目的 :探讨转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)对成骨细胞内炎性细胞因子IL-6表达的影响,及其发挥抗炎作用的机制。方法:20μg/m L牙髓卟啉单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide of Porphyromonas endodontalis,P.e-LPS)刺激人成骨肉瘤细胞系MG63,构建成骨细胞炎症模型。取不同浓度(5~20 ng/m L)的人重组蛋白生长因子TGF-β3和TGF-β1,分别与20μg/m L P.e-LPS共同作用于MG63细胞24 h后,利用实时荧光定量PCR检测细胞内IL-6 m RNA的表达,ELISA法检测培养液上清中IL-6的表达水平。以10 ng/m L TGF-β3预处理细胞30 min后,再与20μg/m L P.e-LPS共同作用20 min,Western印迹法检测细胞内ERK1/2蛋白磷酸化的表达。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实时荧光定量PCR结果显示,单独20μg/m L P.e-LPS作用下,MG63细胞内IL-6的表达显著增高(P<0.01);TGF-β1在低浓度条件下(5~10 ng/m L)对IL-6的表达无显著作用,仅在20 ng/m L时可显著抑制IL-6的表达(P<0.05)。不同浓度的TGF-β3与P.e-LPS共同作用均可显著抑制IL-6的表达(P<0.01)。ELISA结果显示,10~20 ng/m L TGF-β3可在蛋白水平上对IL-6有显著抑制作用(P<0.05)。单独P.e-LPS作用时,可使MG63细胞内ERK1/2蛋白的磷酸化水平升高(P<0.01);而当TGF-β3与P.e-LPS共同作用时,ERK1/2的磷酸化被抑制(P<0.05)。结论:相同浓度条件下,TGF-β3比TGF-β1对成骨细胞炎症的抑制作用更为显著,ERK1/2信号机制参与了TGF-β3的抗炎过程。
目的 :探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生白介素34(interleukin-34,IL-34)m RNA表达的影响及此过程是否有p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1蛋白的参与。方法:以不同浓度P.e-LPS(0~50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞和以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0~24 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测IL-34 m RNA的表达。以同样方法检测NF-κB抑制剂BAY 11-7082、p38MAPK抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059、沉默调节蛋白1(sirtuin1,SIRT1)激动剂白藜芦醇(resveratrol,RES)和SIRT1抑制剂EX-527对P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后IL-34 m RNA表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果 :不同浓度P.e-LPS(0~50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞后,IL-34 m RNA的表达具有剂量依赖性。20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞24 h时,IL-34 m RNA的表达量最大;48 h时,IL-34 m RNA的表达量有所下降。10 mol/L BAY-117082、SB203580、PD98059预处理细胞1 h,可以降低P.e-LPS诱导的IL-34 m RNA的表达水平。50 mol/L RES下调P.e-LPS诱导小鼠成骨细胞表达IL-34 m RNA,而10 mol/L EX-527则上调IL-34 m RNA的表达。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞表达IL-34 m RNA,其机制可能是激活p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1信号通路。
