刘永杰
- 作品数：90 被引量：364H指数：10
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 程序性细胞死亡的研究进展
- 1999年
- 综述了程序性细胞死亡（ＰＣＤ）的概念、形态学和生化特征以及相关基因、诱导因素和医疗作用等，阐明了程序性细胞死亡的研究，必将导致疾病新疗法的探索和问世。
- 刘永杰李庆章
- 关键词：程序性细胞死亡动物
- 鱼源无乳链球菌透明质酸酶的表达及抗原性分析被引量：3
- 2014年
- 透明质酸酶(HylB)是无乳链球菌重要的毒力因子。根据本实验室分离并公布在GenBank上的罗非鱼源无乳链球菌GD201008-001全基因组序列,PCR扩增获得长为2 346 bp,覆盖hylB保守功能区的基因片段。将该片段采用限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ消化后亚克隆至表达载体pET28a(+),经双酶切、测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行体外原核表达,获得88.5 ku的目的蛋白。将纯化后的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,经ELISA和Western blot鉴定该蛋白具有良好的免疫原性。
- 王兆飞郭长明陆承平刘永杰
- 关键词：透明质酸酶免疫原性
- 猪囊尾蚴的发育生物学及药物作用机理
- 该论文系统地研究了猪囊尾蚴的体内外发育规律以及药物对不同发育时期猪囊尾蚴的作用;借助光学显微镜和电子显微镜详细地观察了猪囊尾蚴的形态结构变化;采用原位末端标准技术,定性定量地检测了猪囊尾蚴细胞及宿主细胞凋亡情况;结合一氧...
- 刘永杰
- 关键词：猪囊尾蚴发育生物学细胞凋亡
- 文献传递
- 枯草芽孢杆菌guaB基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 2012年
- 克隆枯草芽孢杆菌guaB基因,构建穿梭表达载体,使其在大肠杆菌中获得表达,为构建鸟苷高产工程菌奠定基础。从枯草芽孢杆菌JSIM-G-518基因组扩增出guaB基因,将其连接到pMD19-T上,得到重组质粒pMD-guaB,进行测序和Blast比对分析。该重组质粒经PstI、BamHI双酶切,获得guaB片段连接至pHP13载体上,构建穿梭表达载体pHP13-guaB,并采用双酶切电泳进行鉴定。将该载体转化入大肠杆菌BL21中,通过SDS-PAGE电泳检测guaB基因的表达效果。克隆的guaB基因长度为1 510 bp,与GenBank登录的枯草芽孢杆菌同源性为99%,编码500个氨基酸,确认为控制IMP脱氢酶的基因。穿梭载体pHP13-guaB经双酶切后产生1 510 bp和4.9 kb两个期望的目的条带。SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量的大小为52.9 k,与预期的IMP脱氢酶分子量一致,且该目的蛋白的表达效果比对照组更明显。论文成功实现了枯草芽孢杆菌guaB基因在大肠杆菌中的表达。
- 郑惠华庞茂达薛玉玲孙梅华洵璐张一平刘永杰
- 关键词：枯草芽孢杆菌克隆
- 支气管败血波氏菌共培养对马链球菌兽疫亚种致病相关特性的影响
- 2023年
