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俞海洋: 作品数：19 被引量：60H指数：4; 供职机构：安徽医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目安徽高校省级自然科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>

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水牛干扰素α的可溶性原核表达、纯化及其抗病毒活性被引量：5: 2017年; 目的在E.coli中高效表达可溶性水牛干扰素α(recombinant bovine interferon alpha,r Bo IFNα),纯化后检测其抗病毒活性。方法采用RT-PCR方法从水牛肝脏总RNA中扩增IFNα基因,插入原核表达载体p ET-32a中,构建重组表达质粒p ET-32a-IFNα,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测后,使用His Trap^(TM) HP镍离子亲和层析柱进行纯化,并采用细胞病变抑法,在水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)/MDBK细胞滴定系统上检测其抗病毒活性。结果核酸测序结果显示,r Bo IFNα基因全长498 bp,与Gen Bank报道的牛IFNαC亚型基因核苷酸序列同源性为100%;表达的r Bo IFNα蛋白主要存在于破碎菌体的上清中,表达量约占菌体总蛋白的63.8%;纯化的r Bo IFNα纯度高达98.52%,能与牛IFNα多克隆抗体特异性结合,比活性为(3.6±0.2 5)×10~6 U/mg。结论成功在E.coli中高效表达了可溶性r Bo IFNα蛋白,纯化的蛋白具有较强的抗病毒活性,为其临床应用奠定了基础。; 李树启赵俊王利利俞海洋甘霖王明丽; 关键词：干扰素Α 原核细胞基因表达纯化抗病毒活性

脐带血血浆在人巨细胞病毒垂直传播中的作用被引量：1: 2012年; 目的了解合肥地区正常顺产新生儿先天性人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染情况,并探讨脐带血血浆在HCMV垂直传播中的意义。方法自合肥市妇幼保健院采集51份新生儿脐带血标本,将处理后得到的脐带血白细胞及血浆分别提取DNA后,进行HCMV UL55基因的巢式PCR检测,并随机抽取其中18份脐带血白细胞进行HCMV pp65抗原血症检测。结果 51份新生儿脐带血白细胞HCMV UL55 DNA阳性数为16份,阳性率为31.4%;同时进行检测的51份脐带血血浆HCMV UL55 DNA阳性数为17份,阳性率为33.3%,新生儿脐带血白细胞与血浆的标本阳性率差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。以新生儿脐带血白细胞HCMVUL55 DNA巢式PCR结果为标准,利用血浆巢式PCR检测的灵敏度为75.0%(12/16),特异度为85.7%(30/35),阳性预测值为70.6%(12/17),阴性预测值为88.2%(30/34)。随机抽取其中18份新生儿脐带血白细胞进行pp65抗原血症检测,阳性标本数为6份,阳性率为33.3%;与此18份血浆DNA巢式PCR结果相比较,两者差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。结论脐带血血浆在HCMV垂直传播中起携带并传播病毒的作用。; 葛俊俞海洋金艳沈国泉任鹏李法锦汪晓婷吉阳赵蕾江龙凤陈敬贤王明丽; 关键词：婴儿巨细胞病毒疾病传播

TSG-6对HCMV感染引起的TNF-α和IL-6表达水平的抑制作用被引量：2: 2016年; 目的研究肿瘤坏死因子α刺激基因-6（tumor necrosis factor α stimulated gene 6, TSG-6）在人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）感染所致的炎症过程中的作用及机制。方法用HCMV感染人胚肺成纤维细胞（MRC-5）和视网膜上皮细胞（ARPE-19），并设正常细胞对照组和灭活病毒感染组。采用qRT-PCR和Western blot检测各组TSG-6 mRNA和蛋白表达水平。将重组人TSG-6蛋白（recombinant human TSG-6 protein, rhTSG-6） 100 ng/ml作用于HCMV感染的MRC-5细胞作为rhTSG-6干预组，采用ELISA方法检测细胞培养物上清中TNF-α和IL-6表达水平，用IFA及Western blot检测NF-κB核定位及其蛋白表达水平，并设正常细胞对照和病毒对照。结果HCMV感染MRC-5细胞72 h时，TSG-6 mRNA表达量为细胞对照组的19倍，在感染96 h时TSG-6 mRNA表达达高峰，为细胞对照组的376倍；HCMV感染ARPE-19细胞96 h时，TSG-6 mRNA表达量为细胞对照组的15倍，在120 h时为细胞对照组的354倍。Western blot结果证实，TSG-6蛋白表达水平在相应时间点也随之升高。rhTSG-6作用于HCMV感染的MRC-5细胞后与病毒对照组相比，TNF-α、IL-6水平明显下降（P〈0.05），且TSG-6能抑制核转录因子（nuclear factor-kappaB, NF-κB）的核移位及蛋白的表达。结论TSG-6参与HCMV引起的炎症反应，抑制HCMV相关炎性因子水平的表达并影响NF-κB的核定位。; 姚瑶张文昌赵俊张业婷钟峰甘霖俞海洋陈敬贤王明丽; 关键词：人巨细胞病毒核转录因子-ΚB

