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人血清蛋白质组学方法的比较和优化被引量：3: 2007年; 目的:对人未做处理的血清以及去除白蛋白和免疫球蛋白G(IgG)血清的蛋白质组学方法进行比较和优化。方法:应用双向电泳(2-DE)方法分离了未做处理的以及去除白蛋白和免疫球蛋白G(IgG)的血清,比较优化了高温变性、水化液成份组成及泡胀方式等影响血清2-DE分离效果的因素,并用质谱分析鉴定未做处理和已处理血清的2-DE谱图中部分差异蛋白点。结果:得到了分辨率和重复性较好的2-DE谱图,未做处理的血清、去除白蛋白及IgG血清的平均蛋白质点分别为(482±18)个和(523±29)个,质谱分析了9个差异蛋白点,鉴定为8种蛋白质,其中7种为功能蛋白质。仅出现在未做处理血清中的蛋白有4种,分别是维生素A结合蛋白、可溶性尿激酶血纤维蛋白溶酶原激活剂受体、蛋白激酶1抗原、血清白蛋白。4种蛋白仅出现在去除白蛋白和IgG的血清中,分别是NADH脱氢酶辅酶β亚基、肌动蛋白结合蛋白M1、T细胞活性受体β链、血小板生长因子C。结论:去除高丰度蛋白可增加一些低丰度蛋白质的检出,但非特异性吸附会导致部分功能蛋白质的丢失。; 刘希成田真梁恒张霖陈阳; 关键词：双向电泳蛋白质组学血清

山茱萸作用鼠IgA肾病的肾组织差异蛋白质谱被引量：17: 2005年; 通过小鼠肾组织的双向电泳(2DE),发现单味中药山茱萸醇提物(FCE)作用鼠IgA肾病的肾组织差异蛋白质表达谱发生显著变化.比较IgA肾病和正常小鼠肾组织的2DE图,在1267个蛋白点中有664个匹配蛋白点,其中表达量差异在2倍以上的有263个,另有3种蛋白在IgA肾病肾组织中未被表达和1种蛋白特异表达.比较FCE服用前后鼠IgA肾病肾组织的2DE图发现,在原先差异表达的263个蛋白质中,用药后有147个显著地恢复正常表达,在IgA肾病3种未表达和1种特异表达的蛋白都恢复了正常表达,同时用药后新出现1种特异表达蛋白.该方法提示,这些差异和特异表达的蛋白质可能是IgA肾病和FCE药物作用的靶蛋白,FCE能有效地纠正小鼠IgA肾病可能是通过影响这些靶蛋白而起作用的.; 梁恒邢建宇刘希成黄黎明; 关键词：双向电泳蛋白质组 IGA肾病

急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药性的双向电泳分析: 2006年; 目的:研究急性早幼粒细胞白血病(APL)对全反式维甲酸(ATRA)治疗敏感和耐药患者的外周血淋巴细胞在蛋白质组水平上的差异。方法:采用双向凝胶电泳(2-DE)对敏感和耐药患者的外周血淋巴细胞进行蛋白质组差异分析。结果:ATRA敏感和耐药患者外周血淋巴细胞的2-DE平均蛋白质点分别为(746±57)和(617±41),敏感与耐药患者的2-DE相比,有16个蛋白点表达明显上调,22个明显下调。另有4个蛋白点(Mr/pI:24.6kD/8.05,32.3kD/5.17,22.3kD/6.51,25.1kD/7.09)在敏感患者中特异表达,5个蛋白点(Mr/pI:21.9kD/5.45,23.4kD/6.27,22.9kD/6.65,23.9kD/7.39,24.7kD/7.65)在耐药患者中特异表达。结论:结果提示这些差异表达的蛋白质可能与APL对ATRA耐药的机制有关,该研究有助于揭示APL对ATRA耐药机理和发现新的临床分子标志物。; 刘希成梁恒田真邢建宇; 关键词：双向电泳蛋白质组急性早幼粒细胞白血病外周血淋巴细胞

肾阳虚证候的人血清比较蛋白质组学分析被引量：37: 2007年; 利用双向电泳(2-DE)优化分离了除去高丰度蛋白(白蛋白和IgG)的老年体虚肾阳虚患者(以健康组为参照)的血清样本,对比分析pH4～7范围的2-DE谱图,肾阳虚患者和参照组的平均蛋白点分别为(393±32)和(455±19)个.其中肾阳虚证候表达量上调2倍(P<0.05)以上的蛋白点有26个,下调2倍以上的有33个.用质谱获得上述差异蛋白的肽质量指纹图谱,并经数据库检索共鉴定出了49种差异蛋白质,其中有10种在肾阳虚血清中特异表达,有6种在健康组血清中特异表达.蛋白功能分析发现,其中33种蛋白质的差异表达与肾阳虚证密切相关.蛋白质TCRβ及transthyretin的蛋白印迹实验验证了2-DE的结果.该研究结果为阐明中医肾阳虚证的机理提供了一条新途径.; 刘希成梁恒田真刘颖陈阳张霖; 关键词：双向凝胶电泳蛋白质组学血清肾阳虚证

小鼠肾脏组织的双向电泳被引量：29: 2004年; 对小鼠肾组织双向电泳(2-DE)实验中的样品保存、裂解液、胶条泡胀和染色等步骤研究发现:在-73℃,以液态保存的样品仍需尽量以相同的保存时间用于对比,或使用新处理的样品使2-DE图谱反映样品原先的蛋白质组成;优化的裂解液组成是尿素9.8mol/L、Tris40mmol/L、CHAPS40g/L、DTT23mmol/L、CA5g/L、PMSF1mmol/L和EDTA1mmol/L;胶条泡胀采用主动方式有利于大分子量蛋白质的2-DE分离;银染色过程中采用充分的水洗步骤使之获得背景鲜明的2-D图谱.在优化条件下,高分子区及碱性区蛋白质均得到理想分离,获得蛋白质点数达1491个,明显优于已有文献方法.; 梁恒邢建宇刘希成黄黎明; 关键词：双向电泳蛋白质组

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刘希成