- 旨在探究犬的传染性呼吸道疾病常见病原支气管败血波氏菌(Brodetella bronchiseptica,Bb)与马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidimicus,SEZ)共培养对2种细菌各自致病生物学特性的影响。将相同浓度菌体的SEZ与Bb在PBS中共培养24 h,然后采用平板划线法分离共培养后的单菌落SEZ(SEZBb)和Bb(BbSEZ),比较共培养前后菌株的生物被膜形成能力、对上皮细胞的黏附能力、抗巨噬细胞吞噬能力、胞内存活能力以及感染小鼠的存活率和组织细菌载量等方面的差异。结果显示:共培养后,BbSEZ的细菌数量和致病生物学特性均无明显改变,但SEZBb较单独培养的SEZ在细菌数量上减少约67%,在生物被膜形成能力、对上皮细胞A549的黏附能力以及在巨噬细胞内的存活能力等方面均有显著提升,对小鼠的致病性增强,且大大提高了对脑组织的侵袭能力。研究结果为揭示多病原混合感染的致病机制奠定了基础。
- 刘佳宁曹亚宁常宇昕张晓丹赵丹刘永杰
- 关键词：马链球菌兽疫亚种共培养
- 无乳链球菌dnaJ基因缺失株的构建及其致病性研究被引量：3
- 2019年
- 为研究dnaJ基因序列与细菌致病力的关系,本研究构建了dnaJ基因缺失株和互补株,并对其致病性进行验证。参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号:NC_018646)目的基因序列分别设计引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通过融合PCR将两个片段连接到一起,构建dnaJ基因上、下游同源臂融合片段,PCR克隆含有启动子序列的dnaJ基因。将dnaJ基因上、下游同源臂融合片段和含有启动子序列的dnaJ基因分别连接链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET4s和pSET2,电转化GD201008-001感受态细胞,构建dnaJ基因缺失株ΔdnaJ和互补株CΔdnaJ。通过分析ΔdnaJ和CΔdnaJ的遗传稳定性与形态学变化对dnaJ上、下游基因转录的影响,以及生长速率和斑马鱼攻毒试验评价dnaJ基因对无乳链球菌毒力的影响。经PCR鉴定和测序证明,ΔdnaJ和CΔdnaJ构建成功;与野生株GD201008-001相比,ΔdnaJ和CΔdnaJ在细菌染色形态上均无明显差异,但ΔdnaJ在液体培养基中的生长速度明显减缓;dnaJ基因的缺失未对相邻基因的转录造成影响;ΔdnaJ对斑马鱼的毒力明显下降,对斑马鱼的LD 50为5.68×10 4 CFU,约是野生株的241倍。dnaJ基因对无乳链球菌的毒力有显著影响,本试验结果为进一步探究无乳链球菌dnaJ基因的功能提供了参考依据。
- 郭长明吴植吴双王永娟王安平刘广锦刘永杰朱善元
- 关键词：无乳链球菌基因缺失株毒力
- 应用iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选无乳链球菌鱼源株与人源株差异表达蛋白被引量：3
- 2018年
- 以斑马鱼和巨噬细胞作为体内、外感染模型,比较无乳链球菌鱼源株GD201008-001与人源株A909的致病性差异,利用iTRAQ技术和质谱分析技术进行差异表达蛋白鉴定,以期为揭示无乳链球菌不同宿主来源株致病机制提供新思路。实验通过测定菌株GD201008-001、A909的斑马鱼半数致死量和巨噬细胞吞噬率,比较二者致病性差异;提取全菌蛋白,经iTRAQ试剂标记后进行质谱鉴定,质谱数据用软件Mascot 2.2和Proteome Discoverer 1.4进行查库(Uni Prot数据库)鉴定及定量分析,并对差异蛋白进行GO功能注释和KEGG通路分析。结果显示,GD201008-001毒力显著高于A909;通过iTRAQ分析两株菌差异表达蛋白,发现差异蛋白涉及的生物学功能较为广泛,在鉴定出的368个差异表达蛋白中,GD201008-001中上调表达蛋白193个(比值>1.5),下调表达蛋白175个(比值<0.667)。生物信息学分析预测这些蛋白主要涉及26个生物学功能,14个通路,推测Clp X、Glm S和Cps IVK可能在两株菌致病性差异中发挥重要作用。本研究为阐明无乳链球菌不同宿主来源株致病性差异奠定了基础。