重组鸡α干扰素抑制H9N2禽流感病毒在鸡胚中增殖的研究被引量：3: 2016年; 为检测重组鸡α干扰素（rChIFN-α）抑制H9N2禽流感病毒（AIV）在鸡胚中的增殖效力,本研究将rChIFN-α按其抗病毒效价高低分为4个组（10-7 U/mL、10-6 U/mL、10-5 U/mL和10^4 U/mL）,同时设置阴性对照组和病毒对照组。各实验组再依次按照给药时间不同又分为“先给药再接种病毒组”、“同时给药和接种病毒组”及“先接种病毒再给药组”3个小组进行试验,通过检测H9N2 AIV血凝效价的变化、H9N2 AIV HA基因拷贝数以及各组EID50评价rChIFN-α对H9N2 AIV增殖抑制效力。结果显示,除低剂量组以外,各剂量组与病毒对照组相比,结果均可以显著降低鸡胚尿囊液中H9N2 AIV的血凝效价（p〈0.01）,同时能够显著减少H9N2 AIV基因的拷贝数（p〈0.01）及显著降低EID50（p〈0.01）。表明中等剂量（10-5 U/mL）及更高剂量的rChIFN-α在鸡胚中能够显著抑制H9N2 AIV的增殖。本研究为rChIFN-α今后在临床中抗AIV治疗的实际应用提供了相关实验依据。; 赵雨周炜符修乐查映丽赵俊俞海洋王明丽; 关键词：鸡胚禽流感病毒 H9N2亚型

肠道病毒71型六安地区分离株VP1基因的生物信息学分析及B细胞表位预测被引量：10: 2012年; 目的对肠道病毒71型(EV71)VP1基因编码衣壳蛋白进行系统结构与功能预测,为制备EV71疫苗和诊断抗原的研究提供理论基础。方法基于编号为1404-Luan(CHN)-08的EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白的氨基酸序列,应用ProtParam、SigalP、TMPRED、Sosui、SOPMA、Phyre、Bepipred等生物信息学方法预测其信号肽、跨膜区、疏水性、二级结构、三级结构等性质和潜在的B细胞表位。结果 EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白没有信号肽,无跨膜区,是一个亲水性蛋白;VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,含有少量的α-螺旋,少见β-转角;VP1的三级结构中4～121氨基酸部分在蛋白表面形成一环状结构(VPl GH loop);EV71 VP1潜在的B细胞表位共有6个可能的抗原表位。其中,预测分值最高的线性表位区域位于157～177位氨基酸残基。结论成功预测了EV71六安地区分离株VP1二级结构、三级结构和B细胞表位,为制备EV71基因工程疫苗和诊断抗原的开发提供了理论基础。; 俞海洋陈伟倪德群常宏伟王林定汤仁树陈灵芝丁晓娟陈敬贤王明丽; 关键词：肠道病毒71型 VP1 B细胞表位

运用试卷分析加强医学微生物学题库建设的初探被引量：14: 2009年; 为了评估自建医学微生物学题库质量,运用现代考试分析方法对本校2006级临床医学专业医学微生物学考试成绩进行分析,结果表明题库试卷组成和信度均较好,建立了初步的题库质量评估体系,为改进教学质量和完善题库提供了参考。; 丁晓娟陈灵芝余莉刘伯玉俞海洋王明丽; 关键词：医学微生物学题库试卷分析信度区分度

