叶茂
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
- 供职机构：浙江海洋学院海洋科学学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学天文地球更多>>
- 厚壳贻贝足腺cDNA文库的构建及部分EST序列分析被引量：4
- 2010年
- 为获得厚壳贻贝足腺组织的EST序列标签以及可能的功能基因序列,以pCMVsport6质粒为载体构建了高质量的厚壳贻贝足腺组织cDNA文库,文库滴度为1.31×107pfu/mL,重组率为98%,平均插入片段为1.3kb.通过对文库部分克隆的序列测定,获得了11个新基因和17个功能基因,其中包括部分与厚壳贻贝足丝相关的基因.厚壳贻足腺组织cD-NA文库的成功构建为将来筛选与厚壳贻贝足丝蛋白相关的新基因,系统研究其黏附机制奠定了基础.
- 鲁涛廖智刘梅武梅叶茂王日昕
- 关键词：厚壳贻贝CDNA文库EST
- 舟山海域外来物种地中海贻贝的自然分布现状及生态影响被引量：2
- 2011年
- 以筛选的2个可鉴别的地中海贻贝(Mytilus galloprovincialis)、厚壳贻贝(M.coruscus)及其杂交后代的PCR标记(扩增核基因Glu-5’特异片段PCR标记Me14/Me17和延伸因子1α第一个内含子区段PCR标记引物EFbisF/EFbisR),对舟山海域3个贻贝主产区(马鞍列岛海域、浪岗山列岛海域、中街山列岛海域)采集的贻贝样本的种类进行鉴别.研究结果显示:100个马鞍列岛海域贻贝个体和30个中街山列岛海域贻贝个体均为厚壳贻贝;而54个浪岗山列岛海域贻贝样本中,16个个体(29.6%)为厚壳贻贝,38个个体(70.4%)为地中海贻贝;3个群体中均未检测到2种贻贝的杂交个体.因此,推测舟山海域地中海贻贝自然分布仅局限于局部海区,但在适宜的海区地中海贻贝可取代厚壳贻贝成为贻贝床的优势物种,舟山海域贻贝床的动态变化值得进一步关注;贻贝样本中没有检测到地中海贻贝与厚壳贻贝的杂交个体,表明调查海域可能没有杂交贻贝分布或数量极少,地中海贻贝通过杂交、基因渐渗污染厚壳贻贝基因组的风险较小.
- 申望叶茂王日昕石戈赵淑江
- 关键词：海洋生物学外来物种厚壳贻贝自然分布生态影响舟山海域
- 三疣梭子蟹血细胞全长cDNA文库构建及EST初步分析被引量：5
- 2010年
- 三疣梭子蟹是我国沿海重要养殖品种之一,近年来养殖病害呈逐年上升趋势,制约了三疣梭子蟹养殖产业的健康可持续发展。为大规模克隆三疣梭子蟹免疫相关基因,研究其免疫基因的功能和免疫机制,奠定三疣梭子蟹病害防治理论基础,采用SMART技术构建了三疣梭子蟹血细胞全长cDNA文库。经测定,文库滴度为1.14×107pfu/mL,文库总容量为5.7×107pfu,重组率达到98%,插入片段平均长度为817.5 bp。文库随机测序获得的70个全长cDNA,从中发现18个已知基因和5个未知基因。已知基因主要为多肽/蛋白质合成相关基因,共9个;免疫相关基因4个,分别是抗菌肽hyastatin、C-reactive prote in-1、profilin和m asquerade-like prote in,且4个免疫相关基因共有48个克隆,占测序总克隆的68.6%,表明血细胞中免疫相关基因表达非常活跃。研究结果证实,构建血细胞全长cDNA文库是大规模克隆三疣梭子蟹免疫相关基因的可靠途径,并为深入研究免疫相关基因的功能和免疫机制奠定基础。
- 申望叶茂石戈王日昕
- 关键词：三疣梭子蟹血细胞全长CDNA文库免疫相关基因表达序列标签
- 三疣梭子蟹Profilin基因全长cDNA的克隆与表达分析被引量：2
- 2010年
- 三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)是我国沿海重要养殖品种之一。近年来,养殖病害呈逐年上升趋势,制约了三疣梭子蟹养殖产业的健康可持续发展。克隆三疣梭子蟹免疫相关基因、研究免疫基因的功能和作用机制,可为三疣梭子蟹养殖病害的防治奠定基础。本研究从三疣梭子蟹血细胞全长cDNA文库中克隆了742bp的profilin基因全长cDNA。该profilin全长cDNA中开放阅读框长375bp,编码125aa。推导的三疣梭子蟹profilin理论等电点pI5.87,氨基酸序列与冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)profilin同源性最高,序列一致性为42.9%。荧光定量RT-PCR分析结果显示,在正常的三疣梭子蟹机体中,血细胞profilin表达水平最高,其次为肝胰脏;在致病菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)诱导后,血细胞中profilin表达量显著上升(P<0.01),表明profilin可能参与了三疣梭子蟹的免疫防御反应,是一个免疫相关因子。
