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家蚕孵化酶样蛋白的表达、纯化与功能鉴定: 孵化酶是后生动物胚胎孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。前文我们报道了全长家蚕孵化酶样基因（BmHEL）（967bp）克隆及其转录特性,初步推定其参与了家蚕孵化行为。本文对该基因在原核表达系统表达、纯化及其对家蚕卵壳的降解...; 唐顺明卢福浩沈兴家王娜丁丽平赵巧玲张国政郭锡杰; 关键词：原核表达纯化; 文献传递

柞蚕孵化酶样基因的全长cDNA克隆及表达特征分析被引量：5: 2011年; 孵化酶是后生动物卵孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。基于生物信息学和RACE方法,从柞蚕胚胎中克隆了一个998 bp的孵化酶样基因全长cDNA,命名为ApHEL(GenBank登录号:JN205047)。ApHEL由15 bp 5'-UTR,98 bp 3'-UTR和885 bp ORF组成。ORF编码294个氨基酸残基,预测蛋白分子质量为33.51 kD,等电点为5.50。在ApHEL N-端存在16个氨基酸的信号肽。ApHEL蛋白酶功能区中含有锌结合序列(HEWMHILGFLHMQSTHNR)和Met-转角基序(YDYVSCLHY)等孵化酶保守功能区域。ApHEL与其他物种孵化酶氨基酸序列的相似度为30.0%～85.0%。基于孵化酶氨基酸序列的进化分析表明,柞蚕、家蚕、库蚊和果蝇聚为一类,亲缘关系较近。ApHEL在早期胚胎中没有转录,至催青第6天开始转录并维持较低水平,在催青第9天剧增至最高值直至孵化,显示ApHEL在柞蚕卵孵化过程中起重要作用。ApHEL在5龄期幼虫的中肠组织中特异性表达,暗示ApHEL可能还有其他生物学功能。; 唐顺明丁丽平沈兴家吴俊卢福浩周其明李喜升; 关键词：中国柞蚕孵化克隆

家蚕孵化酶样基因BmHEL的原核表达及蛋白纯化与功能鉴定被引量：4: 2010年; 孵化酶(hatchingenzyme,HE)是后生动物卵孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。在已完成全长967bp的家蚕孵化酶样基因(BmHEL)克隆及其转录特性分析的基础上,研究了该基因在原核表达系统的表达、产物纯化及其对家蚕卵壳的降解功能。以全长BmHEL质粒DNA为模板,用PCR方法分别获得了该基因的开放阅读框(BmHELORF,885bp)、缺失信号肽编码区(BmHELa,834bp)和推测成熟酶功能编码区(BmHELb,624bp)的3个片段,并亚克隆入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行表达。表达的3种外源蛋白均以包涵体形式存在,获得含有6×His-Tag标签的融合蛋白,其分子质量分别为33.4、31.8、24.0kD。通过Westernblot方法检测到了用Ni-NTA亲和层析柱纯化的目的蛋白。纯化复性后的3种孵化酶对家蚕卵壳底物有一定降解活性,其中BmHELORF的活性最高,BmHELb的活性最低。在pH7.1反应条件下3种酶的活性比pH9.5时高。研究结果在蛋白质水平上进一步证实家蚕孵化酶样蛋白参与了蚕卵孵化这一重要生命过程。; 唐顺明卢福浩沈兴家王娜丁丽平赵巧玲张国政郭锡杰; 关键词：家蚕原核表达蛋白纯化降解

转基因方法获得家蚕Z染色体突变新种质初报: 为了建立家蚕转基因研究平台，为家蚕种质创新、重要基因功能分析和自主式家蚕生物反应器构建奠定基础，本文利用piggyBac转座子介导的显微注射法，获得5个报告基因EGFP转基因家蚕突变体，其中1个突变体后代呈现伴性遗传，将...; 唐顺明卢福浩沈兴家王娜赵巧玲张国政郭锡杰; 关键词：家蚕转基因突变基因显微注射

家蚕孵化酶样蛋白的表达、纯化与功能鉴定: 孵化酶是后生动物胚胎孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。前文我们报道了全长家蚕孵化酶样基因（BmHEL）（967 bp）克隆及其转录特性，初步推定其参与了家蚕孵化行为。本文对该基因在原核表达系统表达、纯化及其对家蚕卵壳的降...; 唐顺明卢福浩沈兴家王娜丁丽平赵巧玲张国政郭锡杰; 关键词：家蚕原核表达; 文献传递

转基因方法获得家蚕Z染色体突变新种质初报: 1.引言转基因是获得物种突变体的重要手段。随着生物技术的发展,在不同的物种中已经发展形成了较为成熟的转基因技术体系。蚕业生产普遍使用一代杂交种已近90年历史,现有的家蚕种质资源和常规育种手段已经难以进一步大幅度提高家蚕生...; 唐顺明卢福浩沈兴家王娜赵巧玲张国政郭锡杰; 文献传递

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卢福浩