人巨细胞病毒感染在血管新生中作用的研究进展: 2016年; 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在人群中感染普遍,通常人体在感染HCMV以后呈潜伏感染,仅对免疫功能低下的人群造成损伤,如艾滋病患者、干细胞治疗及器官移植患者[1-2]。近年来有研究显示[3-4],HCMV长期潜伏感染能够促进人体氧化应激反应,从而造成慢性损伤性疾病,例如心血管疾病、肿瘤形成和自身免疫性疾病。目前研究认为HCMV感染是参与加速血管疾病发生发展的重要原因之一,; 钟峰赵俊俞海洋王明丽; 关键词：人巨细胞病毒血管新生动脉粥样硬化

RTCA实时定量动态监测HCMV在MRC-5细胞上的增殖的研究被引量：1: 2016年; 目的采用实时细胞分析(RTCA)系统监测人巨细胞病毒(HCMV)在MRC-5细胞株上的复制增殖过程,评价此方法在动态监测病毒增殖中的应用价值。方法应用RTCA动态观察MRC-5细胞在不同阶段的生长指数(CI),选择合适的细胞浓度进行HCMV增殖的研究,同时采用传统的空斑形成试验和间接免疫荧光实验作为该方法学的比较和结果验证。结果选择MRC-5最适细胞浓度为0.5×105个/孔;与空斑试验及免疫荧光结果比较,半数细胞指数CI值对应时间(CIT50)与病毒初始滴度有良好的线性关系;同时CI值与病毒滴度随着时间的持续,显示出明显的负相关性(r=-0.977,P<0.05)。结论 RTCA技术可实时监测记录细胞生长状态,反应细胞贴壁、伸展,同时能实时定量监测HCMV增殖复制状况,数据客观可靠,为今后基础实验研究提供了新的实验技术和方法。; 张业婷钟峰姚瑶赵俊俞海洋张文昌陈敬贤王明丽; 关键词：人巨细胞病毒增殖

Acute Toxicity of Recombinant Porcine Interferon-alpha: 2009年; To observe the acute toxicity of recombinant porcine interferen-alpha （IFN-alpha） in mice and thus provide a basis for the clinical safety. [Method] According to the principles of acute toxicity, all the mice were divided into two major groups （intraperitoneally injected group and intramuscularly injected group） respectively at high dose, moderate dose and low dose. And the normal control group was also set up. Within 14 d after administration, the behavior of mouse and the degree of toxicity were continuously observed. The hematological indexes and biochemical indexes of blood were detected to obtain the preliminary toxicity data of the recombinant porcine IFN-alpha. And at the end of the experiment, mice were sacrificed for autopsy. [ Result] There was not significant difference in external performance, behavioral characteristics, body temperature, weight, pathological anatomy of visceral organs, hematological indexes and biochemical indexes between the experimental groups and the control group. [ Conclusion] The highest dose of porcine interferon （5.0 x 10s IU per mouse） in this experiment or the dose lower than this dosage should not have significant toxic effects on mice, and the recombinant porcine IFN-alpha is safe in clinical application.; 王兴满赵俊李京培刘伯玉汤仁树俞海洋胡勇王燕来王明丽; 关键词：MICE

两种细胞株检测重组犬α-干扰素效价的比较被引量：1: 2009年; 本研究采用人羊膜细胞WISH株和人喉癌上皮细胞Hep-2株,以微量细胞病变抑制法(CPE抑制法)对同批次的8组重组犬α干扰素样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所使用的标化重组人α干扰素为标准,将在两株细胞上所测结果进行比较。其检测的结果具有很好的相关性(r=0.9976,p>0.05),并且重复性较好。用结晶紫染色法评价干扰素效价能够准确地反应细胞的状态,所得结果准确、客观。表明Hep-2与WISH细胞测定结果没有差异,该方法可用于重组犬干扰素制品的效价测定。此外本研究还测定了最适试验条件如细胞浓度、接种用病毒滴度、加样方法等。; 胡勇俞海洋刘伯玉赵俊汤仁树陈伟沈杭梅杨王明丽; 关键词：效价 HEP-2细胞

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