刘陵波
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 调控CD_(95)的锤头状核酶抑制小鼠T细胞凋亡及杀伤活性的作用研究
- 2005年
- 张敏游泳童允洁陈智超刘陵波邹萍
- 关键词：T细胞凋亡杀伤活性移植物抗白血病小鼠GVL效应
- 抗Fas核酶抑制Fas介导的小鼠肝脏细胞凋亡的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 研究抗Fas锤头状核酶对原代培养的小鼠肝脏细胞Fas表达及其凋亡的影响。方法 采用胶原酶灌流法分离小鼠肝脏细胞 ,同时构建了针对FasmRNA的锤头状核酶真核质粒 ,经纳米载体Effectene将其导入肝细胞 ,通过RT PCR、Westernblot检测细胞Fas的表达 ,以Caspase 3活性检测试剂盒测转染前后细胞Caspase 3活性的变化 ,AnnexinⅤ FITC凋亡检测试剂盒测转染前后细胞凋亡 ,MTT法测细胞的增殖。结果 小鼠原代肝细胞上表达Fas ,抗Fas核酶能显著降低肝细胞上Fas水平 ,经抗Fas抗体作用后 ,转染核酶的细胞Caspase 3活性明显降低 ,该细胞增殖活性较对照组增强 ,而凋亡率明显降低。结论 抗Fas核酶能显著降低小鼠原代肝细胞上Fas的表达 ,使其免于Fas途径的凋亡。
- 张敏何伟刘芳邹萍刘陵波肖娟郭荣
- 关键词：FAS介导小鼠肝脏细胞细胞凋亡肝功能衰竭肝移植
- 锤头状核酶降低小鼠胰岛细胞经CD95途径的凋亡被引量：1
- 2005年
- 目的研究锤头状核酶通过调控CD95的表达,对小鼠胰岛细胞凋亡的影响;探索提高胰岛移植物存活率的新途径。方法体外构建针对CD95mRNA93位点的锤头状核酶(pU6-Rz93)和突变型核酶(pU6-dRz93)。采用Ⅴ型胶原酶消化法分离小鼠胰岛细胞,通过干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素1α(IL-1α)诱导其高表达CD95后,经钠米载体-Effectene将核酶转染至该细胞。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹检测(Westernblot)法检测胰岛细胞CD95的表达。胰岛细胞经抗CD95的抗体(JO2)作用后,以Caspase-3活性检测试剂盒检测转染前后细胞Caspase-3活性的变化;MTT法测细胞的增殖;Annexin-Ⅴ凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,并观察了各组细胞对细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤的反应能力。结果细胞因子可诱导小鼠胰岛细胞高表达CD95分子。转染pU6-Rz93组的胰岛细胞CD95的表达与转染空载体组和转染pU6-dRz93组相比,明显下降。经JO2处理后,转染pU6-Rz93组胰岛细胞的Caspase-3活性和凋亡率明显降低,细胞增殖活性和抵抗CTL杀伤的能力显著增强。结论针对FasmRNA93位点的锤头状核酶能显著抑制小鼠胰岛细胞CD95的表达,使其免于CD95途径的凋亡;为提高胰岛移植物的存活率提供了实验基础。
- 张敏刘芳刘陵波童允洁肖娟仲照东邹萍
- 关键词：锤头状核酶CD95小鼠白细胞介素1Α胰岛移植物胶原酶消化法
- 锤头状核酶抑制CTLL-2细胞凋亡而增强其对Yac-1细胞杀伤活性的实验研究被引量：4
- 2004年
- 目的 研究抗fas的锤头状核酶对小鼠细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)系CTLL 2细胞fas基因的表达及其介导的细胞凋亡抑制作用 ,探索供者淋巴细胞输注 (DLI)时增强T细胞抗白血病的新途径。方法设计并合成抗fas的锤头状核酶基因 ,将其导入CTLL 2细胞 ,通过RT PCR、Westernblot和流式细胞仪分别检测核酶对CTLL 2细胞fasmRNA和Fas蛋白表达的抑制 ,以MTT法检测CTLL 2细胞与Fas抗体结合后的增殖活性 ,以半胱天冬酶 3(caspase 3)活性检测试剂盒检测细胞caspase 3蛋白酶活性 ,以流式细胞仪检测细胞凋亡 ,以乳酸脱氢酶法检测CTLL 2细胞的体外杀伤活性。结果锤头状核酶基因导入CTLL 2细胞后 ,可使其表面的Fas表达降低达 5 0 % ,细胞经Fas抗体 (JO2 )处理后 ,与空白对照、转染空载体的细胞相比 ,转染核酶的细胞增殖活性增加了 1倍 ,caspase 3活性降低近 5 0 % ,而细胞的凋亡率显著降低 ,只有 37% ,且CTLL 2细胞的体外杀伤活性为对照组的 2倍。结论该核酶具有切割fas基因的良好活性 ,并可抑制Fas介导的CTLL 2细胞凋亡 ,增加该细胞存活率 ,从而增强对Yac 1细胞的杀伤活性。
- 张敏刘芳游泳何伟邹萍陈智超刘仲萍刘陵波
- 关键词：锤头状核酶FAS抗体细胞杀伤活性FAS基因体外杀伤活性酶基因