- 申望叶茂石戈王日昕
- 关键词：三疣梭子蟹免疫基因克隆PROFILIN基因表达
- 日本蟳(Charybdis japonica)微卫星位点的分离及遗传多样性分析被引量：2
- 2011年
- 采用磁珠富集法,以生物素标记的(CA)12寡核苷酸为探针,构建了日本蟳基因组微卫星富集文库。通过PCR法从文库中共筛选出89个微卫星位点,其中完全型(perfect)共75个,占84.27%;不完全型(imperfect)12个,占13.48%;复合型(compound)2个,占2.25%。根据微卫星位点的侧翼序列,设计筛选出9对具有稳定多态性的微卫星引物,引物荧光标记后对日本蟳舟山群体进行遗传多样性分析。结果表明,9个微卫星位点的等位基因数为12—25;观察杂合度和期望杂合度分别为0.5806—0.9032和0.8383—0.9449;9个微卫星位点的PIC值为0.8092—0.9259。本研究筛选的9个微卫星位点可作为日本蟳遗传多样性、种群遗传结构等研究的理想分子标记。
- 叶茂申望王日昕郑兆祥石戈
- 关键词：日本蟳微卫星磁珠富集法
- 三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)Ⅰ型Crustin抗菌肽的基因克隆与真核重组表达被引量：6
- 2010年
- Crustin是目前报道广泛存在于甲壳类中的一类具有广谱抗菌活性的抗菌肽,主要由甲壳类血淋巴细胞合成。本研究采用RACE技术和真核表达技术,进行了三疣梭子蟹Crustin基因的克隆和重组表达研究。结果表明,在三疣梭子蟹血细胞Crustin基因cDNA全序列中,开放阅读框编码110个氨基酸残基的Crustin前体,Crustin前体由N端21个氨基酸残基的信号肽、富含Cys结构域和C端WAP结构域三部分组成,属于I型Crustin,构建的分泌型真核表达质粒pVT102U/α-crustin转化酿酒酵母S78,经RT-PCR和SDS-PAGE电泳验证,表明重组Crustin表达成功。
- 申望叶茂石戈王日昕
- 关键词：三疣梭子蟹抗菌肽CDNA克隆真核表达
- 厚壳贻贝低分子量足丝蛋白的初步鉴定(英文)被引量：3
- 2011年
- 足丝蛋白是贻贝科(Mytilidae)所特有一种在水环境中也能表现出强黏附功能的蛋白,也是目前开发新型生物黏附剂的主要候选分子。厚壳贻贝(Mytilus coruscus)广泛分布于我国东部沿海,是我国具有重要经济价值的贻贝,其足丝粗硬,黏附力强,关于厚壳贻贝的足丝蛋白的研究目前尚未见报道。通过醋酸抽提结合反相高效液相色谱分离,从厚壳贻贝足丝盘中分离纯化到数种低分子量足丝蛋白,经质谱鉴定和氨基酸序列测定,其中三种足丝蛋白(分子量6 kD左右)属于贻贝足丝蛋白-3(mytilus foot protein-3,mfp-3)家族,且序列中富含DOPA,另有三种足丝蛋白为未知新型足丝蛋白。石英晶体微天平分析表明,厚壳贻贝低分子量足丝蛋白在金表面有较强的吸附能力,这与其黏附功能是直接相关的。以上工作为深入了解厚壳贻贝低分子量足丝蛋白的分子多样性以及黏附机制奠定了基础。
- 鲁涛廖智刘梅叶茂谭亮王日昕
- 关键词：厚壳贻贝DOPA
- 三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)Pthyastatin抗菌肽基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2010年
- 采用构建三疣梭子蟹血细胞全长cDNA文库的方法克隆了一个新型抗菌肽基因Pthyastatin,并用荧光定量RT-PCR方法,进行Pthyastatin的表达研究。结果表明,Pthyastatin前体由16个氨基酸残基的信号肽和成熟肽两部分组成,其中Pthyastatin成熟肽有两个结构域:N端的富含Pro/Arg结构域和C端的包含6个保守Cys残基与对虾抗菌肽penaeidins同源的结构域,表明Pthyastatin属于对虾抗菌肽penaeidins家族;荧光定量RT-PCR分析结果表明Pthyastatin在血细胞中高水平组成型表达;致病菌副溶血弧菌诱导后Pthyastatin在血细胞中表达先下调、后上调,在诱导后24h表达量又基本恢复到诱导前水平,支持Pthyastatin在血细胞中高水平组成型表达的观点,但致病菌诱导后表达变化机制不明。
- 申望叶茂石戈王日昕
- 关键词：三疣梭子蟹血细胞抗菌肽MRNA表达