- 郭长明袁橙武彩红朱善元刘广锦陆承平刘永杰
- 关键词：无乳链球菌ITRAQ蛋白质组学
- 肌醇、唾液酸及岩藻糖代谢途径对嗜水气单胞菌致病性的影响被引量：2
- 2018年
- 【目的】调查肌醇、唾液酸以及岩藻糖代谢途径在嗜水气单胞菌感染宿主过程中对细菌致病性的影响。【方法】采用同源重组技术分别缺失嗜水气单胞菌NJ-35株的肌醇代谢相关基因iolC、唾液酸代谢相关基因nanA和岩藻糖代谢相关基因fucK,测定各缺失株对斑马鱼的半数致死量(LD_(50));将野生株与缺失株共感染鲫鱼,统计野生株和缺失株在不同组织中的细菌载量。【结果】各代谢相关基因的缺失均成功阻断了菌株对相应底物的降解能力。iolC的缺失导致菌株对斑马鱼的LD50升高近12倍,而nanA和fucK的缺失对LD50没有明显影响。野生株与iolC缺失株共感染鲫鱼,肝脏、脾脏和肾脏中野生株的载量显著高于缺失株,表现出明显的生长优势;nanA和fucK缺失株与野生株共感染鲫鱼,野生株和缺失株载量在各组织中均无明显差异。【结论】肌醇代谢途径在嗜水气单胞菌感染致病过程中发挥重要作用,而唾液酸和岩藻糖代谢途径对细菌无明显影响。
- 李首纲庞茂达董雨豪刘锦杨媛媛陆承平刘永杰
- 关键词：嗜水气单胞菌肌醇唾液酸岩藻糖基因缺失
- 嗜水气单胞菌Ⅲ型分泌系统ascV全长基因的克隆及其在不同菌株中的分布被引量：2
- 2013年
- 根据已发表的嗜水气单胞菌Ⅲ型分泌系统(TTSS)的ascV基因保守区核苷酸序列设计合成1对引物,以国内疫苗菌株J-1的基因组为模板,通过PCR扩增得到331bp保守基因片段,将目的片段进行测序。在此基础上,分4段克隆J-1株的ascV基因并进一步拼接,全长为2 166bp,同时PCR检测ascV基因在66株嗜水气单胞菌中的分布情况。测序分析发现,扩增出的J-1株ascV全长基因与嗜水气单胞菌AH-1、SSU、AH-3的同源性分别为97%、86%、86%,与杀鲑气单胞菌杀鲑亚种A449的同源性为86%,与温和气单胞菌的同源性为87%。PCR检测表明,64株能扩增出ascV基因的目的片段,包括2株无毒菌株,而在2株有毒菌株中却未能检测到,说明TTSS在嗜水气单胞菌致病机制上的作用值得进一步探讨。
- 王金星陆承平刘永杰
- 关键词：嗜水气单胞菌
- 抗H3N2亚型犬流感病毒重组犬源化抗体的制备及特性分析
- 2020年
- 由于异源抗体在宠物临床治疗中易引起宿主免疫排斥反应,因此制备基于本动物源的基因工程抗体显示了更大的发展优势和前景。为制备H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)的重组犬源化抗体scFv-Fc,采集CIV感染犬外周血淋巴细胞提取总RNA,利用PCR技术扩增IgG重链(VH)、轻链(VL)和Fc片段。利用重叠延伸PCR将VH和VL通过弹性肽链linker连接成单链抗体(scFv)片段,并转化大肠杆菌,挑取阳性菌测序。经分析筛选后,将目标scFv与Fc片段链接,构建scFv-Fc重组犬源抗体片段。经诱导表达,获得分子量约为50 kD的scFv和约为89 kD的重组抗体scFv-Fc。抗体活性测定结果表明,scFv能与CIV特异性结合,1 mg/mL scFv的ELISA效价为1∶210,血凝抑制(HI)效价为1∶27,中和抗体效价为1∶20。1 mg/mL scFv-Fc的HI效价为1∶26,ELISA效价1∶25,中和抗体效价为1∶20。本研究成功制备了针对H3N2亚型犬流感病毒的重组犬源scFv-Fc,为该病毒感染的治疗提供了物质基础。
- 韩德敏赵丹李思宇刘永杰
- 关键词：免疫学活性
