可作为消化性溃疡的危险因素,是溃疡病的诊断和疗效观察的一项血清学指标。; 吴园园李志; 关键词：胃蛋白酶原时间分辨荧光免疫分析法消化性溃疡

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