- 抗β淀粉样肽40人单克隆抗体在昆虫细胞分泌表达被引量：1
- 2007年
- 目的通过杆状病毒昆虫细胞系统重组表达抗β淀粉样肽40人单克隆抗体,为全人抗体治疗阿尔茨海默病创造条件。方法将抗β淀粉样肽40人单链抗体重链可变区和轻链可变区分别克隆插入pAC-L-CH3的多克隆位点,构建成pAC-VH-VL表达质粒。将表达质粒和BaculoGold共转染SF9细胞后,用免疫荧光方法进行人IgG表达的检测。将感染重组杆状病毒的昆虫细胞培养液上清过蛋白A-琼脂糖亲和层析柱,洗脱纯化出的抗体经过SDS-PAGE电泳鉴定纯化蛋白质。结果杆状病毒昆虫细胞系统抗β淀粉样肽40人单克隆抗体表达质粒pAC-VH-VL构建成功。将表达质粒和辅助病毒感染昆虫细胞后可见昆虫细胞表达人抗体。经过蛋白A-琼脂糖亲和层析,从昆虫细胞培养基中纯化出抗β淀粉样肽40人单克隆抗体。结论通过基因工程手段在人抗Aβ40抗体可变区羧基端连接人抗体恒定区片段,通过杆状病毒昆虫系统分泌表达并纯化获得完整的人抗Aβ40单克隆抗体。
- 蔡炯郭瑜梁米芳李方刘飞王世真
- 关键词：阿尔茨海默病Β淀粉样肽昆虫细胞
- Aβ单链抗体基因腺相关病毒载体的构建被引量：1
- 2009年
- 蔡炯刘飞李方王世真
- 关键词：阿尔茨海默病腺相关病毒单链抗体
- 阿尔茨海默病β淀粉样肽40人单链抗体的生物活性被引量：2
- 2007年
- 目的测定重组表达的抗β淀粉样肽(Aβ)40的人单链抗体的生物活性。方法通过基因重组表达方式获得抗Aβ40人单链抗体,应用常规ELISA和竞争性ELISA鉴定抗Aβ40人单链抗体的抗原结合活性,以人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞为模型检测抗Aβ40人单链抗体的神经元保护作用。结果重组表达的抗Aβ40的人单链抗体主要位于细菌不溶性内涵物中,经过尿素溶解和金属亲和层析纯化后具有结合Aβ40或Aβ42的活性。与Aβ42组相比,Aβ42加等摩尔抗体组可显著提高SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05)。与Aβ40组相比,Aβ40加等摩尔抗体组亦显著提高SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.01)。结论从大肠杆菌系统中重组表达的抗Aβ40人单链抗体可以部分对抗β淀粉样肽的神经毒性。
- 蔡炯李方刘飞王世真
- 关键词：单链抗体神经毒性SH-SY5Y
- 阿尔茨海默病人β淀粉样肽单链抗体的生物活性研究
- 目的:测定重组表达和纯化的抗β淀粉样肽40的人单链抗体的生物活性,为被动免疫治疗阿尔茨海默病奠定实验基础。方法:抗β淀粉样肽40的人单链抗体通过基因重组表达的方式获得。应用常规ELISA和竞争性ELISA鉴定纯化的β淀粉...
- 刘飞蔡炯李方张迎强王世真
- 文献传递
